铬酵母对糖尿病模型小鼠血脂及胰腺的影响

目的研究富铬酵母对小鼠Ⅱ型糖尿病的影响。方法共60只Balb／C小鼠进入本研究。未注射链脲霉素的10只Balb／C小鼠为正常组,其余50只小鼠通过小剂量注射链脲霉素建立Ⅱ型糖尿病模型。按照血糖值平均分为5组,其中二甲双胍为阳性对照药物组,普通酵母为对照组,富铬酵母饲喂小鼠分为低[250μg／（kg·d）,以铬元素计]、中[500μg／（kg·d）]、高[1000tLg／（kg·d）]3个剂量组,灌胃饲养15周。测定体重和空腹血糖值、糖耐量值等血液生化指标,进行胰腺病理组织分析。结果与对照组比较,富铬酵母中剂量组的甘油三酯显著降低（P=0．043）,低、中剂量组的总胆固醇显著降低（P=0．006、P=0．003）,低、高剂量组的血清胰岛素浓度显著提高（P=0．011、P=0．002）,高剂量组的糖基化血红蛋白显著下降（P=0．027）。胰岛组织病理检查显示富铬酵母中、高剂量组未出现炎性细胞浸润现象。结论富铬酵母菌体对小鼠糖尿病有一定的改善作用,但本研究未设有机铬对照组,需进一步对比研究。     

富硒酵母对不同免疫状态下的DTH的影响

在Ｃｙ诱导的免疫功能增高和降低模型上，分别观察了Ｓｅｙ对ＤＴＨ的影响。结果发现，在免疫功能增高状态下，Ｓｅｙ能不同程度的抑制ＤＴＨ（６０、９０ｍｇ／Ｋｇ剂量组）、Ｃｙ导致的脾（６０ｍｇ／Ｋｇ剂量组）及胸腺重量的增加；在Ｃｙ诱导的免疫功能低下状态下，三个剂量的Ｓｅｙ均对Ｃｙ抑制的小鼠ＤＴＨ有拮抗作用，并能部分对抗Ｃｙ所制的胸腺及脾指数的降低。提示，Ｓｅｙ在不同的免疫状态下对淋巴细胞的功能有双向调节作用。     

富集法检测三维鱼肝油乳的酵母菌

目的建立一种能有效检出三维鱼肝油乳中酵母菌的方法。方法富集法即增菌法,样品液先在合适的培养基中进行增菌培养后,再按中国药典(2005)版二部附录ⅪJ微生物限度检查项下用平皿法倒碟进行检测。结果被酵母菌污染的三维鱼肝油乳样品用富集法均能检出。结论富集法比平皿法可以更有效地检测出样品中的酵母菌,保证产品质量。     

酵母表达的风疹病毒E1在ELISA检测中应用

目的将毕赤酵母表达系统中表达的E1糖蛋白作为包被抗原,建立一种优于病毒作为包被抗原的风疹病毒(rubellavirus,RV)抗体ELISA检测方法。方法将重组包膜糖蛋白(E1)抗原和风疹病毒分别作为包被抗原,用间接ELISA法检测90份临床血清标本,同时用晶美(JINGMEI)进口分装试剂盒和德国RECI公司试剂盒进行检测;将RECI试剂盒作为金标准,计算另外三者检测结果的特异性、灵敏性和符合率;比较他们之间的差异有无统计学意义,特别是重组抗原与病毒抗原作为包被抗原检出RV抗体阳性率的差异有无统计学意义。结果重组蛋白重复性实验结果经统计学处理,P>0·05,差异无统计学意义;RECI试剂盒与重组抗原、病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05);重组抗原与病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05),作为包被抗原,重组抗原优于病毒抗原。结论用毕赤酵母表达的RVE1重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测优于病毒作为包被抗原,具有广阔的应用前景。     

山区农村散居80岁及以上老年人营养调查

对象与方法：在沂蒙山区对４个乡镇的散居高龄老人１２１人进行营养调查（男５５,女６６）,年龄最高男９６岁,女９２岁;最低男女均为８０岁。以称重法与五日询问回忆法相结合,进行四季动态的膳食调查。结果：其膳食构成以谷类（占总重量６１％～７１％）及蔬菜（１２％～１６％）为主,配有少量豆类（１．８％～４．６％）与动物性食品（６．２％～１２．０％）。按中国营养学会８０岁以上老人ＲＤＡ计算,四季能量摄入男性达到ＲＤＡ的８１％～９１％,女性达到７５％～８４％,蛋白质男性仅达到６７％～７５％,女性５５％～６７％,动物和豆类蛋白质来源不足,低于蛋白质总量的３０％～５０％。钙摄入量只有ＲＤＡ的２０％左右,锌、硒、维生素Ａ、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ均明显不足。三大营养素所占能量比例合理,脂肪来源以植物油为主,符合老年人营养要求。营养缺乏病检查发现有维生素不足症状,如皮肤干燥鳞皮占４．１％,口角湿白厚２８．９％,舌腥红２２．３％,味蕾肥大８１．０％,膝反射消失１２．４％等。临界高血压患病率为１６．１％,高血压患病率１４．３％。生化检查：血红蛋白检测１１４人,低于１２０ｇ／Ｌ者１６．７％;血糖检测１１６人,高于正常的占６．９％,低于正常的占４７?     

