产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性

目的：了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性。方法:用VITEK-32全自动微生物分析仪对650株大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌进行ESBLs及耐药性检测。结果:650株大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中176株产ESBLs，ESBLs总阳性率为27．1％。产ESBLs菌对氨苄西林、替卡西林、头孢西丁、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率为93．1％-100％，对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类均有不同程度的耐药(26．9％-93．1％)，对亚胺培南的耐药率最低。结论:治疗产ESBLs菌感染，应用亚胺培南及其它药敏试验显示敏感的药物。     

牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达

目的 :克隆牛蛙核糖核酸酶 (RC RNase)基因 ,构建重组原核表达载体 ,利用大肠杆菌系统表达RC RNase蛋白。　方法 :采用RT PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC RNase基因 ,并进行序列测定 ;将RC RNase基因插入到 6×His表达载体 pRSET A中 ,构建成表达质粒pRSET RC RNase ,用异丙基巯基半乳糖 (IPTG)在大肠杆菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定。　结果 :扩增出一条约 380bp的基因片段 ,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致。经IPTG诱导 ,融合蛋白 (His) 6 RC RNase在大肠杆菌中得到成功表达 ,SDS PAGE上出现相对分子质量约为 16 0 0 0的一条新生蛋白带 ,经蛋白印迹验证为表达蛋白。薄层扫描显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 12 .5 % ,主要以包涵体形式存在。　结论 :正确克隆出RC RNase基因 ,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达 ,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础。     

网状分枝扩增方法检测志贺毒素2基因

目的 建立一种快速、灵敏检测志贺样毒素2(STX2)的方法。方法 用网状分枝扩增技术(RAM)和PCR检测合成的志贺样毒素2基因和临床分离的菌株，确定该方法的灵敏度和特异性。结果 RAM最少能检测10个志贺样毒素2的DNA分子，与PCR具有同样灵敏度。用PCR和RAM检测临床标本和食品中分离的33株大肠埃希菌，其中26株stx2基因为阳性，2种方法检测结果一致。结论 RAM与PCR方法相同的灵敏度和特异性，但操作简便，并且是在等温条件下扩增核酸，成本较低，适合检测食品和临床标本中大肠埃希菌志贺样毒素2。     

基于微量量热法的寒热中药对大肠杆菌生长热谱曲线的影响

目的：观察典型寒热中药黄连、制附子对大肠杆菌生长代谢作用的影响,探讨微量量热法用于中药寒热差异及量化研究的可行性。方法采用微量量热技术,测定大肠杆菌在不同浓度寒热中药水煎液干预下的生长热谱曲线,分析其热力学参数。结果黄连、制附子均可影响大肠杆菌产热效应,其效应影响与药物浓度具有正相关关系;黄连组的热焓值明显低于对照组,制附子组的热焓值明显高于对照组。结论微量量热技术是从生物体生命周期及能量代谢角度,观察中药寒热效应差异的客观化手段之一。     

Cox 比例风险模型分析 ESBLs 大肠埃希菌致尿路感染危险因素

目的探讨ESBLs大肠埃希菌致尿路感染的相关危险因素。方法回顾性分析尿培养结果为大肠埃希氏菌的286例尿路感染患者的临床资料,并进行ESBLs的检测,采用Cox比例风险模型分析产ESBLs大肠埃希菌致尿路感染的危险因素。结果单因素分析结果显示,ESBLs组和非ESBLs组的入住ICU、住院天数、尿管留置、免疫抑制剂、糖皮质激素、使用三代头孢菌素、泌尿系统手术之间比较,差异存在统计学意义（P〈0．05）。Cox比例风险模型分析结果显示：尿管留置（OR=1．936）、免疫抑制剂（OR=1．824）、使用三代头孢菌素（OR=2．129）是ESBLs大肠埃希菌致尿路感染的独立危险因素。结论对有尿管留置、免疫抑制剂、使用三代头孢菌素等危险因素存在的患者进行严密监测,尽量减少尿管留置等侵入性操作,控制三代头孢菌素和免疫抑制剂的使用,达到预防和控制产ESBLs大肠埃希菌尿路感染发生的目的。     

EGFL7原核表达载体的构建及鉴定

【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体,并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板,PCR扩增 EGFL7基因,克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中,转化大肠杆菌 BL21（DE3）,IPTG 诱导表达。 His‐tag 磁珠纯化重组蛋白 EGFL7,SDS‐PAGE 鉴定。【结果】克隆目的基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pET21a（＋）‐TRX‐EGFL7经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子量为80kD ,与预期相符。【结论】成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了EGFL7重组蛋白,为后续研究奠定了基础。     

