Toll样受体5在机体免疫反应中的作用

Toll样受体（Toll—like receptors，TLRs）是1997年才发现的机体对病原体侵袭产生先天性免疫应答信号通路中的一类受体，作为TLRs家族成员之一，多年来对TLR5的认识并不多，目前发现TLR5就是机体免疫系统识别细菌鞭毛蛋白的受体。TLR5与鞭毛蛋白结合后，进一步激活核转录因子NFKB而刺激TNF—α、IL-1β 、IL-8等前炎症细胞因子的产生，从而介导机体针对病原菌的先天性免疫反应及炎症反应。     

大鼠静注鞭毛蛋白后不同时相点肺急性炎症损伤的研究

目的 研究经尾静脉注入鞭毛蛋白后,不同时相点大鼠肺水肿以及肺部炎症的发生情况.方法 210只清洁级雄性Wistar大鼠,分三批,每批随机分为对照组和经尾静脉注入鞭毛蛋白致伤,2、4、6、12、24、48 h 时6个不同时相点检测组,共七组.正常对照组大鼠给予生理盐水,致伤组大鼠给予鞭毛蛋白50 μg/kg,静注后分别于2、4、6、12、24、48 h时,测定动脉血氧分压(PaO2);肺毛细血管通透性(Evans blue含量);肺组织湿干比值(W/D);肺泡灌洗液(BALF)细胞计数以及用ELISA法检测外周血、肺组织与BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-10细胞因子的含量.结果 静注鞭毛蛋白后,随时间的增加,大鼠PaO2下降;毛细血管通透性增加;肺W/D增加;BALF的细胞计数增加;外周血、肺组织及BALF中,TNF-α、IL-1β含量增加,IL-10含量减少.在致伤组与对照组之间,以上各指标差异有统计学意义(P＜0.05).结论 静注鞭毛蛋白后,致大鼠肺急性炎症损伤具有时间差异性.     

鼻腔黏膜免疫佐剂鞭毛蛋白的研究进展

疫苗接种是预防传染病最为有效的措施。鉴于大多数病原主要通过黏膜途径感染机体,预先在黏膜表面建立有效的免疫应答是预防病原入侵的最佳方式。鼻腔免疫是一种高效、无痛的黏膜免疫途径,既可诱导系统免疫应答,又能诱导广泛的黏膜免疫应答。然而,大多数疫苗尤其是亚单位疫苗经鼻腔接种后难以诱导有效的黏膜免疫应答,需要借助佐剂的辅助作用。佐剂是一种非特异性免疫增强剂,通过激活天然免疫来增强适应性免疫应答从而达到提高疫苗保护效力的目的,是疫苗尤其是亚单位疫苗的重要组成部分。鞭毛蛋白作为鼻腔黏膜免疫佐剂的效应已被广泛证实：在增强系统免疫应答的同时,还能增强黏膜应答,尤其是分泌型IgA的产生。该文就鞭毛蛋白的分子结构、诱导的信号通路、作为疫苗佐剂的应用及机制方面的研究进展作一综述。     

抗甲型副伤寒沙门氏菌鞭毛抗原单克隆抗体的研制及初步应用

本文采用杂交瘤技术,制备了７ 株抗甲型副伤寒沙门氏菌鞭毛抗原单克隆抗体（ｍ Ａｂ） 的杂交瘤细胞株。对３ 株ｍＡｂ（２Ｃ８、２Ｅ６ 和５Ｄ７） 进行了鉴定,ｍＡｂ ２Ｃ８ 和５Ｄ７ 为ＩｇＭ,２Ｅ６ 为ＩｇＧ１（κ）亚类,可分别识别不同的抗原表位,均具有很强的特异性,即只与甲型副伤寒沙门氏菌及其鞭毛抗原起反应,而与相关肠道细菌：尼亚里木沙门氏菌、达卡沙门氏菌及伤寒沙门氏菌、乙型和丙型副伤寒杆菌、猪霍乱沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等均无交叉反应。免疫印迹显示,３ 株ｍＡｂ 只能与甲型副伤寒沙门氏菌鞭毛抗原Ｍｒ 为５２ ０００ 的蛋白结合。用ｍＡｂ ２Ｅ６ 和５Ｄ７ 建立的双ｍＡｂ 夹心ＥＬＩＳＡ 法,检测了１３ 例血培养阳性的副伤寒患者血清中的甲型副伤寒沙门氏菌鞭毛抗原,１２ 例呈阳性,阳性符合率为９２－３％ 。     

