水通道蛋白5过表达与宫颈癌发生及临床病理特征的相关性

目的：研究水通道蛋白5（aquaporin 5,AQP5）在宫颈癌中的表达及临床病理意义,探讨AQP5在宫颈组织恶性转化过程中的可能作用。方法：采用蛋白质免疫印迹和免疫组织化学技术检测30例正常宫颈、28例宫颈上皮内瘤样变（CIN）和56例宫颈鳞状细胞癌组织中AQP5的表达,并对其表达的临床病理参数进行统计学分析。结果：AQP5在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中相对蛋白表达量逐渐升高,3组间差异有统计学意义（F=38.516,P=0.000）;其表达的平均阳性细胞百分比分别为15.12%、23.18%和36.08%,3组间差异有统计学意义（χ2=22.404,P=0.000）;AQP5过表达与宫颈癌淋巴结转移相关（r=0.351,P=0.008）,与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级和国际妇产科联盟（FIGO）分期无关。结论：增强的AQP5表达与正常宫颈组织恶性转化和宫颈癌发生有关,有望为宫颈癌提供一种新的治疗靶点和预后标记。     

胃十二指肠疾病患者中cagA阳性幽门螺杆菌的普遍易感性

明确cagA阳性幽门螺杆菌（H.pyloril)胃十二指肠疾病患者中的感染情况。方法：用聚合酶链反应（PCR）方法扩增从30例十二指肠球部溃疡、30例慢性胃炎和6例胃癌虱活检组织中分离培养出的H.pylori菌株的cagA基因片段,用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清抗H.pylori抗体,用免疫印迹（Western blot)方法检测血清抗cagA抗体。结果：用PCR方法测得的cagA基因阳性率为：十二指肠球部溃疡70％（21／30）,慢性胃炎73％（22／30）,胃癌83％（5／6）。66份血清标本抗H.phlori抗体均为阳性。用Western blot方法测得的抗cagA抗体阳性率为：十二指肠球部溃疡83％（25／30）,慢性胃炎77％（23／30）,胃癌83％（5／6）。结论：在我国人群中,cagA基因不能作为消化性溃疡的标志物,cagA阳性H.pylori在消化性溃疡和慢性胃炎患者中存在普遍易感性。     

同位素标记探针对检测肺组织氧合血红素酶表达的影响

由于同位素标记探针特异性强 ,灵敏度高 ,一直是基因表达实验研究中常用的标记物 ,我们在检测大鼠肢体缺血再灌后不同时点 ,肺组织氧合血红素酶 (ＨＯ - 1)的表达时 ,用 [α - 3 2 Ｐ]ｄＣＴＰ标记ＨＯ - 1探针 ,并于标记后进行探针纯化。现报道其效果与不纯化探针的比较。材　料　和　方　法1　随机引物标记试剂盒 (北京鼎国生物工程公司产品 )。2　模板ＤＮＡ取肢体缺血再灌后大鼠肺组织 10 0ｍｇ按常规方法提取ＤＮＡ。3　探针标记 ,反应体系用 2 5 μＬ无菌水溶解模板ＤＮＡ 2 5ｎｇ ,加 1 0 μＬ随机引物混匀 95℃ - 10 0℃ 2ｍｉｎ ,…     

逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

免疫印迹试验在诊断儿童幽门螺旋杆菌感染中的应用评价

目的:评价免疫印迹试验(WesternBlotting)在诊断不同年龄组及不同病理表现儿童幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染中的应用价值。方法:对450例有消化道症状的患儿,进行胃镜检查并取病变处胃黏膜组织行病理学检查,以及13C尿素呼气试验(13Cureabreathtest,13CUBT)、血清免疫印迹试验及胃液HPDNAPCR检查。结果:在4岁～6岁和6岁～12岁组患儿中,13CUBTHP检出率明显高于免疫印迹试验(P<0.01);在12岁～18岁组患儿中,13CUBTHP检出率与免疫印迹试验比较差异无显著性(P>0.05)。细胞毒性基因相关蛋白(Cytotoxinassociatedgeneprotein)阳性的HP感染在溃疡病组明显高于慢性胃炎组和正常组(P<0.05),慢性胃炎组CagA(Cytotoxinassociatedgeneprotein,CagA)阳性HP显著高与正常组(P<0.05)。结论:在12岁以上的少年患儿中,免疫印迹试验可作为快速诊断HP感染的可靠手段,并且能判断出是否为产毒菌株感染。在12岁以下的儿童中,免疫印迹试验最好与13CUBT联合使用。     

基于CD133及上皮 间质转化相关因子的列线图模型对上皮性卵巢癌预后的预测价值

目的 构建预测上皮性卵巢癌(EOC)预后的列线图模型,验证其应用价值。方法 对2009年1月至2012年1月十堰市太和医院152例经手术病理确诊的初治EOC病人进行术后持续随访。检测其病理标本中CD133、Snail、E-cadherin蛋白表达情况,统计病人一般资料及临床病理资料,通过Cox风险比例模型确定病人累积生存率的影响因素,应用R语言建立基于上述因素的列线图模型,并验证其应用价值。结果 152份病理标本中,CD133阳性表达87例,占57.24%,E-cadherin阳性表达50例,占32.89%,Snail阳性表达89例,占58.55%。CD133、Snail阳性者及E-cadherin阴性者,累积生存时间明显短于对应对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。CD133阳性、伴腹部脏器或淋巴结转移是病人预后的危险因素,E-cadherin阳性是病人预后的保护因素(P＜0.05)。经R语言建立列线图模型及校准曲线,校准图形接近于斜率为1的直线,列线图模型的内部一致性参数C-index=0.699。结论 CD133及E-cadherin表达情况是EOC病人预后的影响因素,构建列线图能够有效预测病人生存率。     

