Cytotoxic effects and specific gene expression alterations induced by I-125-labeled triplex-forming oligonucleotides

Abstract

Purpose: Triplex-forming oligonucleotides (TFO) bind to the DNA double helix in a sequence-specific manner. Therefore, TFO seem to be a suitable carrier for Auger electron emitters to damage exclusively targeted DNA sequences, e.g., in tumor cells. We studied the influence of I-125 labeled TFO with regard to cell survival and induction of DNA double-strand breaks (DSB) using TFO with different genomic targets and target numbers. Furthermore, the ability of TFO to alter the gene expression of targeted genes was examined.

Materials and methods: TFO were labeled with I-125 using the primer extension method. DNA triplex formation and sequence-specific DSB were demonstrated in vitro. Cell survival was analyzed by colony-forming assay and DNA damage was assessed by microscopic quantification of protein 53 binding protein 1 (53BP1) foci in the human squamous carcinoma cell line II (SCL-II). Quantitative real-time polymerase-chain-reaction (qRT-PCR) was performed to analyze gene expression alterations.

Results: The sequence-specific induction of a single DSB in a 1695 bp long DNA double stranded fragment was demonstrated in vitro. I-125-labeled TFO binding to single and multiple targets were shown to induce a pronounced decrease in cell survival and an increase of DSB. TFO targeting multiple sites differing in the total target number showed a significant different cell killing per decay that is also in good accordance with the observed induction of DSB. Single gene targeting I-125-labeled TFO significantly decreased cell survival and altered gene expression in the targeted gene.

Conclusions: I-125-labeled TFO enable specific targeting of DNA in vitro as well as in a cellular environment and thus induce sequence-specific complex DNA lesions. Therefore I-125-labeled TFO might be a very useful tool for basic DNA repair research.     

Determination of Bradykinin in Blood by a Sensitive Radioimmunoassay

Antibodies of high avidity (maximum Km 1.3 × 10¹⁰ L/M) were produced in rabbits against bradykinin coupled to ovalbumin with toluene-2,4-diisocyanate. Tyrosin⁸ bradykinin was labelled to a specific activity of 530–700 Ci/mmol with ¹²⁵I by means of lactoperoxidase. Sensitivity of the radioimmunoassay was 0.01 μg/1 blood. Specificity studies demonstrated the essential role of the C-terminal arginine of bradykinin for binding to antibody. Mean recovery of [³ PHJbradykinin internal standard after the preparation of 86 blood samples was 39.0%. The major loss occurred during ethanol precipitation. In venous blood collected at random conditions from 32 normal subjects the bradykinin concentration ranged 0.04–0.46 μg/1 and showed no sex difference.     

原发性输卵管癌19例临床分析

目的：探讨原发性输卵管癌的临床表现和诊断方法。方法：回顾性分析我院2001年至2009年2月收治的19例原发性输卵管癌病例的临床资料。结果：患者平均年龄57．6岁。绝经后妇女13例（68．4％）。最常见的临床表现依次为盆腔肿块16例（84．2％）,腹胀8例（42．1％）、腹痛6例（31．5％）、异常阴道流血3例（15．7％）和阴道排液1例（5．2％）。组织学类型：浆液性腺癌17例（89．4％）,恶性苗勒氏混合瘤2例（10．6％）。细胞分化：低分化12例（63．1％）,中-低分化4例（21．0％）,中-高分化3例（15．7％）。FIFO分期：Ⅰ期2例,Ⅱ期3例,Ⅲ期9例,Ⅳ期2例。结论：原发性输卵管癌恶性程度高、临床表现多样且缺乏特异性,术前诊断率低。超声及血CA125有助于原发输卵管癌的早期诊断。     

前列腺癌近距离放疗41例疗效回顾

目的 :观察早期局限性前列腺癌12 5I近距离放疗的临床效果。　方法 :对 4 1例确诊的局限性前列腺癌患者进行前列腺内12 5I植入。采用两步法 ,即治疗前进行前列腺体积研究 ,确定前列腺各部位放射量 ,处方剂量 16 0Gy;治疗中直肠超声波探头和C臂X线协助定位 ,专职护士长期随访。　结果 :获得长期随访 (3～ 4年 ) 33例(80 % ) ,其中 2例 (6 % )前列腺特异抗原 (PSA)升高者经穿刺确诊肿瘤局部复发 ,无死亡病例。早期并发症主要为尿路刺激症状 ,6个月内症状严重 ,1年以后症状消失。　结论 :前列腺近距离放疗生存率高 ,有短期尿路刺激症状 ,长期并发症少。     

