基因沉默与RNA干扰

生物体经过漫长的进化和自然选择后逐渐形成了对异常基因活动进行监控和防御的能力,这种天然免疫机制在最近几年的研究中得到了进一步认识。所谓异常基因活动是指病毒基因侵入和复制,转座子和转基因表达。正常基因活动几乎不产生双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),而异常基     

链霉菌RNA聚合酶的异质性和启动子的多样性

链霉菌是革兰阳性好氧土壤细菌,其生活周期涉及到一个复杂的形态分化过程,包括孢子发芽、营养菌丝生成、气生菌丝形成和孢子生长.链霉菌的基因组大约为8×10~6~1×10~7个碱基对,相当于大肠杆菌的2倍多,其DNA含有异常高的GC比(约为73%),并有证据表明,染色体的线性形式在链霉菌中很普遍.在链霉菌中,从形态分化到次级代谢过程无不为一个复杂的、常常是相互偶联的多层次调控系统所支配.这些调控层次包括:启动子和RNA鄹合酶的多样性,阻遏作用,活化作用,感受器/响应器调控系统,ppGpp系统,调控tRNA系统,以及被誉为细菌激素的丁羧内酯类化合物系统.许多异源基因,包括人的白细胞介素2(IL-2),牛的生长激素,大肠杆菌木糖异构酶基因等,都可在链霉菌中获得表达.高活性启动子的存在往往是外源基因表达的关键.因而,了解有关链霉菌启动子结构与基因表达的关系,对于构建链霉菌分泌表达载体相当重要.     

RNA干扰技术在抗HIV—1感染中的实验研究

RNA干扰是双链RNA特异性关闭靶基因表达的转录后基因沉默机制，它为HIV-1的治疗开辟了一条新的有效途径，本文就此技术在抗HIV-1感染中的研究进展进行综述。     

RNA干扰（RNAi）技术及其在功能基因组学研究中的应用

近年来的研究表明 ,一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内某些基因致使mRNA降解 ,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 ,称为RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)。由于可以作为代替基因敲除的遗传工具 ,RNAi技术正在改变着功能基因组学 (functionalgenomics)领域的研究步伐。《科学》杂志和美国科学促进会将RNAi技术评选为2 0 0 2年十大重大科学成就之首。1　RNAi及其作用机制1.1　RNAi回顾首次发现双链RNA (doublestrandRNA ,dsR NA)能够导致基因沉默的现象来源于对线虫Caenorhabditiselegans的研究。1995年 ,康乃尔大学的…     

新分呼肠科病毒形态及核酸研究

自我国西藏边陲地区采集的蜱、鸟、鼠标本经ＢＨＫ１３细胞培养，分离到明显致细胞病变的病毒１７株。制样后电镜观察，病毒呈球形含双层壳，大小为６８～８０ｎｍ，病毒性包涵体形成明显，病毒倾向于晶格样排列，经细胞裂解而释放。病毒感染的培养悬液及蔗糖密度梯度纯化的样品均可见形态一致的病毒颗粒，其形态及形态发生符合呼肠病毒科成员的特征。纯化病毒抽提核酸，电泳结果也显相同类属的图象，说明新分病毒为呼肠病毒科成员，从其明显致病性、宿主广泛性等可能为环状病毒属，类似于科罗拉多蜱传热病毒。     

Small interfering RNA inhibits SARS-CoV nucleocapsid gene expression in cultured cells and mouse muscles

SARS-CoV isa newly identified coronavirus that causes severe acute respiratory syndrome （SARS）. Currently, there is no effective method available for prophylaxis and treatment of SARS-CoVinfections. In the present study, the influence of small interfering RNA （siRNA） on SARS-CoV nucleocapsid （N） protein expression was detected in cultured cells and mouse muscles. Four siRNA expression cassettes driven by mouse U6 promoter targeting SARS-CoV N gene were prepared, and their inhibitory effects on expression of N and enhanced green fluorescence protein （EGFP） fusion protein were observed.     

表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

Objective To investigate the antitumor effect of oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene for renal cancer therapy. Methods Nude mice were divid-ed randomly into 4 groups (8 mice/group),and were treated by intratumoral injections of ZD55-hTERT ( an oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) ,ZD55-EGFP ( an on-colytic adenovirus) and Ad-hTERT (replication-defective adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) with three consecutive daily at 7 × 108 pfu/day or treated with PBS as a control. The expression of E1A and hTERT, and apoptosis of tumor xenografts were assessed by immunohistochemi-cal technique at the 7th day after injections. The tumor volume was measured at the 50th day after injec-tions. Results The tumor volume in ZD55-hTERT treatment group ( 124.1±27.5) was significantly less than that in ZD-EGFP (499.8±77.1 ) and Ad-hTERT ( 609.0±102.5 ) treatment groups. The E 1A pos-itive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly higher than that in Ad-hTERT treatment group. The hTERT positive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly lower than that in Ad-hTERT treatment group. ZD55-hTERT treatment of tumor xenografts resulted in an increased apoptotie cell death as compared with ZD55-EGFP and Ad-hTERT treatment. Conclusion The antitumor effect of ZD55-hTERT was more potent than oneolytie adenovirus ZD55-EGFP and Ad-hTERT.     

精神分裂症患者致炎性细胞因子和酪氨酸羟化酶mRNA表达水平的研究

目的探讨精神分裂症的外周神经免疫机制及其与临床症状的关系。方法检测精神分裂症患者致炎性细胞因子白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）以及酪氨酸羟化酶（TH）的mRNA表达水平，采用逆转录-聚合酶链反应及半定量检测技术，分别检测39例精神分裂症患者（患者组）、25例同胞（同胞组）及30名正常对照（对照组）外周血单个核细胞（PBMC）IL-1β、TNF-α及TH基因表达水平，同时应用阳性和阴性症状量表（PANSS）评定精神分裂症患者临床症状。结果患者组、同胞组及对照组IL-1β的mRNA表达水平分别为1．52±1．01、1．52±1．09和0．74±0．38；TNF—α的mRNA表达水平分别为1．18±0．99、1．01±0．87和0．70±0．29；TH的mRNA表达水平分别为0．55±0．33、0．61±0．32和0．28±0．20。患者组和同胞组的IL-1β、TNF—α、TH的mRNA表达水平均明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。患者组IL-1β（r=0．420）、TNF—α（r=0．430）的mRNA表达水平与PANSS的-般病理症状分呈正相关（P〈0．01）。同胞组与对照组合并统计，IL-1β与TNF-α的mRNA表达水平呈正相关（r=0．847，P〈0．01）；IL-1β与TH的mRNA表达水平呈正相关（r=0．666，P〈0．01）。患者组仅IL-1β与TNF—α的mRNA表达水平呈正相关（r=0．942，P〈0．01）。结论精神分裂症患者PBMC细胞TH、IL-1β和TNF—α的mRNA表达水平高于正常，且与精神分裂症的-般病理症状显著相关。