连续消毒中大肠埃希菌O_(157)∶H_7对洗必泰抵抗力的变化和与质粒pO_(157)的关系

目的　研究连续消毒中大肠埃希菌O157∶H7对洗必泰抵抗力的变化及其与质粒 pO157关系。方法　用洗必泰连续消毒 6株大肠埃希菌O157∶H710代 ,消除连续消毒前后试验菌的质粒 ;对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切谱。结果　连续消毒 10代后 ,试验菌对洗必泰的抵抗力不变 ;试验菌的质粒图谱以及质粒pO157的ClaⅠ酶切图谱均无明显变化 ;消除连续消毒前后试验菌的质粒后 ,试验菌对洗必泰的抵抗力不变。结论　连续消毒不会使试验菌对洗必泰的抵抗力增加 ,且试验菌对洗必泰的抵抗力与质粒 pO157无直接关系。     

大肠埃希菌和克雷伯菌属超广谱β-内酰胺酶的检测

目的通过对临床分离的大肠埃希菌、克雷伯菌属及其它肠杆菌科超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,探讨该酶介导的耐药性在临床应用中的作用。方法收集临床分离的耐氨苄西林的大肠埃希菌和克雷伯菌属和其它肠杆菌细菌共59株,按NCCLs推荐的初筛、表型确证试验、Etest法操作。结果有21株细菌被确认为产ESBLs,占收集菌株的35.6%,其中确认试验与Etest均阳性的有13株;产ESBLs的大肠埃希菌的检出率为32.4%,克雷伯菌属为50.0%,其它肠杆菌科细菌为30.8%。结论肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌是产生超广谱β-内酰胺酶的主要菌株,但是其他肠杆菌科细菌的检出率有所上升,尤其是不能忽视阴沟肠杆菌的检测。本地区用于超广谱β-内酰胺酶筛选的最佳底物是头孢噻肟(CTX)。     

网状分枝扩增方法检测志贺毒素2基因

目的 建立一种快速、灵敏检测志贺样毒素2(STX2)的方法。方法 用网状分枝扩增技术(RAM)和PCR检测合成的志贺样毒素2基因和临床分离的菌株，确定该方法的灵敏度和特异性。结果 RAM最少能检测10个志贺样毒素2的DNA分子，与PCR具有同样灵敏度。用PCR和RAM检测临床标本和食品中分离的33株大肠埃希菌，其中26株stx2基因为阳性，2种方法检测结果一致。结论 RAM与PCR方法相同的灵敏度和特异性，但操作简便，并且是在等温条件下扩增核酸，成本较低，适合检测食品和临床标本中大肠埃希菌志贺样毒素2。     

透明颤菌血红蛋白基因在产TRAIL蛋白大肠杆菌中的克隆表达

为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CTV具有良好的遗传稳定性。3.7 L发酵罐实验表明:在同样的发酵条件下,含vgb基因的重组菌CTV的最高菌体密度为对照菌的1.64倍,达到50.6 g/L,乙酸积累为对照菌的55.6%,TRA IL蛋白产量提高了70%,达到2.8 g/L。     

致肾盂肾炎大肠埃希菌132基因组DNA消减文库的构建

目的:应用抑制性消减杂交技术,构建致肾盂肾炎大肠埃希菌132株(UPEC132)与已完成基因组测序的非致病性大肠埃希菌标准株MG1655的基因组DNA消减文库。方法:分别提取UPEC132与MG1655的基因组DNA,经RsaⅠ酶切成为大小200～800bp的片段,一部分与接头连接作为tester,和未与接头连接的酶切片段(driver)进行2次消减杂交及2次抑制性PCR后将产物与pMD18-T载体连接构建DNA消减文库,并转化给大肠埃希菌TOP10构建消减文库。结果:文库扩增后得到139个克隆,经PCR法快速测定,均得到200～800bp的插入片段。结论:所构建的基因组DNA消减文库为进一步筛选UPEC132中与致病相关基因奠定了基础。     

内源性血管生成抑制因子Arresten原核表达载体的构建及表达

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并在E.coliDH5α进行表达。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,构建重组质粒pBV220-Arr转化E.coliDH5α进行原核表达。结果成功筛选出Arresten基因并构建了重组质粒pBV220-Arr,重组质粒在菌株中获得表达。结论构建的原核表达重组体pBV220-Arr能高效表达重组Arresten蛋白。     

