星形胶质细胞与GnRH神经元共培养可通过谷氨酸受体介导促进GnRH神经元分泌

目的 探讨下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元与星形胶质细胞共培养对GnRH神经元的影响及其可能的相关机制.方法 利用Transwell共培养系统,将GnRH神经元细胞株GT1-7与原代星形胶质细胞共培养10 d.免疫组织化学法检测GnRH神经元中谷氨酸受体(GluR)的分布,蛋白免疫印迹法检测GluR在GnRH神经元中的表达,并分别通过高效液相色谱法和酶联免疫吸附法检测培养上清中的谷氨酸(Glu)和GnRH的浓度变化.结果 共培养组的GnRH神经元发生mGluR5和GluR1/2/3/4从胞质到胞核的移位,在胞核中的表达较单纯GT1-7培养组显著增加(P<0.05),且Western-blot检测与免疫荧光检测结果一致.HPLC和ELISA检测结果表明,与单纯GT1-7培养组比较,共培养组上清中的Glu浓度显著减少,而GnRH的分泌则明显增加(P<0.05).结论 GnRH神经元与星形胶质细胞共培养可通过改变GluR(代谢型或离子型)在细胞内的定位与表达,从而增加GnRH的分泌.     

妊娠期高血糖患者母体胰岛β细胞自身抗体对新生儿的影响

目的探讨妊娠期高血糖患者母体胰岛β细胞自身抗体对新生儿的影响。方法选取2014年3月—2016年3月于我院就诊的口服75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)异常的孕妇共276例,以60例健康孕妇作为对照组,分别在产前和OGTT试验后空腹抽取静脉血进行检测,检测指标包括谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA))和胰岛素自身抗体(IAA),记录每个出生患儿的体重、Apgar评分、血糖指标进行分析。结果276例GDM患者中34.41%至少存在一种相关抗体阳性,GDM组GADA阳性、IAA阳性和阴性的搏动指数异常比例均高于健康组(P<0.05),IAA阳性的胎儿生长受限比例比例较GDM组抗体阴性的比例高(P<0.05),妊娠晚期胰岛细胞抗体阳性(OR:6.41,95%CI:1.41~34.13)均为新生儿产后进入ICU进行监护的风险因素,妊娠中、晚期GADA阳性(OR:10.26,95%CI:1.42~75.14)和妊娠晚期GADA阳性(OR:8.15,95%CI:1.43~46.83)均为新生儿窒息的风险因素。结论妊娠晚期胰岛细胞抗体阳性为新生儿产后进入ICU进行监护的风险因素,妊娠中、晚期GADA阳性是新生儿窒息的风险因素。     