125I粒子和125I+吉西他滨在治疗局部进展期胰腺癌中的比较

目的:比较放射性125I粒子和125I+吉西他滨(gemcitabine,GEM)在治疗局部进展期胰腺癌中的作用.方法:2000年4月~2003年1月,38例局部进展期胰腺癌(locally advanced pancreatic cancer,LAPC)患者随机分成2组:A组18例(125I粒子组),B组20例(125I+GEM).所有患者均于手术中施行了125I粒子植入术.采用改良Dimension-averaging法来计算相关剂量.33例行胆肠和/或胃肠吻合术.结果:38例患者中,可评价客观疗效者(objective tumor response,OTR)34例,可评价临床受益反应(clinical benefit response,CBR)者36例,可行毒性反应评价者36例.CR+PR率A组为37.6%,B组为44.5%(P>0.05),PR缓解期A、B组各为6.7个月和4.8个月.CBR率A组为11.7%,B组为42.1%(P<0.05).两组毒性反应率和并发症率基本没有差异.12和24个月生存率A组为29.8%、14.4%,B组为67.1%、38.7%(P=0.04).总的Ⅱ期12、24个月生存率为71.9%、31.3%,总的Ⅲ期12、24个月生存率为31.5%、7.9%(P=0.02).结论:125I和125I+GEM在治疗LAPC有一定的客观有效率,但是,125I+GEM比125I能更好地改善LAPC的生存质量,提高LAPC生存率,并且Ⅱ期患者生存率优于Ⅲ期.     

125I-RGD-4CY体内生物学分布与药物代谢动力学研究

目的　研究12 5I标记的整合素αVβ3 拮抗多肽 (12 5I RGD 4CY)在小鼠体内的生物学分布及药物代谢动力学。方法　应用Iodogen法行12 5I标记RGD 4CY多肽 ,经小鼠尾静脉注射给药 ,分别在10、30、6 0、12 0和 2 4 0min不同时相点测量血液及各主要组织器官的放射性浓度 ,计算获得其体内生物学分布与药物代谢动力学数据。结果　RGD 4CY能够被12 5I有效标记 ;给药后在血液、肾脏、肝脏有较高的放射性分布 ,小肠、肺脏、肌肉呈低水平放射性分布 ;其分布相半衰期为 9.17min ,消除相半衰期为831min。结论　静脉注射12 5I RGD 4CY后 ,组织本底能够在较短的时间内达到低水平 ,血药浓度一时间曲线符合二房室模型特征 ,在体内的分布与消除为一级线性动力学过程。     

肿瘤标志物在肝细胞癌合并门静脉癌栓诊断中的意义

目的:分析肿瘤标志物在肝细胞癌合并门静脉癌栓诊断中的意义.方法:回顾性分析1993年1月-2011年1月经影像学诊断为肝细胞癌并门静脉癌栓患者475例,同时随机选取同期经影像学诊断为肝细胞癌的手术患者977例.将甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA125作为实验因素.结果:2组一般情况差异无统计学意义(P＞0.05). ROC分析结果显示AFP、CA125的AUC面积分别达到0.814、0.783,AFP诊断界数值为32.91 ng/mL,CA125为113.65 U/mL.两者并联敏感性为0.909,特异性为0.410;串联时敏感性为0.520,特异性为0.970.当肝细胞癌患者满足AFP≥20 000 ng/mL时,其诊断敏感性为0.24,特异性为0.96,准确性为0.73,筛检阳性率0.76.结论:在检测肝细胞癌合并门静脉癌栓中尚无敏感性和特异性均令人满意的肿瘤标志物,AFP和CA125水平的检测对临床实践中判断是否合并门静脉癌栓有一定的指导意义.     

