微小RNA let-7c慢病毒载体的构建及过表达研究

目的 构建微小RNA let-7c重组慢病毒载体,验证转染该载体系统后对肝癌细胞增殖的影响 方法 构建表达含494bp let-7c基因的重组慢病毒载体,检测let-7c及对照组病毒滴度分别为5.01×10E8 TU/m1、5.15×10E8TU/ml;转染HepG2细胞,以荧光定量聚合酶链反应(PCR)对let-7e表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价let-7c过表达后对HepG2细胞增殖的影响.结果 构建的let-7c慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;转染HepG2细胞72 h后,let-7c表达上调312倍;CCK-8法检测显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论 成功构建Iet-7c重组慢病毒载体并感染HepG2细胞后高效表达成熟let-7c,抑制了HepG2肝癌细胞的增殖.     

心房颤动患者血清和组织miR-223及MMP-9的表达及临床价值

目的探索miRNA-223在房颤患者心房肌组织和血清的表达差异及miRNA-223与MMP-9在房颤患者的表达水平及在房颤结构重构的发生机制。方法患有风湿性心瓣膜病接受心脏瓣膜置换术的患者31例,其中窦性心律患者15例,慢性房颤患者16例。另选取15名健康人血清作为对照组。实时荧光定量PCR检测心房肌组织和血清miRNA-223的相对表达量。ELISA及免疫组织化学检测MMP-9蛋白的表达及分布水平;HE染色及Masson染色观察心肌组织病理结构及胶原纤维含量。结果与窦性心律组相比,房颤组心房肌组织miRNA-223和血清miRNA-223表达水平均显著升高（0.0603±0.0228 vs.0.0261±0.0035,P〈0.01;4.2281±0.9165 vs 2.7613±1.2166,P〈0.05）;房颤组血清MMP-9表达水平高于窦性心律组（4.2281±0.9165 vs 2.7613±1.2166,P〈0.05）;MiRNA-223表达水平与MMP-9蛋白表达呈正相关（r=0.901,P〈0.05）。结论 MiRNA-223表达增高及正向调控MMP-9的表达,共同影响心肌胶原的代谢,促进心肌纤维化,参与房颤发生与维持。miRNA-223有望成为一种新型风湿性心脏病合并房颤的诊断标志物。     

miRNA与食管癌

动植物中广泛存在着一大类小的非编码蛋白质的RNA,21-25个核苷酸长度,被命名为microRNA(miRNA). miRNA在物种进化中相当保守,其表达有组织特异性和时序特异性. 其功能为负调控基因表达,进而调节细胞的代谢,增殖,分化和凋亡等基本的生理过程. 因此,miRNA的改变必会导致一些严重的病理过程. 研究已证实miRNA在肿瘤的发生和发展起着癌基因或抑癌基因的作用,miRNA的表达谱可用于某些肿瘤的诊断、分期和判断预后,并且在肿瘤分类方面较mRNA有更大地优越性. 本文着重介绍miRNA的产生,作用机制,与肿瘤的关系,检测方法及其在食管癌的诊断、分期和生物治疗方面的潜在作用.     

The role of microRNA in periodontal tissue: A review of the literature

MicroRNAs (miRNAs) bind at the 3′UTR of their target mRNA to induce gene silencing. Through this mechanism, number of biological pathways implicated in developmental, physiological, and pathological processes, have been frequently found to involve miRNA functions. MiRNA functions in bone metabolism have also been reported, especially in association with receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL)-induced osteoclastogenesis. Expression of RANKL has been related to several inflammatory mediators, and thus some miRNAs may be implicated in the regulatory mechanism of inflammatory-induced RANKL expression as shown in periodontal resident cells such as gingival fibroblasts or periodontal ligament cells. This review aims to review the current miRNA research relating periodontal tissue and its relevance in periodontal inflammation. In miRNA profiling studies of tissues isolated from individuals with periodontal disease, miR-223 has been consistently identified as a potential candidate miRNA to be further investigated in periodontitis-related processes. Although these studies point to an important role of miRNA-mediated epigenetic changes in tissue inflammation and alveolar bone loss, further investigation is still required to determine the function of miRNAs in the complex processes of periodontal tissue homeostasis and pathogenesis. Knowledge gained from future studies will be beneficial in developing alternative therapeutic approaches, especially ones that use miRNA delivery systems to treat periodontal disease.     