131I-PAMAM(G5.0)介导靶向肽在甲状腺髓样癌模型中的实验研究

目的 评价新型分子靶向探针131I-PAMAM（G5.0）-SR、131I-PAMAM（G5.0）-GP及131I-PAMAM（G5.0）-SR/GP[其中,PAMAM（G5.0）:第五代聚酰胺-胺;SR:丝氨酸-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸-脯氨酸-组氨酸-脯氨酸（SRESPHP,简称SR）;GP:甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-脯氨酸-亮氨酸-精氨酸（GPLPLR,简称GP）]在荷瘤甲状腺髓样癌（MTC）模型中的靶向性。 方法 采用高效液相色谱法纯化和分析靶向肽SR、GP及SR/GP,分别将其与修饰后的PAMAM（G5.0）共价连接,合成前体药物PAMAM（G5.0）-SR、PAMAM（G5.0）-GP及PAMAM（G5.0）-SR/GP。采用动态光散射粒度分析法检测PAMAM（G5.0）键合靶向肽前后的纳米粒径及Zeta电位。采用氯胺T法对修饰后的PAMAM（G5.0）、PAMAM（G5.0）-SR、PAMAM（G5.0）-GP、PAMAM（G5.0）-SR/GP进行131I标记,合成阳性对照组[131I-PAMAM（G5.0）]及实验组[131I-PAMAM（G5.0）-SR、131I-PAMAM（G5.0）-GP、131I-PAMAM（G5.0）-SR/GP]的4种探针。通过薄层色谱法分别测定探针的标记率、放射化学纯度及稳定性。经模型鼠腹腔注射阴性对照组（Na131I）、阳性对照组及实验组探针后,分别于4、8、12、24及48 h进行SPECT/CT显像,并计算靶/非靶值（T/NT）,同时处死裸鼠取肿瘤及重要脏器测定放射性,以每克组织百分注射剂量率（%ID/g）表示。组间同一时间点T/NT、组内不同时间点T/NT及组间24 h肿瘤放射性摄取值的比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果 纯化后的靶向肽SR、GP和SR/GP的纯度均达99%。PAMAM（G5.0）键合SR、GP、SR/GP前后的纳米粒径分别为4.47、5.70、4.71、5.95 nm,Zeta电位分别为+37.95、+20.02、+28.34、+24.37 mV。131I标记4种探针的标记率均>75%,放射化学纯度均>90%,48 h的体外稳定性显示,放射化学纯度均在85%以上。SPECT/CT图像显示,实验组探针在不同时间的T/NT均较对照组有增高趋势:131I-PAMAM（G5.0）-GP 在4 h的T/NT（6.03±1.45）与阳性对照组（2.18±0.39）、阴性对照组（1.36±0.00）比较,且差异均有统计学意义（t=3.235,P=0.033;t=3.843,P=0.019）;而131I-PAMAM（G5.0）-SR在8、12、24 h的T/NT（5.12±1.65、4.82±0.09、3.41±1.01）均较阴性对照组（1.50±0.00、1.43±0.65、1.34±0.81）高,且差异均有统计学意义（t=4.004,P=0.017;t=3.388,P=0.027;t=4.180,P=0.009）。实验组组内比较,131I-PAMAM（G5.0）-SR在24 h的T/NT（3.41±1.01）较131I-PAMAM（G5.0）-GP（2.10±0.67）高,差异有统计学意义（t=3.990,P=0.016）。注射131I-PAMAM（G5.0）-SR的肿瘤放射性摄取在24 h[（1.80±0.18）%ID/g]均较实验组其他探针、阴性对照组及阳性对照组高,但差异无统计学意义（F=3.366,P=0.059）。T/NT及肿瘤放射性摄取的达峰时间:131I-PAMAM（G5.0）-GP和131I-PAMAM（G5.0）-SR/GP 为4 h,131I-PAMAM（G5.0）和131I-PAMAM（G5.0）-SR为8 h。131I-PAMAM（G5.0）-GP的放射性洗脱较快,12 h的T/NT较4 h下降约57%。 结论 SR及GP提高了131I-PAMAMM（G5.0）对MTC的靶向性,131I-PAMAM（G5.0）-GP靶向MTC肿瘤新生血管使其在瘤体的摄取及代谢较快,有望应用于MTC SPECT显像,而131I-PAMAM（G5.0）-SR对MTC细胞具有很好的靶向性和滞留性,有望应用于MTC的靶向诊治及预后评估。     

聚L-谷氨酸γ-苄酯合成的改进

本文报告了聚L-谷氨酸γ-苄酯(PBLG)合成方法的改进。采用硫酸催化—真空脱水制备BLG,光气—苯液相法制备氨基酸-N-碳酸酐(NCA),苯—二氧六环溶液聚合制备PBLG,产率分别为59.5％,85.6％和95.0％。粘度测定表明,PBLG分子量在5～35万范围,分子量大小通过A/I比和溶剂比调节。红外分析表明,PBLG的构型为α-螺旋型多肽。     