卵巢癌风险预测模型在上皮性卵巢癌早期诊断中的应用价值

目的：探讨卵巢癌风险预测模型（ROMA）对上皮性卵巢癌患病风险的评估价值及与患者临床病理分期的关联性,为上皮性卵巢癌的临床诊疗及预后分析提供依据。方法：回顾性分析经术后石蜡切片病理确诊的135例卵巢肿瘤患者的临床资料,将其分为卵巢良性肿瘤组（n=66）、上皮性卵巢癌组（n=58）和非上皮性卵巢癌组（n=11）。根据各组患者术前检测的血清人附睾蛋白4（HE4）和糖类抗原125（CA125）水平计算其ROMA值,根据各组患者HE4、CA125和ROMA临界值计算HE4、CA125和ROMA阳性率,分析卵巢癌患者血清HE4、CA125和ROMA阳性率与患者临床分期之间的关系,评价其对卵巢肿瘤患者的诊断效能。结果：上皮性卵巢癌组患者血清HE4、CA125水平和ROMA值均明显高于卵巢良性肿瘤组及非上皮性卵巢癌组（P<0.05）。上皮性卵巢癌组患者HE4、CA125和ROMA阳性率均高于卵巢良性肿瘤组（P<0.01）,并随着临床分期的升高而升高。与HE4和CA125阳性率比较,卵巢良性肿瘤患者ROMA阳性率最低,在各期上皮性卵巢癌中ROMA阳性率均高于CA125阳性率。ROMA在绝经后卵巢肿瘤患者组的敏感度及阴性预测值均高于绝经前卵巢肿瘤患者组（P<0.05）,而特异度及阳性预测值在绝经前及绝经后卵巢肿瘤患者组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。3项指标中,ROMA的各项诊断效能指标最高,CA125的各项诊断效能指标最低。结论：ROMA对上皮性卵巢癌风险的诊断价值高于CA125或HE4,对绝经后患者具有更好的诊断价值,可提高卵巢癌的早期诊断效能。     

心房颤动患者CA-125表达水平及其意义

目的：探讨CA-125在阵发性和持续性心房颤动（简称房颤）患者中的表达水平及其意义。方法：回顾性分析2017年6月至2018年6月在温州医科大学附属第一医院住院的642例房颤患者临床资料。将入组房颤患者根据阵发/持续房颤分为2组,比较临床资料（年龄、性别、BMI、房颤病程、左房内径、射血分数、BNP、肝肾功能、CHA2DS2-VASc评分、CA-125等）,应用多因素logistic回归分析持续性房颤的危险因素。结果：与阵发性房颤患者相比,持续性房颤患者的CA-125水平更高（P＜0.001）。Logistic回归分析显示CA-125是持续性房颤的独立危险因素（P＜0.05）。结论：CA-125可能是持续性房颤的预测指标。     

肝硬化患者血清CA125水平升高的相关因素分析

背景　肝硬化患者血清CA125呈现不同程度的升高,但肝硬化血清CA125升高的影响因素尚不明确。从多角度分析影响肝硬化患者血清CA125升高的相关因素非常必要。目的　探讨影响肝硬化患者血清CA125水平升高的相关因素。方法　选取2012年1月-2018年2月于郑州大学第二附属医院住院的肝硬化患者205例,行腹腔穿刺113例。分组情况：根据血清CA125水平分为CA125正常组（n=39）与CA125异常组（n=166）;根据腹腔积液量分为无腹腔积液组（n=52）、少量腹腔积液组（n=40）、中量腹腔积液组（n=51）、大量腹腔积液组（n=62）;根据Child-Pugh分级分为Child-Pugh A级组（5~6分）46例、Child-Pugh B级组（7~9分）87例、Child-Pugh C级组（≥10分）72例;根据腹腔积液有核细胞计数分为腹腔积液有核细胞计数正常组65例、腹腔积液有核细胞计数升高组48例（共113例行腹腔穿刺）。比较CA125异常组与CA125正常组的总胆红素、总胆汁酸、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、凝血酶原时间（PT）、清蛋白、总蛋白、凝血酶原活动度、年龄、性别;观察腹腔积液量与血清CA125水平的相关性、Child-Pugh分级与血清CA125水平的相关性、腹腔积液有核细胞计数与血清CA125水平的相关性。结果　CA125异常组总胆红素、总胆汁酸、AST高于CA125正常组,PT长于CA125正常组,清蛋白、总蛋白、凝血酶原活动度低于CA125正常组（P<0.05）。无腹腔积液组血清CA125水平低于少量腹腔积液组、中量腹腔积液组、大量腹腔积液组（P<0.05）;少量腹腔积液组血清CA125水平低于中量腹腔积液组、大量腹腔积液组（P<0.05）。Child-Pugh A级组血清CA125水平低于Child-Pugh B级组、Child-Pugh C级组（P<0.05）;Child-Pugh B级组血清CA125水平低于Child-Pugh C级组（P<0.05）。腹腔积液有核细胞计数升高组血清CA125水平高于腹腔积液有核细胞计数正常组（P=0.023）。腹腔积液量、Child-Pugh分级、腹腔积液有核细胞计数与血清CA125水平均相关（P<0.05）。结论　血清CA125水平升高与腹腔积液量、Child-Pugh分级及腹腔积液有核细胞计数相关,其可用来评估腹腔积液量的多少、肝功能受损程度及出现腹膜炎并发症的可能性。