大肠埃希菌MG1655 Lon蛋白酶编码基因敲除株的构建

目的构建Lon蛋白酶编码基因缺失的大肠埃希菌（E．coli MG1655）菌株。方法PCR扩增基因序列,该序列两端与Lon蛋白酶基因部分序列同源,中间部分为氯霉素抗性基因。电转化法将该片段转入大肠埃希菌MG1655。利用宿主菌-大肠埃希菌MG1655内pKIM6编码的入重组系统,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因-Lon编码基因。氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序两种方法鉴定lon敲除突变株。结果氯霉素抗性平板成功筛选出重组菌株,基因检测结果表明Lon编码基因被氯霉素抗性基因替代。结论本研究通过该方法成功获得了E．coliMG1655蛋白酶编码基因lon敲除突变株,为探讨大肠埃希菌Lon在牙菌斑形成中的作用奠定了基础。     

人转录因子sp1在大肠杆菌中的表达与体外纯化

目的：在大肠杆菌中表达人源转录因子spl蛋白,并进行体外纯化。方法：首先将人源sp1真核表达质粒pCMV-sp1中的sp1 cDNA用限制性内切酶切开,连入原核表达质粒pET28b,构建原核表达重组质粒pET28b-sp1-699c;然后将重组质粒转化入大肠杆菌BL21（DE3）菌株,经IPTG诱导表达带His-Tag的融合蛋白His-sp1（88-786aa）,通过包涵体的变复性和Ni-IDA亲和层析纯化后,SDS-PAGE鉴定纯化后的蛋白。结果：融合蛋白His-sp1在大肠杆菌内得到高效表达,纯化后可得到较高纯度的蛋白。结论：本研究获得了较高纯度的融合蛋白His-sp1,为进一步研究sp1蛋白对靶基因的转录调控奠定了基础。     

泌尿系感染患者大肠埃希菌fimH基因检测及尿便来源菌株同源性分析

目的：检测尿路致病性大肠埃希菌I型菌毛相关基因fimH携带率,调查相同泌尿系感染患者尿便大肠埃希菌的同源性,对相关基因fimH进行序列分析。方法：89株来自反复发作性尿路感染和急性单纯性膀胱炎患者清洁中段尿分离的大肠埃希菌。PCR方法检测I型菌毛基因fimH,采用Fisher确切概率法比较两组携带率是否有差异。取9名患者尿便同时培养的大肠埃希菌进行药敏初筛分型,同源性分析采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术,对其fimH基因PCR扩增产物进行序列分析。结果：89株检出81株fimH阳性,两组检出率分别为（64／70）91．4％和（17／19）89．4％,P〉0．05。9名患者中5名患者尿便同时分离大肠埃希菌各自存在相同的PFGE型,同一患者尿便同型株中fimH阳性者序列比对无差异,不同型株fimH阳性者其序列均有6～7处变异。结论：fimH基因存在于绝大多数尿路致病性大肠埃希菌中。引起泌尿系感染的大肠埃希菌部分来源于肠道。     

银杏叶提取物对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌作用

目的：探讨银杏叶提取物对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌活性,为研制开发治疗牙周病的新型纯中药抗菌药物提供药理学依据。方法：本实验分为阴性对照组、亚胺培南对照组和不同浓度及剂型的银杏叶提取物组。采用溶剂提取法制取银杏叶提取物,采用打孔法和试管法在厌氧环境下检测银杏叶提取物对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌活性,并与金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌对比。通过观察抑菌环直径和测定最小抑菌浓度（MIC）衡量银杏叶提取物的体外抑菌作用。结果：在抑菌环实验中,银杏叶提取物、银杏叶片和银杏叶软胶囊的原液和1∶4的稀释液作用于牙龈卟啉单胞菌,抑菌环直径随着浓度的降低而减小,银杏叶提取物的最大抑菌直径为16.5 mm,银杏叶片和软胶囊最大抑菌直径分别为15.3和14.5 mm,银杏叶提取物抑菌直径明显大于银杏叶片和银杏叶软胶囊（P <0.05）,银杏叶片与银杏叶软胶囊抑菌直径比较差异无统计学意义（P>0.05）;大肠埃希菌组和金黄色葡萄球菌组得到同样的结果。MIC测定,银杏叶提取物组内比较,银杏叶提取物浓度高于1.95 mg/L时,试管内均无牙龈卟啉单胞菌生长,而大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌仍可以生长,浓度高于6.25和12.5 mg/L时大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌不生长,银杏叶提取物对牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用优于大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。结论：银杏叶提取物对牙龈卟啉单胞菌具有抑菌作用。