Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究

目的 用基因工程的方法构建并表达一种由 Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV).方法 采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后.利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达.用纯化后的蛋白免疫nalb/c 小鼠.将小鼠脾细胞用HBsAg 装载的P815细胞在体外刺激5 d后,用流式细胞仪检测IFN-γ 细胞的频率.用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生.结果 由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导 HBV 特异性的 IFN-γ 的淋巴细胞的产生.结论 获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础.     

呼吸功能不全综合实验改革的探索

目的:为了探索如何在一次教学实验中将生理学、病理生理学和药理学三个机能学科的实验有机地结合起来, 形成综合性实验以培养学生的综合思维和实验研究能力。方法:在病理生理学的呼吸功能不全实验的基础上, 增加了呼吸的生理调节和不同类型的呼吸衰竭采用不同的针对性药物治疗, 并且采用启发式教学方法。结果:学生学习兴趣明显提高, 学生不仅学到了更多的研究方法, 而且综合分析和科研创新能力都有明显提高。结论:这种改进明显提高了实验课的教学水平和教学质量。     

登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定

目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位，并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体随机12肽库，将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导，通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比，初步确定E蛋白的抗原表位；用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验，确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS，其展示肽与DEN2E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390～399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应，并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390～398AA)线性序列为免疫优势表位，其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。     

HCV高变区合成多肽的抗原性研究

目的：通过计算机同源模建，寻找丙型肝炎病毒高变区（HCV HVR1）中保护性多肽抗原表位。方法：计算机同源模建，预测多肽的抗原性，然后用淋巴细胞转化的方法验证其抗原性，结果：同源模建与实验结果一致，多肽抗原性有待进一步的提高。结论：同源模建是一种高效寻找具有保护性抗原多肽的经济快速方法。     

镜面右位心的诊断和外科治疗——附11例临床分析

目的：分析镜面有位心病理解剖特点，探讨其临床诊断及外科治疗方法。方法：总结11例镜面右位心临床资料，对其主要的合并畸形、诊断方法和其中6例外科治疗的效果进行比较分析。结果：本组患者包括右心室双出口4例，单心室合并单心房2例，法乐四联征3例，完全性房室间隔缺损2例。合并畸形包括双上腔静脉3例，房间隔缺损3例，部分性肺静脉异位引流2例，三房心1例，动脉导管未闭1例。10例患者合并肺动脉狭窄或右室流出道狭窄，1例重度肺动脉高压。主要根据胸部X线片，超声心动图（UCG）及心导管明确诊断。行右心室双出口矫正术2例，法乐四联征根治术3例，右心室流出道疏通1例。4例存活，2例死亡。结论：（1）镜面右位心多存在复杂心内畸形。（2）UCG仍然是最基本有效的诊断方法，心导管检查是明确诊断的必要辅助手段。（3）外科治疗必须严格把握手术指征。     

基因功能预测问题中的样本不平衡处理

应用机器学习进行分类是基因功能预测的一种重要手段。但是许多预测集中的阳性样本过少，会降低功能预测的效果。针对此问题，本研究对结合支持向量机（SVM）算法的几种常用非平衡数据分类方法进行实验比较，包括投票整合分类器和移动分类面等。在此基础上提出通过加权修正投票的整合策略，以提高预测效果。实验结果显示，结合多数类样本限数取样及整合思想的投票整合法预测效果优于移动分类面法，而在投票整合法基础上的加权修正整合方法在所有方法中获得更好更稳定的结果。     

小剂量肝素佐治新生儿窒息合并多脏器功能不全综合征的临床研究

目的探讨小剂量肝素在新生儿窒息合并多脏器功能不全综合征(MODS)的疗效及其对外周血血小板(PLT)、D-二聚体(D-D)的影响.方法新生儿窒息合并MODS90例,随机分为2组,对照组45例,给予常规处理及保护重要脏器功能等支持治疗;观察组45例,常规治疗加用小剂量肝素.结果观察组MODS症状持续3天以上例数显著少于对照组(χ2=9.0741,P＜0.01),发生多脏器功能衰竭(MOF)显著少于对照组(χ2=5.4087,P＜0.01),死亡率较对照组显著减少(χ2=7.0523,P＜0.05),治疗后观察组外周血血小板显著高于对照组(t=2.7457,P＜0.01),D-D显著低于对照组(t=3.2887,P＜0.01).结论小剂量肝素可以有效地降低新生儿窒息合并MODS症状持续时间以及MOF的发生率,降低死亡率,有效改善预后,值得临床推广应用.     

手术流产造成再次妊娠和分娩的影响

人工流产对再次妊娠和分娩的影响近些年来逐渐被重视，不少学者进行了研究与探讨，并认为人工流产次数多，手术质量差确实会对再次妊娠及分娩造成影响。妊娠早期并发症由于流产所致的宫颈损伤，特别是内口损伤，常不被重视，可致宫颈功能不全，而使晚期流产、早产、胎膜早破的发生率增高。     

应用合成肽研究柯萨奇B病毒衣壳蛋白VP1的共同抗原表位

对柯萨奇B4病毒(CVB4)衣壳蛋白VPl保守区的亲水性和二级结构进行分析和预测,选择可能代表优势抗原表位的肽段进行合成(VPl-l肽,RIYF KPKHVK AYV),并截取了该肽段的前12个残基(VPI-2肽)用同样方法进行合成.用VP1-1肽免疫家兔制备出高效价抗体,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,这些抗体与CVBI-6病毒均有结合反应,VP1-1肽与型特异性CVB1-6抗体均有良好的结合反应,表明VP1-1肽是CVB的共同抗原表位.用VP1-1肽检测心肌炎患者血清CVBIgM抗体,阳性率在40%左右.     

抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白(SMR)的单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B-细胞表位预测。合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,利用免疫细胞化学和Western blot分析对所制备的mAb进行鉴定。结果:综合预测方法分析间皮素的抗原表位可能于153-162、282-292及471-481氨基酸残基或其附近,选择性合成了可能性最高的位于471-481氨基酸残基的可溶性间皮素相关蛋白表位,制备了mAb(2H10),经免疫细胞化学和Western blot分析该抗体具有较高的特异性。结论:成功地制备了鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白的mAb(2H10),该抗体具有较高的特异性,为进一步利用ELISA对可溶性间皮素相关蛋白进行检测奠定了基础。