人胎肝细胞移植治疗代谢性疾病的免疫学研究

目的利用人胎肝细胞移植治疗小鼠α-L-艾杜糖苷酶(IDUA)缺陷引起的黏多糖贮积症(MPS),观察移植后受体的免疫反应、血清及肝脏IDUA活性恢复情况。方法将已鉴定纯化的人胎肝细胞移植给IDUA缺陷小鼠,在移植前及移植后第5、10、15天,流式细胞仪检测受体小鼠T细胞亚群CD3、CD4和CD8;ELISA法检测免疫指标IL-2、TNF-α、IFN-γ;荧光分光光度计法检测血清及肝脏IDUA活性情况。结果胎肝细胞移植后能定植在受体肝脏中,受体在移植后第5、10、15天分别与移植前比较,血清中反映免疫状态的指标T细胞亚群、IL-2、TNF-α和IFN-γ均显著升高(P<0.05);血清及肝脏IDUA活性在移植后第5天显著提高(P<0.01),以后随着时间的延长,活性随之衰减。结论人胎肝细胞移植给IDUA缺陷小鼠后,能够定植在受体肝脏中。然而由于免疫排斥反应,IDUA活性在移植后第5天达到高峰,但在第10天后下降至移植前水平。     

Effect of Jianpi Bushen formula on aromatase-inhibitor-associated bone loss after menopause

OBJECTIVE

To investigate the effect of Jianpi Bushen (JPBS) formula on aromatase inhibitor (AI)-associated bone loss after menopause.

Effects of Placental Isoferritin on the Mouse Embryo Development in vitro

To investigate the effect of placental isoferritin （PLF） on mouse embryo development in vitro, mice 2-cell embryos were co-cultured with human first trimester decidual cells at different concentrations of PLF in vitro. The following changes of the above system were observed under an invert microscope and the number of embryos were recorded and the embryos were classified. The results showed there was no significant difference in the percentage of embryos development to 4-cell 8-cell and morula （P〉0.05）. PLF at the doses of 10 and 100 U/mL significantly enhanced more embryos development to the blastocyst and hatching blastocyst （P〈0.05）. PLF at the dose of 1000 U/mL depressed more embryos development from 2-cell to hatching blastocyst, meanwhile such phenomena as cell degeneration and irregular cleavage were observed in part of embryos, but there was no significant difference in statistics （P〉0.05）. It was concluded that PLF at the concentration of 10-- 100 U/mL had no significant effects on the early development of mice embryos, however, PLF could promote the growth, differentiation, and hatching of preimplantion blastocysts.     

胎儿超声心动图技术及临床应用进展

心脏结构异常是临床最常见的胎儿先天性畸形，主要包括胎儿心血管结构异常、胎儿心律失常及胎儿心力衰竭。胎儿超声心动图作为一种无创影像学方法，对于产前富内诊断胎儿心脏血管异常具有良好的效果。近年来．随着一系列高分辨率、高帧频彩色多普勒超声心动图新技术的研制及临床应用，在妊娠期尽早、及时确诊胎儿先天性心脏病和心律失常。准确评估心功能，对胎儿的优生优育具有重要意义。本文将对此方面的进展进行综述。     

胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究

目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。     

产前给药沐舒坦、地塞米松对大鼠胎肺形态发育的影响

目的:比较产前给予沐舒坦(盐酸氨溴索注射液)、地塞米松对大鼠胎肺形态发育的影响.方法:9只孕鼠随机分为生理盐水对照组、沐舒坦治疗组及地塞米松治疗组,每组3只.于孕16、17、18天腹腔注射给药,孕19天每只孕鼠取6只胎鼠肺组织作为早产鼠肺模型,通过光镜观察及电镜技术,分析比较两种药物对胎肺形态发育的影响.结果:光镜下,沐舒坦治疗组、地塞米松治疗组每视野肺泡计数、平均肺泡表面积均高于对照组(P＜0.01),平均肺泡间隔厚度均低于对照组(P＜0.01).地塞米松治疗组每视野肺泡计数、平均肺泡表面积均高于沐舒坦治疗组(P＜0.01),平均肺泡间隔厚度低于沐舒坦治疗组(P＜0.01).透射电镜观察,沐舒坦治疗组、地塞米松治疗组Ⅱ型肺泡上皮内多见板层小体且染色深、致密,胞质内线粒体等细胞器多见,而对照组内难见板层小体、少见细胞器.结论:产前给药沐舒坦、地塞米松均能显著促进胎肺发育,地塞米松效果优于沐舒坦.但考虑到地塞米松的诸多不良反应,沐舒坦可成为临床上促胎肺成熟的更好选择.     