MicroRNA在代谢综合征疾病中的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一个非编码RNA,能在转录后水平调控基因的表达,广泛地存在于真核细胞内。miRNA与胰岛素抵抗以及血糖调控过程密切相关,同时也与脂代谢、动脉粥样硬化的发生、发展紧密联系,而糖尿病、胰岛素抵抗、高血脂、动脉粥样硬化以及高血压是代谢综合征的主要表现。因此,研究miRNA与代谢综合征的关系可进一步阐明代谢综合征的发病机制,并为其预防和治疗提供新的方向。     

肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702差异微小RNA筛选

目的：初步探讨肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702微小 RNA（miRNA）分子表达谱的差异。方法选取肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702样本分别作为实验组和对照组,采用高通量的 miRNA微阵列芯片技术筛选两者间差异表达的 miRNA,并运用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）验证芯片结果的可靠性（样品间变化标准以上调或者下调2倍作为判定的阈值范围）。结果在肝癌细胞株 HepG2中,上调2倍的差异表达 miRNA分子有32个,其中上调超过8倍差异表达 miRNA有12个;下调2倍的差异表达miRNA有26个,其中下调超过8倍的miRNA分子有4个（P＜0．05）,miRNA上调与下调表达率差异有统计学意义。结论肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702的差异表达 miRNA分子可能与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生、转移以及侵袭能力相关,为进一步研究与肿瘤相关的 miRNA在肝细胞癌发病机制中的作用奠定基础。     

miRNA与肺纤维化的研究新进展

MicroRNA(miRNA)是一类非编码小RNA,长度仅22个核苷酸左右,在基因转录后水平调节靶基因表达,参与调控机体各种生理进程,包括细胞增殖、分化、凋亡等.最新研究发现,一些miRNA与肺纤维化发生、发展密切相关,在此综述了这一方面的研究进展,以进一步认识肺纤维化的发生机制.     

支气管哮喘病因和发病机制的研究进展

目前认为Th1/Th2型免疫应答失衡,是支气管哮喘(简称哮喘)发病的一个重要的免疫学机制.最近研究发现,哮喘的发病机制与许多因素有关.综述如下:吸烟是哮喘发病的危险因素之一.Th17及相关的细胞因子在哮喘中起着重要的作用.IL-33在哮喘的发病机制中起到重要的介导作用.MicroRNA的主要功能是在转录后水平调节相关基因表达,进而对机体生长、发育以及疾病发生过程调控.骨形成蛋白参与多种组织的纤维化进程,Gremlin是一种骨形成蛋白拮抗剂,探讨其在哮喘中的分布及作用,为哮喘发病机制的研究及治疗提供新的思路.脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白在哮喘中发挥重要作用.     

MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义

目的通过检测肝癌和癌旁组织中microRNA(miRNA)合成相关基因的mRNA表达,分析其与肝癌恶性行为的关系。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝癌组织及其配对癌旁组织中miRNA生物合成相关基因的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌预后的关系。结果 RT-PCR结果显示,与相应的癌旁组织相比,肝癌组织中细胞核内miRNA生物合成相关基因Drosha、DGCR8、DBR1、ADAR、Exportin 5的mRNA表达水平显著升高(P<0.0001),而细胞质内miRNA生物合成相关基因Dicer、AGO2、GEMIN3、GEMIN4的mRNA表达水平显著下降(P<0.0001)。肝癌组织中DBR1和Exportin 5 mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05),癌旁组织中DGCR8mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05)。结论 Dicer的表达可能在肝癌发生发展过程中起重要作用。DBR1、Exportin 5和DGCR8可以作为肝癌治疗的潜在干预靶点。