大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因，构建真核表达载体，本研究拟探索该基因在肿瘤基因治疗中的应用基础。方法 根据GenBank数据库提供的CD基因核苷酸序列，设计并合成一对引物，采用PCR方法，从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因，并与pcDNA3．1定向连接，构建受控于人巨细胞病毒启动子的重组真核载体pcDNA3．1-CD，并用限制性内切酶、PCR和DNA测序进行鉴定。结果克隆了大肠杆菌CD基因，并构建了真核表达载体，经限制性内切酶酶切、PCR扩增和DNA测序证实了其正确性。结论 pcDNA3．1-CD真核表达载体构建成功。     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-门冬酰胺酶研究

用重组E.coliL-门冬酰胺酶免疫家兔，DEAE-纤维素柱层析纯化IgG，采用二步戊二醛交联法将辣根过氧化物酶标记抗体，建立抗体夹心酶联免疫吸附法，测定大鼠血浆中重组E.coliL-门冬酰胺酶浓度。本测定方法的线性范围为1～64U/L，灵敏度为0.4U/L。建立的抗体夹心酶联免疫吸附法测定大鼠血浆中重组E.coliL-门冬酰胺酶具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性。     

羧甲基壳聚糖银、锌、铈的合成及抑菌实验的研究

报道了羧甲基壳聚糖银、锌、铈的合成及其混合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和变形杆菌的抑菌作用 ,并与磺胺嘧啶银进行比较 ,结果发现 ,羧甲基壳聚糖银、锌、铈水溶液 (含量为 0 .6 95mg/ml,Ag、Zn、Ce含量分别为 0 .2 5 2× 10 6、5 .2 8× 10 6、2 .15 4× 10 6)对上述 5种细菌 (含量为10 4CFU/ml)杀菌率为 96 %以上 ,与 1.0mg/ml磺胺嘧啶银作用相当     

突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

目的：建立突变型人白细胞介素-2（rhIL-2）基因大肠杆菌表达系统，为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法：自人胎盘组织中提取总RNA，逆转录PCR（RT-PCR）扩增突变型人IL-2基因cDNA，通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸（c125）的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2，温度诱导表达．表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及WesternBlot鉴定。结果：DNA序列分析证实，重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示，诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16．5ku的外源蛋白产生。经Western印迹（WesternBlot）证明为rhlL-2。结论：成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。     

重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究表达重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺。方法首先采用摇瓶培养,对培养基配方、pH值、诱导表达时机和诱导剂量进行优化,确定基本发酵参数,然后在30L发酵罐上进行中试规模发酵培养。结果在摇瓶培养时,发现含有甘油和微量元素等成分的改良培养基效果明显优于LB培养基和2×YT培养基,另外,工程茵的最佳pH值为7.0,最佳诱导时机为对数中期,最佳诱导剂浓度为0.4mmoL/L异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖,最佳诱导时间为4h,将摇瓶培养确定的关键参数应用到30L发酵罐中,控制溶氧大于30%,进行3批发酵试验,发现发酵产物的湿菌产量可达58-61.9g/L,目的蛋白质表达量可达28.9%-31.2%以上。结论建立了工程菌M15[pQE-scFv]的中试发酵工艺,为进一步开发打下良好基础。     

Vero细胞检测出血性大肠杆菌O157:H7毒素的方法研究

目的建立用Vero细胞检测大肠埃希菌毒素的方法。方法用两种不同的培养基培养10株大肠杆菌和1株痢疾志贺杆菌,将其培养物上清和菌体裂解液加入Vero细胞中,观察对Vero细胞的毒性作用。结果两种培养基培养大肠杆菌产生的上清对Vero细胞的毒性作用差异不大,大肠杆菌培养上清的毒性作用大于菌体,而痢疾志贺菌菌体的毒性作用大于上清。结论Vero细胞毒性检测方法可以用于检测出血性大肠杆菌细胞毒素。     

产毒性大肠杆菌不耐热和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的：用基因工程方法克隆产毒性大肠杆菌（ETEC）不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）基因,以制备检测ETEC的单克隆抗体.方法：利用PCR技术扩增LT和ST基因并将它们插入T-easy载体中,采用全自动测序仪进行核苷酸序列分析.结果：DNA序列分析表明,克隆的ETEC-LT-B DNA序列与GenBank公布序列比较在17、69、101、102位点有碱基变异,同源性98.9%;ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致.结论：成功获得正确的ETEC的LT和ST基因,为其重组表达及后续研究奠定了实验基础.     

ZTP-120A1型消毒柜杀菌效果观察

[目的]了解ZTP120A1型消毒柜的实验室消毒效果。[方法]参考卫生部2002年第4版《消毒技术规范》和国家标准《食具消毒柜安全和卫生要求》(GB17988-2000)进行了温度测定试验、细菌繁殖体杀灭试验和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原性破坏试验。[结果]ZTP120A1型消毒柜在满载状态下,高温消毒运行1个自动程序,柜内温度≥120℃,可维持15min以上;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌杀灭率均达100.00%;可破坏乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原性;对餐具上的自然菌平均杀灭率为99.99%,且未检出致病菌。[结论]ZTP120A1型消毒柜具有较强的杀菌能力。     

由苍蝇传播引起E．coli O157：H7感染爆发的评估模型的建立

目的 建立苍蝇对E．coli O157：H7传播作用的定量危险性评估模型。方法 在Excel工作表中模拟E．coli O157：H7的粪口传播过程，利用@RISK软件对模型进行Monte Carlo模拟。结果 由此交叉污染途径引起人群感染的概率为10^-5～10^-3／餐。模型预测的结果与爆发调查数据基本吻合。通过模型分析可知，苍蝇排泄物中的含菌量及苍蝇的数量是影响人群感染危险性的重要因素。结论 以苍蝇污染途径模拟E．coli O157：H7感染危险性的定量评估模型，该模型是一个非常有用的评估危害与危险性关系的评估工具。     

连续消毒中大肠杆菌O_(157)∶H_7对碘伏抵抗力的变化及其与质粒pO_(157)关系的研究

〔目的〕研究分析在连续消毒中大肠杆菌O1 57∶H7对碘伏抵抗力变化及其与质粒pO1 57关系。〔方法〕用碘伏连续消毒 6株大肠杆菌O1 57∶H710代 ,对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切图谱 ,用SDS -高温法消除原始菌与连续消毒后试验菌的质粒。〔结果〕连续消毒 10代后 ,试验菌对碘伏的抵抗力增加 ;试验菌的质粒图谱以及质粒pO1 57的CalⅠ酶切图谱均无明显变化 ;消除原始菌的小质粒后 ,细菌对消毒剂的抵抗力不变 ,消除原始菌的大质粒和连续消毒后试验菌的质粒后 ,试验菌对碘伏的抵抗力增加。〔结论〕结果提示 ,连续消毒会使试验菌对碘伏的抵抗力增加 ,抵抗力增加的原因可能与质粒pO1 57无直接关系。