产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性分析

目的研究产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性,指导临床合理应用抗菌药物。方法采用初筛试验和确证试验对临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行检测,以确定产ESBLs菌株,并进行抗生素耐药性分析。结果产ESBLs菌在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率分别为44.8%和23.6%,对亚胺培南最为敏感,对头孢唑啉和氨苄西林耐药。结论临床对产ESBLs细菌治疗以碳青霉烯类药物为首选,含酶抑制剂复合药物部分有效。     

基于微量量热法的金银花抗菌活性部位初筛

目的 从微量量热法角度出发,构建筛选中药抗菌活性部位的方法并探讨其可行性.方法 以金银花为例,采用微量量热法,测定金银花不同部位对大肠杆菌的代谢影响,通过分析不同样品对大肠杆菌的热活性谱图(即热功率-时间曲线),得到一系列微量量热参数,分析金银花不同部位的药效作用及差异.结果 金银花各部位对大肠杆菌的生长均具有抑制作用...     

iTRAQ串联质谱筛选尾吊小鼠感染空间诱变大肠杆菌后脾脏差异表达蛋白

目的应用同重同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ),联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),检测经空间诱变大肠杆菌(T1-13)感染尾吊模拟失重小鼠后,其脾脏组织中的差异蛋白,并探讨其生物学意义。方法 C57BL/6小鼠尾吊模拟失重后以空间诱变大肠杆菌灌胃建立感染模型,采用iTRAQ结合LC-MS/MS技术筛选脾脏组织差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO、pathway富集分析和STRING蛋白互作分析。结果共鉴定出2589个蛋白,尾吊组与对照组相比筛选出378个差异表达蛋白。尾吊染菌后与对照组相比,共筛选出452个差异表达蛋白,STRING蛋白互作网络中有286个差异蛋白间存在相互作用,这些差异蛋白经KEGG分析共得到32条存在显著性的通路,主要为氧化磷酸化通路,代谢通路、蛋白消化和吸收通路、蛋白酶体通路。结论成功筛选出了模拟失重后空间诱变大肠杆菌感染脾脏组织差异表达蛋白,这些差异蛋白可能通过调控代谢通路、不同环境下微生物代谢、颉氨酸/亮氨酸/异亮氨酸降解、溶酶体、碳代谢、吞噬体、丙酸代谢、蛋白酶体参与失重条件下免疫和炎症反应的发生。     

EGFL7原核表达载体的构建及鉴定

【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体,并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板,PCR扩增 EGFL7基因,克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中,转化大肠杆菌 BL21（DE3）,IPTG 诱导表达。 His‐tag 磁珠纯化重组蛋白 EGFL7,SDS‐PAGE 鉴定。【结果】克隆目的基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pET21a（＋）‐TRX‐EGFL7经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子量为80kD ,与预期相符。【结论】成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了EGFL7重组蛋白,为后续研究奠定了基础。     

鼠李糖乳杆菌培养上清液通过抑制NF-κB通路预防大肠杆菌性脑膜炎

目的：体外探讨鼠李糖乳杆菌上清液(LGG-CM)能否通过抑制NF-κB通路来阻断大肠杆菌K1（E. coli K1）株引起的细菌性脑膜炎。方法用人脑微血管内皮细胞（HBMEC）构建体外血脑屏障模型;采用免疫印迹研究LGG-CM能否抑制E. coli K1激活NF-κB通路;通过侵袭实验和中性粒细胞迁移实验,研究LGG-CM能否抑制细菌侵袭和中性粒细胞迁移;通过免疫印迹研究黏附分子CD44和紧密连接蛋白ZO-1的表达;免疫荧光检测ZO-1蛋白的细胞内分布;用Transwell建立体外血脑屏障模型,通过跨细胞内皮电阻（TEER）值和细菌迁移实验评价LGG-CM对细胞屏障完整性的保护作用。结果免疫印迹结果表明LGG-CM能抑制E. coli K1激活NF-κB通路,藉此抑制E. coli K1的侵袭和中性粒细胞迁移。同时,LGG-CM可抑制E. coli K1上调CD44蛋白和下调紧密连接蛋白ZO-1。此外,LGG-CM能够明显减缓TEER值的降低和抑制E. coli K1穿越体外血脑屏障。结论体外实验表明,LGG-CM能够通过抑制NF-κB通路激活、阻断E. coli K1侵袭和中性粒细胞迁移及维护血脑屏障完整性来预防E. coli K1引起的细菌性脑炎。     

一起致病性大肠埃希氏菌引致食源性疾病爆发的调查

目的:了解一起食源性疾病暴发的原因.方法:采用流行病学调查及实验室分离培养确认致病原.结果:在3份病人肛试子和3份末梢水中检出有致病性大肠埃希氏菌,未检出其它致病菌.一日三餐均饮用该水的教师和家属发病率为66.67%,而在校一日只进一餐的学生发病率为26.23%,前者显著高于后者(χ2=52.63,P<0.01).当地场镇居民只用不饮此水未见发病.结论:通过流行病学调查和实验室病原学检查,证实本起疫情系一起致病性大肠埃希氏菌引起的食源性疾病暴发疫情.     

225株正常人大肠杆菌药敏及R质粒的检测

本文报告了从长春市健康成人分离的225株大肠杆菌的药敏性及接合性R质粒的检测结果。     

人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人白细胞介素（IL）15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT—PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a（＋）中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS—PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16．1ku,与理论值相符。结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。     

大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药机制的研究

目的探讨大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸的耐药特点和机制,从而为临床合理用药及减少耐药的发生和耐药基因传播提供实验研究依据。方法将对氨苄西林／舒巴坦耐药的大肠埃希菌544株,随机选取276株进行阿莫西林／克拉维酸纸片的筛查,对筛出的耐药菌株采用琼脂对倍稀释法进行MIC值测定和PCR扩增分析。对符合耐酶抑制剂β-内酰胺酶耐药表型的大肠埃希菌进行TEM型β-内酰胺酶基因的克隆表达。采用多重PCR技术对耐阿莫西林／克拉维酸大肠埃希菌进行TEM、SHV、OXA型三种β-内酰胺酶的筛查。结果TEM型46株,SHV型1株,0xA型6株,TEM型和SHV型均阳性1株,TEM型和OXA型均阳性5株。产TEM型β-内酰胺酶中TEM-1型最常见,耐酶抑制剂TEM型β-内酰胺酶（IRT）未发现。结论TEM-1型广谱酶的高产是华西医院大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药主要机制,本研究首次在西南地区发现OXA-1,是造成耐药的重要原因。     

淮北地区肠杆菌科细菌对21种抗生素的耐药性分析

目的: 了解21种抗生素对淮北地区肠杆菌科细菌的体外抗菌活性,指导临床有效合理用药。方法: 收集淮北地区分离的326株肠杆菌科细菌,采用Micro Scan WalkAway-40、Vitek-32全自动微生物分析仪和K-B法进行菌种鉴定和耐药性分析,按照1999年NCCLS的标准进行结果判断。结果: 在检测的326株肠杆菌科细菌中,分离出大肠埃希菌216株,肺炎克雷伯菌37株,鼻硬结克雷伯菌18株,聚团多源菌19株,产气肠杆菌18株,阴沟肠杆菌18株。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等对亚安培南的耐药率最低,分别为1.4%和2.8%。其次为哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦,另外庆大霉素和阿米卡星耐药率也较低。结论: 所测试的21种抗生素中亚安培南是治疗的首选药物,临床治疗时应根据具体菌种及实验室药敏结果合理选择抗生素。