人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区GABA、Glu表达的影响

目的：探讨人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CAI区神经元的保护作用机制。方法：应用低压氧舱仿海拔8000米高空缺氧模型，采用免疫组织化学及免疫荧光方法并结合图像分析等技术，观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0h、24h时段海马CAI区GABA、Glu表达的影响。结果：缺氧24h复氧卟组海马CAI区GABA免疫反应阳性神经元数量、Glu免疫反应阳性神经元荧光强度分别较常氧对照组减少和减弱，复氧24h后上述变化更加明显。预防性应用人参银杏复方制剂后海马CAI区GABA免疫反应阳性神经元数量在复氧0h和24h时较常氧对照组多，以复氧0h时增加最明显；Glu免疫反应阳性神经元荧光强度在复氧0h、24h时段也较缺氧复氧实验组相应时段增加。结论：人参银杏复方制剂可增加缺氧复氧后海马CAI区GABA表达及防止Glu过度释放，对缺氧复氧性脑损伤具有保护作用。     

人工牛黄对实验性惊厥大鼠脑内海马及门区神经元丢失的抑制和GAD免疫反应阳性细胞的保护作用研究

目的:研究人工牛黄对致痫大鼠行为的影响，海马及门区神经元丢失情况和谷氨酸脱羧酶(GAD)免疫反应阳性细胞数目的改变，探讨该药的抗惊厥作用。 方法: 采用戊四唑急性惊厥模型，参照Racine标准观察行为学表现，用Nissl染色作海马及门区神经元计数，用免疫组织化学方法作GAD免疫反应阳性细胞计数。 结果: 牛黄防治组惊厥发作的潜伏时间较对照组长，发作次数较惊厥组少，而在海马及门区的神经元和在海马的GAD阳性细胞的丢失数量较惊厥组的少。 结论:人工牛黄能延长惊厥发作的潜伏期，减少发作次数，减轻神经元丢失和保护GAD免疫反应阳性细胞。     

大鼠新生期皮下注射谷氨酸单钠对成年后下丘脑ACTH神经元和正中隆起CRF神经纤维免疫反应性的影响

本文采用过氧化酶—抗过氧化酶(PAP)的免疫组织化学和荧光免疫组织化学的方法,研究了新生期大鼠皮下注射谷氨酸单纳(MSG)对成年后下丘脑弓状核促肾上腺皮质激素(ACTH)神经元和正中隆起内促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)神经纤维免疫反应的影响。新生期MSG处理后,弓状核中ACTH神经元的数目明显减少,正中隆起CRF样免疫反应末稍也大大减少,减少程度随MSG剂量增大而增加。提示MSG通过损伤前阿黑皮素(POMC)衍生的神经多肽,从而影响下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴的功能。     

免疫调节剂对致痫大鼠脑内神经元及小胶质细胞内谷氨酸和蛋白激酶C免疫反应的影响

为了探讨免疫调节作用对癫痫发病的影响与相关机制,应用免疫细胞化学技术研究免疫调节剂干预戊四氮(pentyle-netetrazol,PTZ)致痫时,大鼠脑内及培养的小胶质细胞内谷氨酸(Glu)和蛋白激酶C(PKC)的表达变化。结果显示:在体实验中大鼠大脑皮质及海马,Glu和PKC在生理盐水对照组(NS组)、戊四氮组(PTZ组)、左旋咪唑+戊四氮组(LMS+PTZ组)、地塞米松+戊四氮组(DEX+PTZ组)均有不同的表达,且二种物质变化趋势基本一致。其中PTZ组较NS组表达增强,LMS+PTZ组进一步增强,DEX+PTZ组较PTZ组和LMS+PTZ组明显减弱。离体实验中,PTZ作用小胶质细胞2h即可引起Glu和PKC表达增多,6h达峰值,12h表达有所减弱,且PTZ组Glu和PKC表达较NS组明显增多,免疫增强剂(levamisole,LMS)可进一步增强Glu和PKC的表达;免疫抑制剂(dexamethasone,DEX)则下调其表达。以上结果提示免疫调节剂可能通过作用于神经元和小胶质细胞内Glu和PKC的表达而共同影响癫痫的发病机制和发病状态。     

谷氨酸脱羧酶65片段与IL－10双基因真核表达载体的构建与鉴定

 目的 优化以往构建的以预防 1 型糖尿病为目的的全长谷氨酸脱羧酶（GAD）65 DNA疫苗，尝试构建GAD 65片段与IL-10双基因真核表达载体。方法 从GAD65质粒中扩增出GAD190-315片段和GAD490-570片段的cDNA，以overlap PCR法将之分别与hIL-2信号肽cDNA拼接，得到SGAD190-315、SGAD490-570融合基因。以p43.2-mIL-10质粒为模板，用PCR方法扩增出IL-10基因。将SGAD190-315、SGAD490-570融合基因分别与IL-10基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中，构建出2种双基因重组真核表达载体pBud-SGAD190-315/IL-10和pBud-SGAD490-570/IL-10。2种重组真核表达载体经测序鉴定正确后，用脂质体介导的方法转染COS-7细胞，转染后48和72 h以蛋白质印迹法检测细胞裂解产物及上清液中SGAD190-315和SGAD490-570融合基因的表达，ELISA方法检测细胞上清液中IL-10的表达。结果　核酸序列测定表明克隆的SGAD190-315、SGAD490-570融合基因和IL-10基因序列与报告序列一致。蛋白质印迹法和ELISA方法均检测到SGAD190-315/IL-10和SGAD490-570/IL-10重组真核表达载体在COS-7细胞中的表达。结论　成功构建了2种GAD65片段与IL-10双基因真核表达载体，为1型糖尿病的基因疫苗预防研究提供了实验基础。     