旋毛形线虫分泌抗原P53的序列分析及重组表达产物的免疫学鉴定

目的 分析旋毛形线虫分泌抗原P53的免疫学特性,评价其免疫诊断价值.方法 克隆并测序分析旋毛形线虫P53的编码区序列,应用生物信息学分析其与其他蠕虫同源蛋白的相似性以及潜在的线性B细胞和T细胞表位;并将成熟肽编码区克隆至pET28a(+)原核表达质粒中,纯化的重组蛋白用旋毛形线虫感染血清和其他寄生蠕虫感染血清经Western印迹法鉴定其免疫反应性.结果 生物信息学分析未发现其他寄生蠕虫的P53同源基因,表明TsP53具有多个T细胞和B细胞识别表位,Western印迹法显示TsP53抗原只与旋毛形线虫感染血清反应,与其他几种蠕虫感染血清无反应.结论 P53具有良好的抗原性,是非常有前景的旋毛形线虫特异性诊断抗原.     

Analysis of immunostaining and western blotting of endothelin 1 and its receptors in mitral stenosis

Introduction

Rheumatic Fever represents a serious public health problem in developing countries, with thousands of new cases each year. It is an autoimmune disease, which occurs in response to infection by streptococcus A.

Objective

The aim of this study was to evaluate the immunolabeling and protein expression for endothelin-1 and 3 (ET-1, ET-3) and its receptors (ETA, ETB) in rheumatic mitral valves.

Methods

Immunohistochemistry was used to identify ET-1/ET-3 and ETA/ETB receptors in rheumatic and control mitral valves. Quantitative analysis of immunostaining for ET-1/ET-3 and ETA/ETB receptors was performed. In addition, western blot analysis was carried out to assess protein levels in tissue samples.

Results

ET-1 and ETA receptor immunostaining predominated in stenotic valves, mainly associated with fibrotic regions, inflammatory areas and neovascularization. Quantitative analysis showed that the average area with positive expression of ET-1 was 18.21±14.96%. For ETA and ETB, the mean expressed areas were respectively 15.06±13.13% and 9.20±11.09%. ET-3 did not have a significant expression. The correlation between the expression of both endothelin receptors were strongly positive (R=0.74, P=0.02), but the correlation between ET-1 and its receptor were negative for both ETA (R=-0.37, P=0.25), and ETB (R=-0.14, P=0.39). This data was supported by western blot analysis.

Conclusion

The strong correlation between ET-1 and its receptors suggests that both play a role in the pathophysiology of rheumatic mitral valve stenosis and may potentially act as biomarkers of this disease.     

应用蛋白质组学技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白作用相关蛋白质

目的 应用比较蛋白质组学方法寻找HBV X蛋白(HBx)作用相关蛋白,揭示HBx在肝细胞痛发生、发展中作用的分子机制.方法 以转染HBx基因的人肝癌细胞株HepG2-Px和转染空白载体的人肝癌细胞株HepG2-P.为研究对象,应用二维凝胶电泳技术分离2种细胞的总蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定,蛋白质免疫印迹法验证部分差异表达的蛋白质在2株细胞中的表达水平.数据比较采用t检验.结果 得到分辨率较高、重复性较好的2株细胞系的二维凝胶电泳图谱,质谱分析共鉴定32个HBx作用相关蛋白,包括25个在HepG2-Px中表达上调的蛋白质,如热休克蛋白90AB1、Bcl-2相关抗原-2,细胞核磷酸化蛋白、细胞内氯离子通道-1、基质金属蛋白酶-3和黑色素瘤相关抗原-12等,7个表达下调的蛋白质,如Wnt-5a等.蛋白质印迹验证了部分差异表达蛋白在2株细胞中的表达水平.结论 筛选出的差异表达蛋白主要涉及宿主细胞的基囚转录、信号转导、细胞生长和增殖、细胞周期、细胞凋亡、DNA修复和细胞代谢、免疫应答等过程.提示这些与HBx相互作用的蛋白质可能与肝细胞癌的发生、发展相关,为揭示HBx的作用机制提供了线索.     

分子病理确诊的肢带型肌营养不良2A型患者五例临床及病理特点

目的 通过总结5例肢带型肌营养不良2A型(LGMD2A)患者的病例资料,探讨其临床和病理特点.方法 对病理诊断排除LGMD2B(7例)之后的30例分型未明的LGMD患者的肌肉标本进行免疫组织化学染色和钙激活蛋白酶-3(calpain-3)蛋白免疫印迹分析.结果 30例患者肌肉标本中有5例calpain-3蛋白条带缺失或遗留痕迹,从而被确诊为钙蛋白酶肌病,即LGMD2A.该5例患者起病年龄10～45岁,病程2～10年.其中2例的同胞兄妹有相似的临床表现,而父母无异常,提示本病的常染色体隐性遗传方式.5例均以下肢近端肌无力起病,肌萎缩明显;血清肌酸激酶639～8237 U/L,平均2502 U/L,肌电图均为肌源性损害.5例肌肉活体组织检查病理符合典型肌营养不良的病理特点,表现为肌纤维大小明显不等,可见坏死伴吞噬及再生,内核纤维增多,还原型辅酶Ⅰ四氮唑还原酶染色2例见分叶状纤维.5例LGMD2A患者dystrophin、caveolin-3和α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan免疫组织化学染色均正常,2例dysferlin染色减低,余3例正常.结论 LGMD2A的临床表现和肌活体组织检查病理均缺乏特异性,免疫印迹分析有助于此病的诊断和鉴别诊断.