重组表达人乙酰胆碱受体α1亚基胞外域蛋白

目的 获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR)αl亚基N末端胞外域(ECD)蛋白.方法 用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChR αl亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b.以构建的新载体转化E.coli BL21(DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-PAGE比较诱导前后蛋白表达情况.重组蛋白以Ni2+亲和层析纯化.蛋白透析复性后,以ELISA法检测活性.结果 PCR产物大小为650 bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实ECD核苷酸序列正确,并正确插入载体pET16b.诱导所产生的大量包涵体蛋白经复性后正确折叠且具活性.结论 可通过原核表达获得大量正确折叠的可溶性重组人肌肉AChR al亚基ECD蛋白.     

弓形虫循环抗原诊断试剂的研究

目的　比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果 ,优选高效价的抗体诊断试剂。 方法　制备弓形虫的细胞质抗原 (C)、代谢抗原 (S)。用抗原C、C +S、S及活虫各免疫 2只家兔 ,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体 (多抗 )并制备酶标记抗体 ;用上述 4种多抗与多抗 -HRP组合成 16种双抗体夹心型ELISA ,检测人血清CAg和C、S抗原 ,评价试剂的敏感性 ;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验 ,评价试剂的特异性。结果　各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本 7例 ,阴性样本 8例 ,均未出现假阴性和假阳性反应 ,其OD均值的P/N比值依次为C +C组 33 5、S +S组 2 7 8、CS +CS组 2 1 2、P +P组 13 2 ;C和S抗原的最低检出量均为 0 5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。 结论　 (1) 4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明 ,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性 ,其中以抗C抗体试剂最为满意。 (2 ) 16种组合形式的夹心ELISA ,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义 ,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分。     

4种免疫原对棘球绦虫继发性感染的预防效果

由于猪带绦虫和细粒棘球绦虫间存在大量的共同抗原〔1～ 3〕,为寻找可能的免疫原制备细粒棘球绦虫疫苗 ,我们将 4种猪带绦虫和细粒棘球绦虫抗原进行了初步免疫预防的动物实验 ,现将结果报告如下1　材料与方法1 1　免疫原制备　Ｅ ｇＣＦ免疫原 :细粒棘球蚴囊液采绵羊肝脏 ,离心     

嗜肺军团菌主要免疫原基因真核表达质粒的构建与表达

目的 构建嗜肺军团菌主要免疫原基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip,并观察其在真核细胞中的表达.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌ip基因,将其定向插入载体pcDNA3.1( ),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip.经限制性核酸内切酶HindⅢ和BamHⅠ酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-ip转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western blot分别鉴定pcDNA3.1-ip的瞬时和稳定表达.结果 成功构建了嗜肺军团菌ip基因的真核表达重组质粒.在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA3.1-ip成功转入NIH3T3细胞,并在NIH3T3细胞中得到了瞬时表达;用嗜肺军团菌兔血清抗体检测pcDNA3.1-ip稳定转染的NIH3T3细胞,在相对分子质量为29×103处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-ip在细胞内可稳定表达IP蛋白.结论 本研究构建的嗜肺军团菌主要免疫原基因真核表达质粒pcDNA3.1-ip能够成功表达IP蛋白,表达的蛋白具有良好的免疫原性与免疫反应性.     

丙型肝炎病毒NS5a高免疫原区人工合成多肽抗原性的研究

目的 检测不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)非结构5a区(NS5a)高免疫原区短链多肽的抗原性，确定该区的主要线性抗原表位并探讨基因异质性与免疫原性间的关系。方法 设计并合成特异性多肽；DNA Star软件对多肽氨基酸同源性进行比较；间接ELISA法检测多肽的抗原性。结果多肽氨基酸的同源性在不同区及不同基因型间变化较大。氨基酸残基2212～2241、2272-2301和2302-2331的多肽抗原性最强。18个来自保守区的多肽可以与不同基因型抗-HCV阳性血清起反应(阳性率高达96％)；而来自不同基因型间氨基酸序列保守性较低区的多肽抗原性与同基因血清的反应性较高。结论 HCV NS5a高免疫原区主要的线性抗原位于氨基酸残基2212-2241、2272-2301和2302-2331的位置；人工合成的多肽可以有效地用于检测抗-HCV抗体；一些多肽的抗原性具有基因型特异性。     

Selection of the Mimic Epitopes of Antigens from Schistosoma japonicum by Using Phage Display Techniques

Rat was a semi permissive host of Schistosoma. Accordingto the research of Yu XC[1], when rat was infected withSchistosoma japonicum (S.j), the egg granulomas in ratlivers were rarely observed, while majority of eggs wereripe eggs and black dead eggs, and the number of meanliver eggs per gram (LEPG) was 1393.46, apparently lessthan that in permissive host mouse. These results indicatedapparently natural resistance. In our laboratory, enzyme linked immuno electro transfer blot (EITB) …     

ELISA在检测百日咳杆菌免疫原中的应用

本文采用ELISA技术,实验研究了LPF-ELISA和FHA-ELISA的最适条件以及LPF和FHA免疫原在纯化过程中的动态。实验结果表明,LPF-ELISA的HP最佳包被浓度为0.413μg/100μl;所用第二抗体(抗LPF兔血清)的最佳浓度为2.8EU/100μl。FHA-ELISA的抗FHA豚鼠血清的最佳包被浓度为0.05EU/100μl,所用第二抗体(抗FHA兔血清)的最佳浓度为2.25EU/100μl。LPF和FHA在经培养、盐析、浸提、超速和分级离心后,其ELISA单位与蛋白量密切相关,呈同步消长。证明用LPF-ELISA和FHA-ELISA作新菌苗批量生产工序中的质量控制,是一种行之有效的方法。     

GI5005用于HCV感染获积极结果

美国肝病研究学会第59届年会上公布的一项研究显示Globelmmune公司的一种靶向丙型肝炎病毒（HCV）的分子免疫原GI5005（Ⅰ）取得积极的治疗效果。