已分化神经干细胞修复成年鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的 观察已分化神经干细胞植入成年鼠损伤脊髓后的变化及检查修复脊髓损伤的效果.方法 以胚胎脊髓提取液(FE)诱导细胞/PGA支架复合物分化后,植入成年鼠损伤脊髓,观察分化细胞的存活和发育情况并评估动物的运动功能.结果 FE体外可诱导神经干细胞分化成神经元、星形和少突胶质细胞.植入脊髓后,分化细胞/PGA支架复合物(dNPC)内的细胞成分可以存活并继续成熟,动物BBB评分明显优于对照组.结论 dNPC含有已经分化的细胞,移植后各种细胞成分可以存活并继续成熟,对成年鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用.     

不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响

目的:通过观察人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化诱导效率,探讨不同造血微环境对造血发生的影响.方法:本实验诱导人胚胎干细胞分化为造血细胞的方法采用两步法:先用细胞因子培养形成5 d的拟胚体,然后再模拟体内造血发生的微环境,分别用人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞诱导拟胚体10 d,通过流式细胞术检测细胞的flk,CD34和CD45表面抗原表达情况,观察3种基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响.结果:5 d拟胚体与卵黄囊基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别1.80%±0.56%,1.30%±0.14%,1.05%±0.63%;与胎肝基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达为flk,CD34,CD45百分率分别为34.0%±25.45%,38.4%±24.8%,72.6%±25.7%;与骨髓基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为2.50%±1.48%,3.20%±0.56%,1.65%±0.21%;5 d拟胚体自发分化10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为0.30%±0.07%,0.65%±0.07%,0.15%±0.07%.与自发分化10 d比较,3种基质细胞与5 d拟胚体接触培养,均能够促进拟胚体向造血细胞的分化,且胎肝基质细胞诱导的效率显著优于其他两种基质细胞(P＜0.05).结论:与卵黄囊基质细胞和骨髓基质细胞比较,胎肝基质细胞更有利于诱导人胚胎干细胞向造血细胞的分化.     

L-精氨酸对生长受限孕鼠胎盘胰岛素样生长因子-1及其受体表达的影响

目的 观察L-精氨酸对生长受限孕鼠胎盘胰岛素样生长因子-I（IGF—I）及其受体（IGF—IR）表达的影响，探讨L-精氨酸对生长受限孕鼠的作用机制。方法 取健康SD系大鼠雌雄3：1合笼饲养，按妊娠顺序随机抽取孕鼠分为空白组、模型组、观察组（L-精氨酸组）各12只，模型组、观察组孕8d至孕20d采用被动吸烟造模，模型组孕鼠腹腔注射生理盐水，观察组孕鼠腹腔注射L-精氨酸液，孕21d剖宫取胎，计数活胎数，测量活胎仔身长、体质量、头臀长及胎盘质量并制备胎盘标本，采用免疫组织化学法检测IGF—I及IGF—IR。结果 模型组胎鼠体质量、头臀长、胎盘质量均低于空白组与观察组（P〈0．05），而观察组胎鼠体质量、头臀长、胎盘质量与空白组比较无明显差别（P〉0．05）。光镜下各组胎盘均见IGF—I免疫反应阳性，模型组IGF—I、IGF—IR均低于空白组与观察组（P〈0．05），而观察组IGF—I、IGF—IR与空白组比较无明显差别（P〉0．05）。结论 L-精氨酸可能通过直接或间接促进IGF—I的合成和分泌，促进吸烟所致生长受限胎仔的生长发育。     

1,25(OH)2维生素D3诱导大鼠骨髓单核细胞形成破骨细胞

目的 观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成多核破骨细胞的作用.方法 实验分为单核细胞诱导组和全骨髓诱导组,每组各10只大鼠.密度梯度离心法分离大鼠骨髓中的单核细胞,α-MEM培养液中加入10-8 mol/L的1,25(OH)2 D3诱导单核细胞向破骨细胞分化.利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、倒置相差显微镜和扫描电镜,观察诱导不同时相TRAP阳性(TRAP )多核细胞的形态学特征、特异性酶表达、以及骨吸收陷窝.进而计数诱导的破骨细胞数量,鉴定其功能活性,并与全骨髓诱导方法比较.结果 骨髓单核细胞诱导组在培养第7 d出现TRAP 多核细胞,第14 d TRAP 多核细胞数量达峰值,第21 d TRAP 多核细胞数量开始减少.从培养第14 d到第23 d,单核细胞诱导组TRAP 多核细胞数量多于全骨髓诱导组(P＜0.05);培养第10 d到第23 d单核细胞诱导组骨吸收陷窝数量多于全骨髓诱导组 (P＜0.05).单核细胞诱导组破骨细胞数量高峰期可持续7 d,全骨髓诱导法仅持续3 d.结论 1,25(OH)2 D3能够诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成破骨细胞;所诱导的破骨细胞的数量和峰值持续时间、以及骨吸收活性均高于全骨髓诱导方法.