致肾盂肾炎大肠杆菌papA基因的克隆及序列分析

目的 对致肾盂肾炎大肠杆菌（ＵＰＥＣ）１３２株的ｐａｐＡ基因进行克隆和序列分析。方法 根据Ｆ１３型ｐａｐＡ基因序列设计引物,并在二引物５′端加上限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＢａｎＨⅠ的酶切位点。采用此引物扩增１３２菌株ｐ菌毛粘附基因群的ｐａｐＡ基因,扩增产物克隆人质粒,选取阳性重组质粒进行核苷酸序列分析。结果 ＵＰＥＣ１３２株经ＰＣＲ法扩增获得约７００ｂｐ的ｐａｐＡ片段,经克隆获得阳性重组质粒ｐＣＴ２     

肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建

目的 构建大肠杆菌ＣＳ３菌毛呈现载体,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法 通过对ＣＳ３亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析,确定外源表位的插入位点,重叠延伸ＰＣＲ方法进行定点突变,将口蹄疫病毒ＶＰＩ插入到ＣＳ３中以验证表现呈现能力;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果 在大肠杆菌ＣＳ３的１３６位氨基酸残在后突变插入ＢａｍＨⅠ酶切点构建成呈现载体,全细胞ＥＬＩＳＡ、电镜和免疫     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化

目的:获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法.方法:利用RT-PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,表达含凝血酶识别序列的MS2-cTnI 融合蛋白,纯化后用Western-blot进行鉴定.结果:从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA,克隆并在大肠杆菌中表达,表达量达30%以上.经离子交换柱纯化,最终产物纯度在95%以上.可与其特异性单克隆抗体反应.结论:cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化,为今后检测心血管疾病提供了一种高效快捷的方法.     

基因重组人血红蛋白的纯化

目的 :探索重组人血红蛋白的纯化方法。方法 :将α、β珠蛋白串联基因克隆进 pBV2 2 0表达载体 ,获得了高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 2 0 %左右。该表达产物以包涵体形式存在 ,包涵体经洗涤后 ,用 8mol/L尿素溶解 ,先用Q SepharoseFastFlow阴离子交换纯化后 ,又经Sephacryl 10 0凝胶过滤纯化。 结果 :经两步纯化后重组人血红蛋白的纯度达 90 %左右。纯化产物经复性 ,具有与氧结合的能力。结论 :成功地得到人重组血红蛋白的纯化方法     

新型粘膜免疫佐剂候选株LTAˉB+的构建

目的 :产肠毒素大肠杆菌产生的不耐热肠毒素 (LT)不仅是很强的口服免疫原 ,而且其粘膜免疫佐剂作用显著。LT的毒性限制了它的直接使用 ,希望通过体外定点诱变技术 ,获得具有粘膜免疫佐剂作用的LT减毒株。方法 :以人源LT基因为研究对象 ,首先构建了重组质粒 pUC19 LT ,然后用单引物PCR法和重叠延伸PCR法分别构建了LTQ7和K63基因突变体。结果 :CHO细胞体外试验和家兔肠结扎体内试验毒性测定的结果表明 ,LT突变体K63的毒性明显降低。结论 :K63有希望成为候选的高效粘膜免疫佐剂。     

三效热原灭活剂性能的实验室观察

三效热原灭活剂为含二氯异氰尿酸钠、去污剂等成分的含氯复方消毒剂,原粉含有效氧不低于８．０％。对其水溶液杀灭微生物效果及腐蚀性进行了试验观察。以其含有效氯 ３００ ｍｇ／ Ｌ的溶液对悬液中大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别作用 １ｍｉｎ与 ５ ｍｉｎ,以含有效氯 ７５０ ｍｇ／ Ｌ该液对枯草杆菌黑色变种芽胞作用 ３０ ｍｉｎ,杀灭率均达 １００％;以含有效氯 ５００ ｍｇ／ Ｌ该液作用 １５ ｍｉｎ,可将悬液中 ＨＢｓＡｇ抗原性破坏。以含有效氯 ４００ ｍｇ／ Ｌ该液浸泡污染有细菌内毒素玻璃小管 ４５ ｍｉｎ,可使其热原全部转阴性。杀菌作用因有机物存在而减弱。该剂含有效氯 １０００ ｍｇ／ Ｌ的水溶液对不锈钢无腐蚀,对碳钢有中度腐蚀,对铜与铝有重度腐蚀。其粉剂装于塑料瓶中, ５４℃下存放 １４ ｄ,有效氯含量平均下降率为 ９．２８％。     

碘化钾与过氧化氢协同杀菌作用的试验观察

悬液定量杀菌试验表明 ,过氧化氢与碘化钾浓度均为 0 12 5%的混合液 ,对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌作用 1min ,杀灭率均为 99 97% ;两者浓度均为 0 2 50 %的混合液 ,作用 0 5min可将两菌杀灭99 98%。 0 2 50 %过氧化氢作用 3min ,对两菌杀灭率均 <4 0 % ,0 2 50 %碘化钾则无明显杀菌作用     

产超广谱β-内酰胺酶菌株检出方法的探讨

目的 提高产超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）细菌的检出率。方法 采用标准纸片扩散法、筛选法、确认法和双纸片协同法进行试验。结果 头孢他啶（ＣＡＺ）、头孢噻肟（ＣＴＸ）、氨曲南（ＡＺＴ）对产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌筛选率分别为１１．２％、１８．５％、１８．５％。ＣＡＺ／克拉维酸（ｃｌａｖ）对产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌确认率分别为７２．３％（３４／４７）、７５．０％（１２／１６）;     

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附基因群DNA多态性的研究

目的　研究临床分离的致肾盂肾炎大肠杆菌粘附基因群DNA的多态性。方法　以血凝试验 (MRHA)为基础 ,分别用编码P菌毛主体结构和尖端粘附素的基因探针 ,采用DNA杂交方法对临床分离的 95株尿源性大肠杆菌的粘附基因群进行分析。结果MRHA +++～ ++++占 37 9% (36株 ) ,++占 32 6 % (31株 ) ,MRHA阴性占 2 9 5 % (2 8株 )。菌落原位杂交和DNA斑点杂交试验在MRHA +++～ ++++,++和阴性菌株中两个探针均为阳性的分别为 91 7%、9 7%和 2 1 4% ;在MRHA ++和阴性菌株中单一探针阳性的分别为 6 4 5 %和 35 7%。同时 ,选 10株MRHA ++++大肠杆菌提取染色体DNA ,经EcoRⅠ酶切后Southern杂交进行限制性片段长度多态性分析 ,同源性DNA片段大小不一 ,杂交信号的强弱程度也不同。结论　提示致肾盂肾炎大肠杆菌pap粘附基因群的多样性。     

产毒性大肠杆菌对豚鼠致病性的实验研究

目的 试图通过产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）对豚鼠致病性的实验研究,进一步探讨该菌的致病机理。方法 利用人源性ＥＴＥＣ菌株Ｅ４４８１３、Ｅ４４８１５、Ｅ４４８２２和Ｅ４４８２３攻击豚鼠,造成豚鼠ＥＴＥＣ感染模型,观察豚鼠ＥＴＥＣ感染的病变特点。结果 ４株ＥＴＥＣ菌株均能造成豚鼠发病,以Ｅ４８１３致病性最大。ＥＴＥＣ能定植于豚鼠肠道至少达１４天。发病豚鼠肠肠明显充血、肿胀、以回肠为最严重。敏感组无发病症