基于流感病毒M2蛋白胞外区的双层蛋白质纳米颗粒的制备及免疫学效果评价

目的通过两步脱溶剂-交联法制备携带流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)、6个串联重复的M2蛋白胞外域(6M2e)和鞭毛蛋白(Flg)的双层蛋白质纳米颗粒, 探究其在小鼠体内的免疫效果。方法采用脱溶剂-交联法将融合蛋白FljB-6M2e-△D2D3-HAα和HAα-6M2e制备成双层蛋白质纳米颗粒。通过透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪进行物理表征后评估其细胞毒性。免疫小鼠后采用ELISA方法进行特异性抗体效价测定, ELISPOT检测细胞免疫水平, CCK-8法检测脾细胞的增殖情况。结果本研究成功制备了粒径为(130.03±2.96) nm的双层蛋白质纳米颗粒FljB-6M2e-△D2D3-HAα/ HAα-6M2e。免疫小鼠后产生的抗M2e-IgG抗体效价为1∶25 600, 抗HAα-IgG抗体效价为1∶12 800, 高于对照组小鼠, 差异均具有统计学意义(t=3.051和3.780, P=0.038和0.019)。与对照组相比, 多肽刺激可以使小鼠脾细胞显著增殖[M2e刺激增殖率:(154.18±2.34)%, HAα刺激增殖率:(151.51±1.56)%](t=12.942和24...     

Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达研究

目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织中Toll样受体5（TLR5）mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠Au中的作用。方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。108只SD大鼠随机分为正常对照组（n=36）、致伤1组（n=36）和致伤2组（n=36）。经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立大鼠ALI模型。每组分别在6个时相点用原位杂交法检测大鼠肺组织中TLR5 mRNA的表达,并观察动脉血气分析和肺病理改变。结果从大肠杆菌ATCC25922中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。从致伤后1h开始,鞭毛蛋白致肺损伤大鼠肺组织中TLR5 mRNA表达增加,并随时间推移和鞭毛蛋白剂量增加而表达增多。各致伤组大鼠动脉血氧分压降低,肺组织出现肺间质、肺泡水肿和炎性细胞浸润等病理改变。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠ALI;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程。     

单克隆抗体夹心酶标法检测鞭毛抗原快速诊断伤寒

目的建立一种早期、快速诊断伤寒的检验方法。方法用酸断裂法提取伤寒沙门菌鞭毛抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，用淋巴细胞杂交瘤技术制备得１Ｄ５、２Ｈ４、３Ａ６三株鞭毛抗原的单克隆抗体，以２Ｈ４、３Ａ６两株单抗标记辣根过氧化物酶，建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定，用于定量检测血清中的可溶性伤寒沙门菌鞭毛抗原。结果检测灵敏度可达０．０７８ｎｇ／ｍｌ，批内及批间变异系数为４．９％和６．９％。检测血培养阳性的伤寒患者血清３４份，３２例阳性，符合率９４％。结论该方法可作为早期、快速诊断伤寒的辅助方法     

SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的H292细胞TLR5表达的影响

目的 通过上调SIGIRR在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的Toll样受体5(TLR5)表达的影响.方法 实验设以下6组:H292组(未给予任何处理的H292细胞)、eH292组(转染空质粒pEGFP-N1的细胞)、sH292组(转染SIGIRR-EGFP真核表达质粒的细胞),另设加入鞭毛蛋白(终浓度0.2μg/ml)的上述各组细胞,分别命名为FH292组、FeH292组和FsH292组.构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,脂质体转染法转染细胞,24h后用荧光显微镜观察融合蛋白的表达情况.Western blotting检测TLR5蛋白表达,ELISA法测定细胞上清中TNF-α浓度.结果 转染重组载体的H292细胞可表达SIGIRR-EGFP融和蛋白,其主要分布于细胞质.通过对TLR5蛋白条带的光密度进行观察发现,FH292组(8.06±1.53)较H292组(1.71±0.12)、FeH292组(7.32±0.99)较eH292组(2.32±0.13)、FsH292组(7.01±0.83)较sH292组(2.01±0.07)TLR5蛋白表达明显增加(P<0.01).FH292组TNF-α浓度(114.06±10.34)较H292组(43.52±2.84)明显增加,而FsH292组TNF-α浓度(69.56±11,23)较FeH292组(117.76±9.07)显著下降(P<0.01).结论 SIGIRR的表达上调可抑制鞭毛蛋白诱导的H292细胞中TNF-α的产生,对TLR5表达无影响.SIGIRR在该信号通路中发挥了"刹车"作用,但该作用并不是由TLR5介导的.     

问号赖型钩体内鞭毛基因重组质粒的构建及其在大肠杆菌的表达

为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原，以探讨制备新疫苗的途径，利用聚合酶链反应扩增其编码基因完整的开放阅读框架，扩增产物经ＳａｌⅠ、ＣｌａⅠ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７表达载体上。重组质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示此产物相对分子量为３４ｋｄ，产量占细菌总蛋白的１１．８％。用插入片段为探针，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交提示可能有两个相关的基因存在于钩体的基因组内。Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交证实该表达蛋白可与内鞭毛抗血清在３４ｋｄ处出现印迹，与钩体内鞭毛同类蛋白带位置一致，本实验克隆了钩体内鞭毛Ｂ类基因并表达了相应抗原。