谷氨酸脱羧酶抗体在成人隐匿性自身免疫性糖尿病诊断中的临床意义

目的:探究谷氨酸脱羧酶抗体(GAD)在成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)诊断中的临床意义,为临床提供一定的理论参考.方法:选取我院2017-01～2019-01收治的30例成人LADA患者视为实验组,另纳入同期体检结果正常的30例体检者视为对照组.比较两组GAD、胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)阳性检测率;分析实验组GAD抗体阳性和阴性患者的临床病理资料情况.结果:实验组GAD、ICA、IAA三种抗体阳性检测率分别为16.67％(5/30)、20.00％(6/30)、13.33％(4/30),均明显高于对照组的0.00％、3.33％(1/30)、0.00％,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组GAD抗体阳性患者发病年龄、体重指数(BMI)、空腹C肽、餐后2h C肽均低于阴性患者,胰岛素使用率、自发酮症率高于阴性患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:LADA患者的临床诊断中,GAD有着较高的诊断价值,可作为LADA临床诊断的依据,应加强检测.     

GRM4正向别构调节剂抑制乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡

背景与目的：代谢型谷氨酸受体4（glutamate metabotropic receptor 4，GRM4）在多种恶性肿瘤中高表达并与肿瘤患者的预后相关，但GRM4在乳腺癌中的生物学作用仍不清楚。本研究拟探讨GRM4的两种正向别构调节剂VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞的增殖及凋亡的影响，进而为乳腺癌的靶向治疗提供思路。方法：在体外培养的乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和SK-BR-3中分别单独加入VU0364439、VU0364770以及联合使用两种试剂，利用CellTiter-Glo^®发光细胞活力测定法定量检测各组乳腺癌细胞系的增殖活性；利用Annexin Ⅴ-PI双染法检测各组乳腺癌细胞系的凋亡水平；通过实时荧光定量聚合酶链反应（realtime fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）技术测定GRM4基因在6种乳腺癌细胞系中的表达情况，在GRM4表达水平最高的细胞中单独加入或联合使用VU0364439及VU0364770，用RTFQ-PCR检测GRM4基因表达的改变。结果：与对照组相比，单独使用及联合使用VU0364439及VU0364770显著抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和SK-BR-3的增殖水平，并促进MCF-7细胞凋亡现象的发生；联合使用与单独使用VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用差异无统计学意义（P＞0.05）；RTFQ-PCR实验表明GRM4在MCF-7细胞中的表达水平最高；在MCF-7细胞中分别单独使用或联合使用VU0364439及VU0364770均能激活GRM4的表达。结论：GRM4的正向别构调节剂能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用可能是通过激活GRM4基因的表达引起的，本研究为探索GRM4在乳腺癌中的作用机制以及开发新的乳腺癌靶向治疗方法奠定了基础。     

红景天苷对NMDA介导的小鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷（Sal）对视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的抑制作用。方法：实验研究。36 只C57BL6J小鼠随机分为空白组、模型对照组、不同浓度Sal实验组，每组6 只，均以右眼为实验眼。空白组仅注射0.9%PBS溶液，模型对照组和实验组玻璃体腔注射N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）1.5 μl建立RGCs损伤模型；建模前48 h，模型对照组注射1.5 μl 0.9% PBS溶液，实验组玻璃体腔注射不同浓度Sal（0.1、0.4、2、8 mmol/L，1.5 μl）。建模5 d后制备视网膜标本，观察视网膜RGCs存活及凋亡情况，Western Blot法检测视网膜中Caspase-3、Caspase-8 蛋白的表达。数据采用单因素方差分析。结果：HE染色显示空白组视网膜RGCs无变化，模型对照组RGCs显著减少，不同浓度Sal实验组RGCs细胞核染色数目较模型对照组逐渐增加，并呈浓度依赖性；经视网膜平铺片测定RGCs 存活情况，发现空白组RGCs正常存活，模型对照组仅少量RGCs存活，不同浓度Sal组RGCs存活率较模型对照组提高，各组小鼠RGCs阳性细胞数比较差异有统计学意义（F=212.0，P < 0.001）。同时，8 mmol/L浓度的Sal实验组Caspase-3、Caspase-8 蛋白表达明显低于模型对照组，差异有统计学意义（F=168.3，P < 0.001）。结论：Sal可以抑制NMDA介导的RGCs凋亡，对RGCs损伤有保护作用。     

