利用质谱技术鉴定人肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-A3表位

目的鉴定人肝癌细胞系HLE细胞表面自然呈递的1条HLA-A2限制性MAGE—A3抗原表位FLWGPRALV（MAGE-A3271-279）。方法用高效液相色谱仪（HPLC）及液-质联用仪对人工合成多肽FLWGPRALV进行鉴定,明确该多肽的HPLC出峰时间和质谱信号特征,并确定这两种仪器对该多肽的检测下限。以弱酸洗涤法从HLE细胞表面洗脱出由主要组织相容性抗原复合物（MHC）分子自然呈递的抗原多肽,用HPLC纯化分馏,根据人工合成多肽的出峰时间,收集该出峰时间前后2min的馏分,低温冻干后以液-质联用仪进行鉴定,明确其中是否存在MAGE-A3271-279抗原多肽。结果经纯化的多肽洗涤样品经液-质联用仪检测,可获得一个（m／z）2为529．9的双电荷质谱信号,对其碰撞诱导解离谱图进一步分析,证明其序列（自N端至C端）为FLWGPRALV,相对分子质量为1058．4Da,与MAGE-A3271-279抗原多肽相符,说明样品中存在低丰度的目的抗原多肽。结论可以从人肝癌细胞系表面直接分离、鉴定出可被HLA-A2分子自然呈递的MAGE-A3表位多肽,提示MAGE—A3271-279抗原多肽在肝癌免疫治疗中具有潜在应用价值。     

99Tcm-RGD-4CK在动物体内的分布及显像

目的探讨^99Tc^m-环形精氨酸．甘氨酸-天冬氨酸九肽（RGD-4CK）在健康小鼠体内的生物分布及在健康家兔体内的动态显像表现。方法采用预锡化法以^99Tc^m直接标记RGD-4CK，3MM色谱纸层析测定^99Tc^m-RGD-4CK标记率，并计算其比活度。研究^99Tc^m-RGD-4CK于1、5、20、60、90、120、180和240min在健康小鼠体内的生物分布特性；通过SPECT显像，结合感兴趣区（ROI）时间-放射性曲线分析，观察240min内^99Tc^mmRGD-4CK在健康家兔体内的动态分布变化。结果^99Tc^mmRGD-4CK的标记率为（97．80±0．28）％，比活度为（11．91±0．04）TBq／mmol。小鼠血液放射性清除迅速，通过肾脏排泄较快，其余组织器官放射性均随时间逐渐降低，而脑放射性水平始终最低。家兔各组织器官放射性均随时间逐渐下降，与同一时间肾、心、肝相比，肺、胃、肌肉放射性呈低水平；1min双肾即显影，5min心、肝影开始减淡，肺放射性分布均匀，强度低于肝脏，膀胱显影；5min后膀胱影持续增浓，20min后软组织影逐渐减淡；胆囊始终未显影，腹部放射性呈持续低水平，胃区放射性始终缺损，颈部未见明显放射性浓聚。结论^99Tc^m-RGD-4CK制备方法简便，标记率高，体内稳定性好，具有比较珲椒并符合实际的动物体内动力学表现。     

结缔组织生长因子在胃癌组织中的表达及其与预后的关系

目的：检测结缔组织生长因子（CTGF）在胃癌组织中的表达并探讨CTGF表达在患者预后判断中的意义。方法：应用免疫组织化学染色方法检测108例胃癌组织中CTGF的表达情况,分析CTGF表达与患者临床病理特征、术后生存时间之间的关系。结果：CTGF高表达常见于发生淋巴结转移的病例（P=0.038）,CTGF表达水平低的患者术后五年生存率（48.4%）显著高于表达水平高的患者（23.9%,双侧log-rank检验,P=0.003 5）。Cox回归分析证明患者TNM分期（P〈0.001）、肿瘤分化（P=0.027）和CTGF表达水平（P=0.016）是胃癌的独立预后因子。结论：胃癌组织中CTGF高表达与发生淋巴结转移和患者预后不良显著相关。     

