miR-10a-5p敲低通过靶向THBS2抑制胃癌细胞的生长和转移

背景在胃癌(gastric cancer, GC)的发病和进展中,已经发现许多miRNAs可发挥抑癌或促癌的作用.但miRNAs数量众多,在GC中仍有众多miRNAs的作用并不明确,因此,继续筛选具有影响GC细胞生长和转移的miRNAs仍十分必要.目的探究miR-10a-5p对GC细胞生长和转移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-q PCR)检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中miR-10a-5p表达;miR-10a-5p-inhibitor转染入MGC-803和AGS细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.采用Western-blot和RT-q PCR检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中THBS2表达;采用Target Scan在线软件筛选miR-10a-5p的潜在靶基因THBS2,并进一步验证. NC+pc DNA-Con, miR-10a-5pinhibitor+pc DNA-Con和miR-10a-5p-inhibitor+pc DNATHBS2共转染入MGC-803细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.结果miR-10a-5p在GC组织,MGC-803和AGS细胞中表达异常上调; miR-10a-5p敲低显著降低了MGC-803和AGS细胞的增殖,集落形成和侵袭.THBS2m RNA和蛋白水平在GC组织、MGC-803和AGS细胞中表达均异常下调; THBS2是miR-10a-5p的靶基因;过表达THBS2能逆转miR-10a-5p敲低对MGC-803细胞增殖,集落形成,迁移和侵袭的抑制作用.结论miR-10a-5p敲低通过靶基因THBS2来抑制GC细胞的生长和转移.     

LncRNA NEAT1靶向miR-520b调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)核富集的转录物(NEAT)1对人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC中NEAT1、短链非编码RNA(miR)-520b的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1)、miR-520b组(转染miR-520b mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(si-NEAT1和anti-miR-NC共转染)、si-NEAT1+anti-miR-520b组(si-NEAT1和anti-miR-520b共转染),用脂质体法转染至Tca8113细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与HOEC相比,Tca8113中NEAT1表达显著升高,miR-520b表达显著降低(P0.05);抑制NEAT1、过表达miR-520b均可抑制Tca8113细胞增殖,促进凋亡和自噬。抑制miR-520b可逆转抑制NEAT1对Tca8113细胞的增殖抑制和凋亡、自噬促进作用。结论抑制NEAT1可抑制口腔鳞癌细胞增殖、促进凋亡和自噬,其机制可能与靶向miR-520b有关,将可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。     

沙利度胺通过miR-29c-3p/TGIF2途径调控血管内皮细胞增殖凋亡的分子机制

目的研究沙利度胺对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用qRT-PCR检测沙利度胺处理的HUVECs细胞中miR-29c-3p、同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2的表达;miR-29c-3p组(转染miR-29c-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、沙利度胺+anti-miR-29c-3p组(转染anti-miR-29c-3p再用沙利度胺处理)、沙利度胺+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC再用沙利度胺处理)、si-con组(转染si-con)、si-TGIF2组(转染si-TGIF2)、沙利度胺+pcDNA组(转染pcDNA再用沙利度胺处理)、沙利度胺+pcDNA-TGIF2组(转染pcDNA-TGIF2再用沙利度胺处理)均用脂质体转染至HUVECs,再用20μg/ml沙利度胺处理48 h;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中TGIF2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组HUVECs细胞相比,沙利度胺处理的HUVECs增殖显著下降,细胞凋亡率和miR-29c-3p的表达明显上升(P0.05);过表达miR-29c-3p、敲减TGIF2均可抑制HUVECs增殖,促进凋亡;抑制miR-29c-3p、过表达TGIF2均可逆转沙利度胺对HUVECs的增殖抑制和凋亡促进作用。miR-29c-3p靶向TGIF2。结论沙利度胺可抑制血管内皮细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与调控miR-29c-3p/TGIF2信号通路有关,为沙利度胺用于疾病治疗提供依据。     

担载丝裂霉素纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响

目的评价担载丝裂霉素的可生物降解载药纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法采用胰酶消化后人工计数法及MTT法检测对T24细胞增殖率的影响;采用Western印迹方法检测细胞周期素依赖激酶(cyclin dependent ki-nase4,CDK4)、WAF1/p21、细胞周期蛋白(cyclin D1)的含量变化。结果 (1)与空白对照组相比,2、4、8 mg的担载丝裂霉素的纳米纤维在24 h后显著地降低了T24细胞数目;载药纤维以剂量-时间依赖的方式,使细胞存活率(OD值)显著下调。(2)随载药剂量逐渐增加,WAF1/p21含量增加,cyc-lin D1和CDK4蛋白含量逐渐降低。结论 (1)担载丝裂霉素的纳米纤维材料以时间和剂量依赖的方式能显著地抑制T24细胞的增殖。随药物剂量升高(0.1～0.8 mg),作用时间延长(12～48 h),抑制作用增强。(2)担载丝裂霉素的纳米纤维对细胞周期相关蛋白的影响表现为剂量依赖的方式(药物剂量0.1～0.8 mg),显著地增强了WAF1/p21的表达,降低了cyclin D1和CDK4的表达。     

