用蛋白印迹试验检测精神分裂症患者血清中博尔纳病病毒-p24抗体的研究

目的：探讨博尔纳病病毒（BDV）感染在我国的流行情况及其与精神分裂症的相关性。方法：在对优化表达的GST－BDV－p24融合蛋白进行特异性鉴定的基础上，通过确定融合蛋白与第一抗体、第二抗体间的最佳反应条件，建立可行的检测BDV－p24特异抗体的蛋白印迹（Western-blot）方法，进而对黑龙江地区精神分裂症患者和正常人对照血清中BDV－p24特异性抗体进行了检测，并通过血清－GST蛋白吸收后W estern-blot实验对阳性血清进行了确认。结果：116例精神分裂症患者中检出BDV－p24阳性血清10例，阳性检出率为8.6%，而正常人血清标本中未检出阳性。结论：我国存在博尔纳病病毒的感染，博尔纳病病毒的感染可能与精神分裂症的发生有关。     

Legume Proteins of the Vicilin Family are More Immunogenic Than Those of the Legumin Family in Weaned Piglets

Two experiments were conducted to study the systemic and local immune responses to legume proteins in piglets weaned at 28 d of age. The pigs were fed a control diet (C) based on casein or diets in which 50% of crude protein (CP) was supplied by soya bean meal (SBM), pea (P), faba bean (FB), or lupin (L) seeds in experiment 1, and white chickpea (WCP) or black chickpea (BCP) seeds in experiment 2. Blood samples and intestinal secretions were collected at slaughter four weeks later and analysed for specific antibodies using ELISA and western blotting. Piglets fed the legume-containing diets had higher ( P < 0.10) plasma immunoglobulin (Ig) G ELISA titres to legume proteins than did piglets fed a casein-based diet. Many protein bands in the molecular weight range of 94.0-14.4 kDa were recognized by plasma IgG and IgA antibodies. The most immunogenic bands belonged to proteins of the vicilin family and to other unidentified minor proteins. No specific IgA antibodies were detected in intestinal secretions by ELISA and western blotting.     

肿瘤相关新基因pp4519在肺癌中的表达差异及初步功能研究

目的探讨肿瘤相关新基因pp4519在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能.方法合成肿瘤相关新基因pp4519特异性多肽,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体;从体外细胞集落形成试验,生长曲线,裸鼠体内成瘤试验,半定量RT-PCR,蛋白印迹,免疫细胞化学及免疫组化检测pp4519基因的表达差异,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究pp4519基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响.结果 SPC-A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明,pp4519基因转染组集落形成数明显少于空载体组(P<0.05);转染pp4519基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC-A1细胞系的成瘤有明显抑制作用(P<0.01);瞬时转染细胞的流式细胞凋亡检测结果表明该基因具有促进SPC-A1细胞凋亡的作用;半定量RT-PCR,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4519 RNA和蛋白表达无明显差异(P>0.05),但免疫组化结果显示PP4519在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌.结论 pp4519是一个具有抑制肺癌细胞生长功能的新基因.     

硝酸镧对大鼠睾丸7型水通道基因表达的影响

目的:观察不同剂量稀土元素-镧对大鼠睾丸7型水通道(aquaporin7,AQP7)基因表达水平的影响。方法:取硝酸镧灌胃6个月大鼠的睾丸组织提取总RNA进行Northernblot分析。结果:低剂量La(NO₃)₃(0.1mg/kg)抑制大鼠睾丸AQP7的mRNA表达,而高剂量La(NO₃)₃(20mg/kg)的作用与对照组比较无明显差别。结论:大鼠睾丸内可见AQP7mRNA的表达;硝酸镧能影响大鼠睾丸AQP7mRNA表达的强度。     

NF-κBp65和ICAM-1在口腔扁平苔藓中的表达及相关性

目的:研究NF-κBp65、ICAM-1在口腔扁平苔藓和正常口腔黏膜组织中的表达及相关性.方法:采用免疫组织化学法及蛋白印记法检测30例口腔扁平苔藓组织、15例正常口腔黏膜组织中NF-κBp65、ICAM-1的表达情况.结果:(1)口腔扁平苔藓组织中NF-κBp65和ICAM-1的表达分别较正常口腔黏膜组织显著增加(P<0.01);(2)NF-κBp65和ICAM-1蛋白在口腔扁平苔藓组织中的表达成正相关(r=0.774,P=0.000).结论:NF-κBp65的激活导致了口腔扁平苔藓中ICAM-1表达的增强,抑制NF-κBp65的活性可能是防治OLP的一种新方法.     