血清脂联素和抵抗素与初诊2型糖尿病的相关性研究

目的：探讨脂联素和抵抗素与2型糖尿病（T2DM）的关系。方法：对39例初诊T2DM患者做研究对象，选37例健康人做对照。采用酶联免疫测定法测定空腹血清脂联素和抵抗素浓度，并测定各组的空腹血糖、胰岛素、尿酸和血脂水平等；用HOMA—IR评价胰岛素抵抗，分析各指标间的相关性。结果：DM组血清脂联素浓度（3．66±0．91）ng／ml低于正常对照组（5．26±0．78）ng／ml，差异有显著性（P〈0．01）。DM组血清抵抗素浓度（6．10±0．43）μg／ml与正常对照组（6．09±0．47）μg／ml差异无显著性。在DM组，采用相关分析发现，血清脂联素浓度与患者收缩压、舒张压、年龄、病程、空腹胰岛素、体重指数、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、HOMAIR呈负相关，与脂蛋白A1正相关；血清抵抗素与年龄、病程、收缩压、舒张压、甘油三酯呈正相关；与脂蛋白A1呈负相关，与体重指数、HOMAIR等不相关。结论：脂联素水平的下降与DM发病有关，而抵抗素与之无关。     

人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖和Neurocan基因表达的影响

【摘要】 目的 观察人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖及硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan基因表达的影响,并探讨IKVAV潜在的促进受损脊髓功能恢复的作用。 方法 设计IKVAV序列,人工合成IKVAV多肽,将星形胶质细胞接种于1% IKVAV包被的培养板上,分别于培养1 d、3 d、5 d、7 d、9 d后在激光共聚焦显微镜下观察IKVAV多肽和星形胶质细胞的组织相容性,用CCK8法检测星形胶质细胞增殖情况,用荧光定量PCR法检测星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan的表达,并与对照组比较,进行统计学分析。 结果 与对照组相比,实验组培养板上星形胶质细胞总数明显减少,但细胞存活率＞95%。荧光定量PCR结果显示实验组星形胶质细胞Neurocan的表达量较对照组显著降低。 结论 人工合成IKVAV多肽可抑制星形胶质细胞增殖、下调硫酸硫酸软骨素蛋白多糖的表达,从而抑制受损脊髓胶质瘢痕的形成,促进脊髓功能恢复。     

血浆脑利钠肽、内皮素-1水平与慢性心衰的关系

目的研究慢性心力衰竭(CHF)患者血浆脑利钠肽(BNP)、内皮素-1(ET-1)水平的变化及其与心脏功能的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定血浆BNP水平,放射免疫法测定血浆ET-1水平,并以38例健康人作为对照组进行比较研究。结果心衰组血浆BNP、ET-1水平较对照组均显著增高(P<0.01),并且随着NYHA心功能分级的增高而逐级升高。血浆BNP、ET-1水平与左室射血分数(LVEF)呈负相关(r=-0.532,r=-0.567,P<0.001),BNP与ET-1呈正相关(r=0.543,P<0.001)。结论在CHF患者中BNP与ET-1均可反映心衰的严重程度,其中血浆BNP水平更为敏感;血浆BNP和ET-1不仅可以反映心脏功能状态,而且二者在CHF的病理生理过程中还具有一种相互影响的关系。*     

高效离子交换色谱法测定肌氨肽苷注射液中次黄嘌呤含量

目的 建立采用磺酸基阳离子交换键合硅胶的离子交换色谱法，对肌氨肽苷注射液中次黄嘌呤含量进行测定。方法 采用磺酸基阳离子交换键合硅胶色谱柱；水（硫酸调节pH值至2.5±0.1）为流动相；二极管阵列检测器，检测波长为260 nm；流速0.8 mL·min^-1；柱温30℃。结果 次黄嘌呤在1~50 μg·mL^-1线性良好，平均回收率为99.0%。结论 该方法操作简便，色谱图基线稳定，主成分峰形对称，分离度高，方法的重复性和耐用性好、准确度高，可用于肌氨肽苷注射液中次黄嘌呤的含量测定。     

利用噬菌体多肽库筛选卵巢癌细胞特异性结合肽

目的:利用噬菌体7肽库进行体外快速差减筛选(biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands,BRASIL),从而获得卵巢癌细胞株HO-8910细胞表面特异性结合肽。方法:以中国仓鼠卵巢细胞株CHO为吸附细胞,卵巢癌细胞株HO-8910为靶细胞,利用噬菌体展示技术联合差减筛选策略,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选13个噬菌体单克隆进行DNA测序,利用噬菌体竞争结合实验、ELISA实验、细胞免疫染色、细胞免疫荧光、合成多肽的竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体的亲和性及特异性。结果:筛选出的噬菌体NPMIRRQ与卵巢癌细胞株HO-8910有较高的亲和性及特异性。结论:阳性噬菌体表面展示的多肽NPMIRRQ可能为卵巢癌的早期诊断和转移复发监测提供新思路。