PPARα在动脉粥样硬化斑块中作用及机制的研究

目的:观察动脉粥样硬化斑块形成过程中PPARα表达变化,探讨PPARα的作用机制。方法:将新西兰白兔随机分为7组:正常组(A)、高脂第6周组(B)、高脂第8周组(C)、高脂第10周组(D)、高脂+球囊损伤第6周组(E)、高脂+球囊损伤第8周组(F)及高脂+球囊损伤第10周组(G)。高脂+球囊损伤各组喂养高脂饲料4周后行经股动脉球囊损伤术。检测股动脉中PPARα的mRNA和蛋白表达及血清中白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和P-选择素水平。结果:高脂组和高脂+球囊损伤组血管狭窄率明显高于正常组,且PPARα的表达随时间变化增加(P<0.01)。G组中血管狭窄率<60%的血管中PPARα的表达量要高于血管狭窄率≥60%(P<0.05)。IL-10、TNF-α和P-选择素在高脂组和高脂+球囊损伤组中的水平明显高于正常组(P<0.01)。G组比F组的IL-10水平升高,且TNF-α和P-选择素水平降低。结论:在动脉粥样硬化病变发展过程中,通过上调PPARα可延缓动脉粥样硬化的发展,这可能与调控炎症反应相关。     

血管紧张素1-7对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子表达的影响

目的 探讨血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子ATP结合盒转运子A1(ABCA1)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)和视黄酸X受体α(RXRα)表达的影响.方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饲料组、Ang(1-7)组及Ang(1-7)+ A779组.通过植入式胶囊渗透压泵,经颈静脉插管持续给予Ang(1-7),28天后,检测各组大鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平,定量实时聚合酶链反应及Western blot检测各组大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα基因表达的变化.结果 与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所降低(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7) +A779组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05).与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7)+ A779组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05).结论 Ang(1-7)能够降低大鼠血浆中血脂水平,促进大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的基因表达,对高脂血症有一定的治疗作用.     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对高脂喂养SD大鼠血清视黄醇结合蛋白4水平的影响

目的 观察高脂喂养及吡咯列酮干预对SD大鼠视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予普通饮食（NC组）、高脂（F组）及高脂吡咯列酮（F＋Pio组）干预,第8、12周时行OGTT及胰岛素释放试验（ITT）,评价胰岛功能.检测FPG、血脂、肝功能及血清RBP4水平,并对肝脏、附睾脂肪和肾周脂肪称重,计算肝脏质量/体质量及脂肪质量/体质量.结果 8周后,F组FPG、血脂、胰岛素及OGTT血糖曲线下面积（AUCOGTT）、AUCITT均高于NC组（P＜0.05或P＜0.01）,血清RBP4水平升高（P＜0.01）;12周后,与F组相比,F＋Pio组FPG、胰岛素、TG、TC、AUCOOGTT、AUCITT、肝脏质量/体质量及脂肪质量/体质量和血清RBP4水平降低（P＜0.05或P＜0.01）.结论 PPAR-γ激动剂吡咯列酮能减轻糖脂毒性、改善IR并降低体内RBP4水平.     

脑胶质瘤中增殖细胞核抗原的表达及其临床意义

目的:研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在脑胶质瘤中的表达与肿瘤病理分级的关系,探讨其在脑胶质瘤预后判断上的价值。方法:应用免疫组化SP法检测47例脑胶质瘤和12例正常脑组织中PCNA的表达。结果:PCNA在胶质瘤中绝大部分阳性表达,在正常脑组织中全部阴性表达,PCNA在胶质瘤的表达明显升高(P<0.01),高级别组表达高于低级别组(P<0.05)。结论:PCNA较准确地反映脑胶质瘤的增殖行为和恶性程度。可能在该肿瘤的预后判断上有重要意义。     

项痹通颗粒调控PPAR-γ/NF-κB通路改善大鼠颈后肌炎症损伤的研究

目的 观察项痹通颗粒对颈后肌炎症损伤大鼠的炎症相关因子及过氧化物酶增殖激活受体γ/核转录因子KappaB(peroxisome proliferators-activated receptor-γ/NF-KappaB, PPAR-γ/NF-Κb)信号通路相关蛋白的影响,探讨其可能的作用机制。方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、塞来昔布组[0.18 g/(kg·d)]、项痹通颗粒低、中、高剂量组[4.5 g/(kg·d)、9.0 g/(kg·d)、18.0 g/(kg·d)],每组各10只。以手术方式切开术口,用弯头止血钳钳夹C_2～6棘突旁开0.2 cm的颈后肌中段(持续钳夹10秒、后松开间隔10秒、扣满3扣),以建立颈后肌炎症损伤大鼠模型。苏木精—伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察颈后肌组织的形态学变化;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测造模前、造模后第2天(干预前)及干预7天后的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素...     

柔肝散结法对肝癌大鼠肿瘤细胞抑制作用的研究

目的:观察柔肝散结法对肝癌大鼠肿瘤细胞的抑制作用。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、青消方组、青消方防治组(简称防治组),每组10只。除空白组外,其余3组大鼠均以含0·05%2-AAF的饲料喂养12周,防治组在诱癌的同时,灌服青消方。青消方组于诱癌第4周开始给药,剂量均为25g/kg·d-1。12周末采用ELISA及免疫组织化学检测方法,对增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤坏死因子(TNF)等指标进行检测。结果:青消方组、防治组均能缩小肝癌大鼠瘤体积、减轻瘤重量、降低血清VEGF和TNF-α含量及组织VEGF和PCNA相对含量。防治组明显优于青消方组。结论:柔肝散结中药青消方对肝癌大鼠肿瘤细胞具有抑制作用,肝癌应早期诊治,防治结合。