新型棕榈酰谷氨酸-顺铂纳米粒的制备及其体外药效研究

目的以棕榈酰谷氨酸为载体材料制备新型高载药顺铂纳米粒(palmoyl glutamic acid-cisplatin-nanoparticles,PG-CDDP-NPs),并对其体外抗肿瘤活性进行研究。方法采用肖顿-鲍曼缩合法合成棕榈酰谷氨酸两亲性材料,以所合成的材料为载体,利用其与顺铂的配位作用制备高载药新型顺铂纳米粒,并对所制备的PG-CDDP-NPs性质进行考察;以市售顺铂注射剂为对照,采用MTT法考察了PG-CDDP-NPs对人肝癌细胞HEPG2的体外抗肿瘤活性。结果合成了棕榈酰谷氨酸,并成功制备了高载药量的PG-CDDP-NPs,PG-CDDP-NPs粒径为(106.33±4.45)nm,粒度分布较均匀,包封率为(84.20±0.81)%,载药量质量分数高达(27.03±0.12)%。体外释放研究表明,PG-CDDP-NPs具有缓慢释药性质,24 h累积释放量质量分数仅为(28.74±1.37)%。体外药效学实验结果显示PG-CDDP-NPs和CDDP-S对高表达的人肝癌细胞HEPG2细胞的IC50值分别为3.54μmol·L-1和4.55μmol·L-1。结论以棕榈酰谷氨酸为载体材料可制备高载药量的顺铂纳米粒;PG-CDDP-NPs在体外对HEPG2细胞有杀伤作用,与顺铂注射剂相比,显示出较强的抑瘤效果,PG-CDDP-NPs是一种具有潜在应用价值的顺铂纳米制剂。     

神经肽优洛可定对丘脑底核神经元自发放电影响与CRF-2R关系研究

目的研究神经内分泌生物活性肽优洛可定(urocortin,UCN)对丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)神经元放电及STN中多巴胺(dopamine,DA)能、谷氨酸(glutamic acid,GLU)能神经传递的影响,研究UCN在STN中是否与GLU及DA存在汇聚作用,探讨UCN在帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)发生中可能发挥的作用。方法取40只SD大鼠,采用神经电生理实验方法中的微电泳技术,在微电泳UCN过程中,观察STN神经元放电的波形及频率变化,同时,微电泳Astressin(AST)及蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂,观察促皮质素释放因子2型受体(corticotropin releasing factor 2 receptor,CRF-2R)是否参与UCN对STN神经元放电的影响。另外,在微电泳DA和GLU过程中,给予UCN及AST,观察STN神经元放电的变化,明确是否存在DA能及GLU能与UCN的交汇作用。结果微电泳UCN过程中,82%(27/33)STN神经元频率减慢。STN平均放电频率由(3.65±0.27)Hz减少到(2.05±0.33)Hz,微电泳UCN前、后STN放电频率明显降低(P<0.01)。另外,UCN抑制作用可被AST明显拮抗(P<0.01),UCN抑制作用也可被PKA阻断剂部分阻断。在微电泳抑制性神经递质DA和兴奋性GLU过程中,UCN能进一步协同DA的抑制效应,并明显拮抗GLU的兴奋作用(P<0.01)。结论 UCN与DA能及GLU能在STN神经元中存在汇聚作用,UCN可能是通过与CRF-2R结合,进而通过PKA信号通路,影响DA能、GLU能神经递质活动,抑制STN神经元放电。     

2型糖尿病患者GADA和ICA检测意义

本研究旨在探讨2型糖尿病患者血中GADA（谷氨酸脱羧酶抗体）和ICA（胰岛细胞抗体）阳性和阴性者的临床特征。