荧光蛋白Venus载体构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的 构建黄色荧光蛋白Venus重组载体,并观察其在哺乳动物细胞中表达情况.方法 将Venus克隆至限制性内切酶处理的pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,转染293T细胞,荧光显微镜下观察结果.48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术印证荧光蛋白Venus表达情况.结果 重组载体经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T细胞后可见明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明荧光蛋白Venus高量表达.结论 成功构建了Venus重组载体,荧光蛋白Venus在哺乳动物细胞中高表达,此为分子与细胞生物学提供了一种重要的研究工具.     

石蜡切片免疫荧光染色在肾脏病理诊断中的应用

冰冻切片免疫荧光染色是肾脏疾病免疫病理学的常用检查方法,在肾脏病理诊断中起着重要作用.有时由于一些原因不能采用冰冻切片免疫荧光染色而影响诊断.我们利用微波加热及酶消化相结合的抗原修复技术,对肾活检组织的石蜡切片进行免疫荧光染色,弥补了此不足,取得了较好的效果.     

近红外/吲哚菁绿荧光成像技术在妇科手术中的应用进展

近红外荧光成像（near-infrared fluorescence imaging,NIRF）技术目前已广泛应用于临床实践中,现阶段临床常用的近红外荧光染剂为吲哚菁绿（indocyanine green,ICG）。近红外光与ICG相结合形成的近红外/ICG荧光成像技术在各学科领域均已广泛开展,可用于妇科恶性肿瘤中转移淋巴结的检测以及术中导航。就盆腔深部浸润型子宫内膜异位症而言,应用近红外/ICG荧光成像技术可以更完整地清除病灶,尤其对于肠道子宫内膜异位症,可显著减少肠瘘发生率。该技术亦可用于术中输尿管显影,不仅可减少既往常用保护输尿管的方法（如术前放置输尿管支架）引起的并发症,也可减少医源性输尿管损伤的发生率。就近红外/ICG荧光成像技术的原理和优势、在妇科手术中的发展现状和临床应用,以及该技术的局限性和应用前景予以综述。     

3种不同方法全自动自身抗体分析仪检测抗核抗体谱结果分析

目的 探究临床常用的3种不同方法全自动自身抗体分析仪检测抗核抗体谱结果的差异。方法 选取2021年4月至5月在蚌埠医学院第一附属医院确诊为系统性自身免疫病（autoimmune disease,AID）的患者72例作为AID组,留取患者相关项目检测剩余的血清样本72份,同时按照性别相同、年龄相近的原则,选取同期体检无AID的31例健康者作为对照组,留取血清样本31份。采用目前临床常用的进口全自动流式点阵发光免疫分析仪（方法 A）、国产全自动流式荧光发光分析仪（方法 B）和多重液相芯片免疫分析仪（方法 C）分别检测两组患者血清样本中的10种抗核抗体,比较3种方法的检测阳性率,分析其阳性符合率、阴性符合率、敏感度、特异性等。为了帮助选择出对临床检验更可靠的方法学及检验设备,对3种方法进行两两比较,进行一致性评价。结果 方法 A、B和C与间接免疫荧光法检测的AID组阳性检出率均显著高于对照组（P<0.05）。采用方法 A、B和C检测对照组10种抗体的结果均为阴性,AID组10种抗体检测结果中,方法 B、C检测抗Sm抗体和抗SSA60抗体的阳性率均显著低于方法 A(P<0.05),...     

量子点在生物标记中的应用

无机纳米荧光材料的量子点(Qdots)具有的光稳定性好、较宽的激发光谱与较窄的发射光谱、激发光谱与发射光谱分离、以及可调谐发射光谱的波长等光学特性,解决了有机荧光基团标记物易被光漂白、发射光谱较宽以及不同荧光基团需不同激发光源的诸多缺陷。量子点具有的独特的光学特性和生物兼容性,使其成为生物科学和医学研究领域中极具特色的荧光标记探针。     

眼底荧光血管造影操作前后的护理

眼底荧光血管造影(Fundus F luoresce in Angiography,简称FFA)是眼底疾病的重要检查方法之一,对于眼底疾病的诊断、治疗、疗效及预后有极其重要的价值。现将荧光造影的有关基本知识及护理配合介绍如下。1 FFA的基本原理及意义FFA的基本原理,是将发光的物质(荧光素钠)注入静脉内,用蓝色光照射,使眼内血液循环中的荧光素被激发出荧光,血管以及组织被染色处显影,用高速片及特制的相机拍摄或进行录像。1·1照相机照相机包含闪光系统、照明光、激发光、屏蔽滤光片、自动卷片装置、计时器及立体照相装置。1·2荧光素钠荧光素钠为中性桔红色…     

小鼠H2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,进一步研究小鼠耐药细胞中双微体（DMs）的形成机制提供有效的分子工具。方法 利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定。结果 经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达。结论 作者成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。     

分子信标在活细胞研究中的应用新进展

了解分子在空间和时间的相互作用是理解程的关键.分子信标是根据荧光共振能量转移原理设计的一种高灵敏性、高特异性检测工具.分子信标在疾病的诊断及治疗、病原体基因组诊断、药物的研制、筛选方面有着广阔的发展前景.本文综述了分子信标的作用原理、作用机制以及在活细胞研究方面的最新进展.     

红色荧光蛋白的研究进展

红色荧光蛋白(drFP583)是人们从珊瑚虫Discosoma genus中克隆的一种与绿色荧光蛋白(GFP)同源的荧光蛋白,在紫外光的照射下可发射红色荧光,有着广泛的应用前景;但它自身的缺点如寡聚化、成熟缓慢等限制了它的进一步应用.因此,人们对它进行了一系列修饰和改进,得到了寡聚化程度低(甚至单体)和成熟速率快的突变体,Clontech公司已将一种突变体商业化,命名为DsRed.本文就DsRed的理化性质、各种突变体及应用方面的研究进展进行综述.     

TRFIA与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的分析与比较

目的 以微粒子酶免疫分析（MEIA）为金标准,比较时间分辨荧光免疫法（TRFIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）,在测定HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb乙肝五项血清学标志物（HBVM）结果的符合程度、灵敏度、特异性,了解TRFIA法测定HBV-M的准确性和可行性。方法 应用MEIA、TRFIA及ELISA三种方法,对210例随机血清样本进行HBVM五项指标测定。结果 以MEIA法为参考,TRFIA法检测HBVM结果的相对灵敏度、相对特异性和总符合率均优于ELISA法。结论 与ELISA法比较,TRFIA法测定HBVM五项指标在临床检测中具有相对灵敏度、相对特异性和总符合率较高的优势。TRFI—A作为定量的方法,可为临床疗效的观察及乙肝疫苗的接种提供依据。