食品标本处理方法对大肠埃希菌检出限影响

目的 研究快速、敏感、低成本的食品标本处理方法。方法 在牛肉馅中接种不同浓度的大肠埃希菌O157：H7，经离心、过滤，去除PCR抑制剂。浓缩菌株，用煮沸法和酶／冻融法裂解菌株，制备模板DNA。通过PCR检测大肠埃希菌O157：H7志贺毒素基因以评价该处理方法的可行性。结果 在未增菌条件下，PCR最低能检测到103CFU／g牛肉馅，增菌6h，最低能检测1CFU／g牛肉馅，整个检测过程只需要12h。结论 所采用的标本处理方法是一种灵敏、省时、低成本的方法，能显著地提高PCR检测食品标本中的大肠埃希菌O157：H7的灵敏度。     

DinB基因的超表达短期内可显著降低大肠杆菌的死亡率

 [目的]探讨大肠杆菌dinB基因在进化上的选择优势.[方法]应用竞争共培养和超表达的策略,测定共培养后含dinB基因的目的菌株和对照菌株的生长优势.第1组为含质粒pUC-dinB-rrnb的E.coli AB1157＋含质粒pUC-dinBR-rrnb的E.coli YG7207;第2组为含质粒pUC-dinB-rrnb的E..coli AB1157＋含质粒pUC-phoE-rrnb的E.coli YG7207;第3组为含质粒pUC-phoE-rrnb的E.coli AB1157＋含质粒pUC-dinBR-rrnb的E.coli YG7207;第4组为卡那霉素抗性（K^＋）菌株YG7207与无卡那霉素抗性菌株AB1157.[结果]第4组中,卡那霉素抗性菌株YG7207与无卡那霉素抗性菌株AB1157在培养物中的比例保持着良好的稳定.第1组和第2组混合培养中,K^＋抗性的菌株在培养物中的比例急剧下降,并很快接近或等于0;第3组培养物中,K^＋菌株（YG7207）的比例呈明显上升.[结论]超表达dinB基因的大肠杆菌菌株的生长优势不是由于对数期的生长速率提高所造成,对数后期细胞死亡率降低应该是超表达dinB基因的大肠杆菌菌株的生长优势的主要原因.     

Fura-2/AM荧光探针法用于大肠杆菌胞内游离钙的测定

目的探讨经超声处理后大肠杆菌胞内游离钙的变化。方法超声波作用影响大肠杆菌,用Fura-2/AM探针法测定胞内游离钙的变化。结果经超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高,打开了钙依赖性的离子通道,膜两侧离子交流加速,膜通透性增加。结论Fura-2/AM荧光探针法可用于微生物大肠杆菌胞内游离钙的测定。经一定条件下超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高。     

4年间我院儿科临床大肠埃希菌耐药性变迁分析

目的：监测我院4年间儿科临床分离的大肠埃希菌的耐药情况，了解其耐药性发生和发展的规律，以指导儿科临床合理选用抗大肠埃希菌药物。方法：2001年1月-2004年12月从儿科临床标本分离的84株大肠埃希菌按照分离时间分为2001-2002年组（2001年1月-2002年12月）48株和2003-2004年组（2003年1月-2004年12月）36株，分别比较两组产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和对22种抗菌药物敏感性试验结果。结果：ESBLs检测结果：2001-2002年组产ESBLs株检测率为37．5％（15／40），2003-2004年组产酶株捡出率为46．9％（15／32），经x^2检验，P〉0．05，无显著性差异。药物敏感性实验结果：2003-2004年组比2001-2002年组耐药率明显升高，22种抗生素中除外亚胺培南未发现耐药菌外，其他抗生素耐药率均有不同程度增高，增幅为（16．7％-88．9％），经x^2检验，均有极显著性差异（P〈0．01），其中耐药率上升最快的5种抗生索分别为头孢曲松、头孢唑啉、头孢嚷肟、头孢拉定、头孢呋辛。耐药率上升较慢的5种抗生素分别为阿米卡星、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他定和四环素。结论：儿科临床大肠埃希菌耐药性发展迅速，以对头孢类抗生素耐药性上升最为显著，且呈多重耐药趋势。治疗上不宜选用头孢类抗生索和复方磺胺甲嗯唑，应选用头孢西丁、加酶抑制剂复合抗生素以及亚胺培南。