Combining proteomics and lipid analysis to unravel Confidor stress response in Saccharomyces cerevisiae

The yeast Saccharomyces cerevisiae is a useful model for studying the influence of different stress factors on eukaryotic cells. In this work we used the pesticide imidacloprid, in the Confidor formulation, as the stress factor and analyzed its influence on the metabolic activity, proteome and lipid content and composition of Saccharomyces cerevisiae yeast. During the cultivation of yeast, the lowest recommended application dose of Confidor (0.025%, v/v) was added to the growth media and its influence on the mitochondria, cytosol with microsomes, and the whole yeast cells was monitored. The results show that under the stress provoked by the toxic effects of Confidor, yeast cells density significantly decreased and the percentage of metabolically disturbed cells significantly increased comparing with untreated control. Also, there was a downregulation of majority of glycolytic, gluconeogenesis, and TCA cycle enzymes (Fba1, Adh1, Hxk2, Tal1, Tdh1,Tdh3, Eno1) thus providing enough acetyl‐CoA for the lipid restructuring and accumulation mechanism since we have found the changes in the cell and mitochondrial lipid content and FA composition. This data suggest that lipids could be the molecules that orchestrate the answer of the cells in the stress response to the Confidor treatment.     

酵母胱硫醚β-合成酶的表达及酶活鉴定

将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重组菌.研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响.使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性.结果表明,培养基中添加0.05％的山梨醇,重组菌在37℃培养3h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg.     

以红曲为原料保健食品中洛伐他汀的含量测定

目的建立以红曲为原料的保健食品中总洛伐他汀含量测定的方法。方法用高效液相色谱法一次测定保健食品中两种结构形式洛伐他汀的总含量,色谱条件为：色谱柱（zorbaxC18,4.6×250mm,5μm）;流动相：甲醇-水-磷酸（385：115：0.14）;检测波长：238nm;流速：1.0mL/min。结果洛伐他汀在2.0～300μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为99.5%,RSD为0.57%（n=9）。结论该高效液相色谱法简单、灵敏、快速、准确,适用于以红曲为原料的保健食品中总洛伐他汀的含量测定。     

基于中医辨证用药特点建立大鼠血热出血模型

目的同时建立两种模拟中医临床血热出血证的大鼠模型,通过对比分析,对两种模型进行考察。方法模型Ⅰ(干姜组)以5%乙醇代替自由饮水,并灌胃干姜水煎剂,给药剂量15 g.kg-1;空白Ⅰ组自由饮水,并灌胃等体积蒸馏水,连续给药14 d。模型Ⅱ(干酵母组)采用皮下注射干酵母,注射剂量为2 g.kg-1,辅以体积分数5%乙醇代替自由饮水;空白Ⅱ组自由饮水,并皮下注射等体积生理盐水。观察大鼠一般体征(体重、饮食量、饮水量、尿量、粪便量、粪便含水量及肛温)的变化,血液流变仪测定全血和血浆黏度,全自动血细胞分析仪测定红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)及红细胞压积(HCT),凝血仪测定血浆凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)含量、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),组织学检查舌、肺、胃的病理变化。结果造模14 d后,与空白Ⅰ组比较,干姜组大鼠体重相对减轻,饮食量、饮水量和尿量增加(P<0.05,P<0.01),粪便量及粪便含水量减少(P<0.01),肛温明显升高(P<0.01),全血高、中、低切黏度及血浆黏度明显增加(P<0.05,P<0.01),TT和APTT明显延长(P<0.01),PT缩短(P<0.01),FIB含量增加(P<0.01),RBC计数相对增加,HGB含量及HCT明显增加(P<0.05);与空白Ⅱ组比较,皮下注射干酵母4 h后,干酵母组大鼠肛温增加且稳定在较高水平(P<0.01),全血高、中、低切黏度及血浆黏度明显增加(P<0.05,P<0.01),TT和APTT明显延长(P<0.01),PT缩短(P<0.01),FIB含量增加(P<0.01),RBC、HGB及HCT明显增加(P<0.05,P<0.01)。光镜下观察,干姜和干酵母组大鼠舌、胃组织可见血管扩张,肺组织可见局灶性出血。结论大剂量干姜水煎剂灌胃或皮下注射干酵母混悬液均可引起大鼠血热出血,导致血液流变学指标异常、凝血功能障碍、组织血管扩张和出血现象,分析认为选择干姜为造模用药更符合中医临床内伤杂病、烧灼血络、血热妄行出血之特点。     

Biomarker discovery and compound evaluation using two-hybrid proteomic systems

Many proteomic technologies require a heavy investment in expertise and technology, which place these approaches beyond many labs and small companies. However, proteomic approaches are ideal for pilot experiments, identifying relevant biomarkers and protein pathways for development or analysis of therapeutic compounds. The two-hybrid proteomic systems are available and affordable to most researchers, requiring little more than standard microbiological equipment. The screens rapidly generate data, identifying protein interactions that can be used to construct small local protein networks. Using data from large-scale projects, these small local protein networks can be used to identify the larger cellular pathways that are being affected by therapeutic compounds in the screen. The foundation for the two-hybrid proteomic systems are commercially available, as are high quality cDNA libraries. The straightforwardness of the two-hybrid proteomic system allows smaller groups to focus their resources on critical cellular pathways and molecular targets by taking advantage of a trusted molecular assay and an ever growing set of postgenomic era databases.