大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白含量在空间和时间上的变化

目的:研究随着大鼠牙胚的发育，釉原蛋白(Am)在空间和时间上的变化。方法：以重组、纯化的大鼠釉原蛋白为抗原。混入完全/不完全弗氏佐剂，免疫新西兰大白兔；用双向免疫扩散法到抗体效价，将获得的多克隆抗血清经硫酸胺初步纯化后，用Western blot和免疫组化检测大鼠牙胚Am的组织表达特异性。结果：Western blot显示：在大鼠牙胚组织总蛋白中有特异性表达，而在肝、脑、肾组织中没有表达。免疫组化检测，在成釉细胞和发育早期的釉基质中有Am的表达，而在成牙本质细胞和成熟牙釉质、牙本质中无表达。结论：釉原蛋白的表达具有严格的空间和时间依赖性，在牙胚发育早期高表达而在发育后期和已矿化期表达低或无表达。     

医学检验专业开设Western Blotting综合性实验初探

分子生物学是当前生命科学发展的主流,其理论与技术已广泛应用于各个领域。Western Blotting作为分子生物学的常规技术,在医学领域具有不可忽视的地位。因此,在医学检验专业开设Western Blotting实验课程,已成为一项非常必要的实验教学内容。其一,Western Blotting实验是分子生物学与免疫学     

非小细胞肺癌中蛋白激酶C-α的表达及其意义

目的:探讨蛋白激酶C-α(protein kinase C-α,PKC-α)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞株中表达的意义。方法:应用免疫组织化学SP方法检测NSCLC组织芯片中PKC-α蛋白的表达,其中肿瘤组织160例,癌旁组织40例,Ⅰ期91例,Ⅱ～Ⅲ期69例;应用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测NSCLC细胞株A549、耐顺铂A549(A549-DDP)、H460及H1299等细胞株中PKC-αmRNA的表达;应用Western印迹法检测上述细胞株中PKC-α蛋白的表达。结果:PKC-α蛋白在160例NSCLC组织中的表达率为53.1%(85/160),癌旁组织中的表达率为7.5%(3/40),差异有统计学意义(P<0.01);PKC-α蛋白的表达在不同病理类型之间(腺癌、鳞癌及细支气管肺泡癌)的差异无统计学意义(P>0.05);与患者的性别、年龄等因素亦无明显相关性;而与NSCLC,特别是腺癌的临床分期、淋巴结是否转移相关(P<0.05);与腺癌的分化程度相关(P<0.05),但与鳞癌的分化程度无明显相关性;在NSCLC细胞株A549、A549-DDP、H460及H1299中均存在PKC-αmRNA及蛋白的表达,其中以A549-DDP细胞株的表达水平为最高。结论:在NSCLC组织及细胞株中存在PKC-α的表达;PKC-α蛋白表达在NSCLC特别是腺癌的浸润、转移和发展中具有重要作用;在多种NSCLC细胞株中PKC-α的表达水平存在一定差别。     

胰腺癌组织中CDC25B表达及临床意义的初步探讨

目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达水平。用Kaplan-Meier生存率曲线分析CDC25BmRNA与预后的关系。结果实时荧光定量-PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常胰腺组织中为0.000635±0.000210,胰腺癌组织中为0.001988±0.000650;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中CDC25B mRNA表达上调3.13倍(P<0.05),CDC25B mRNA升高5倍以上者生存时间缩短。胰腺癌组织中CDC25B蛋白也过度表达,正常胰腺组织CDC25B蛋白表达为1.22±0.33,胰腺癌组织为5.56±1.57,上调4.56倍(P<0.01)。结论CDC25B在胰腺癌组织中表达明显上调,CDC25B mRNA升高者预后差。     

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。