谷氨酸诱导海马神经元凋亡涉及线粒体释放细胞色素C

目的：建立体外谷氨酸诱导神经元兴奋损伤模型，探索其凋亡发生是否通过线粒体信号转导途径介导的细胞色素C（Cyt C）释放而实现，为今后干预性使用神经保护剂提供依据。方法:分离及培养新生Wistar大鼠海马神经元，选用合适谷氨酸浓度建立神经元损伤模型；利用LDH测定及流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测谷氨酸暴露后不同时点神经元凋亡及坏死的动态改变；采用Western blotting法检测caspase-3活性及线粒体内和胞浆内Cyt C水平动态变化。结果:谷氨酸诱导神经元损伤呈明显浓度及时间依赖性，50 μmol/L浓度可使LDH释放量明显增加 (18.4%,P<0.05)，暴露后6 h凋亡率显著增加；凋亡发生前，神经元caspase-3活性已明显增高（3 h），6 h达高峰；线粒体Cyt C释放发生在caspase-3增高前，30 min时胞浆内Cyt C水平即明显增加（P<0.05），3 h胞浆内Cyt C水平超过线粒体内，而线粒体内Cyt C水平进行性减少。结论:50 μmol/L谷氨酸可诱导海马神经元凋亡，凋亡机制可能是通过损伤线粒体膜，使Cyt C易位释放入胞浆激活caspase级联反应而致。     

应用磁共振波谱研究针刺对健康人前额叶神经递质影响的性别差异

目的 采用磁共振波谱MEGA-PRESS序列,观察针刺合谷穴对不同性别健康人前额叶内神经递质谷氨酸(glutamate, Glu)、谷氨酰胺(glutamine, Glx)及r-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)浓度变化的影响。方法 分别采集76例健康受试者刺激前及刺激(手针和纤毛针)合谷穴时磁共振波谱(MRS)数据,采用t检验及Pearson统计,分析刺激前后Glu﹢、Glx﹢和GABA﹢浓度变化的性别差异及相关性。结果 手针刺激前男性Glu﹢浓度明显高于女性(P<0.05),手针刺激时男性Glu﹢和Glx﹢浓度均明显高于女性(P<0.05);纤毛针刺激前男性Glx﹢浓度明显高于女性(P<0.05),纤毛针刺激时男性Glu﹢和Glx﹢浓度均明显高于女性(P<0.05);但手针和纤毛针刺激前和刺激时男性GABA﹢浓度与女性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。手针刺激前和刺激时,性别与Glu﹢及Glx﹢浓度均呈正相关(P<0.05);纤毛针刺激前和刺激时,男性与Glu﹢及Glx﹢浓度呈正相关(P<0.05);手针和...     

酸性神经肽1对小鼠大脑氨基酸类神经递质及cGMP影响的实验研究

目的 :探讨酸性神经肽 (bovineacidicneuropeptide 1BANP 1)对小鼠脑内氨基酸类递质 (谷氨酸和γ 氨基丁酸 )及cGMP的影响。方法 :将小鼠随机分为 6组 (每组 15只 ) ,其中 5组按 15mg/kg腹腔注射BANP 1,将小鼠在注射后 0 5h ,1h ,2h ,3h ,4h处死并取脑匀浆 ,另一组为注射生理盐水对照组 ,在注射盐水后 1h处死并取脑匀浆 ,用 75 %冰乙醇抽提氨基酸类物质及cGMP并沉淀蛋白质。应用滤纸电泳法对小鼠大脑谷氨酸 (glutamicacid ,Glu)和γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA)进行测定 ,应用放射免疫法对小鼠大脑环磷酸鸟苷 (cyclicmonophos phateguanosine ,cGMP)进行测定。结果 :腹腔注射BANP 1后 ,各项指标在不同时间的结果分别与对照组比较 :Glu浓度在 1h、2h时明显高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、3h、4h时差异无显著性 (P >0 0 5 )。GABA浓度在 2h、3h时显著高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、1h、4h时差异无显著性 (P >0 0 1)。cGMP浓度有一定升高 ,1h 2h时显著升高 (P <0 0 1) ,其余各时间组差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :BANP 1急性用药后在一定时间可升高脑内Glu、GABA及cGMP水平     

一氧化氮对谷氨酸单钠脑损害小鼠学习记忆能力的影响

目的　观察谷氨酸单钠 (MSG)对小鼠学习记忆的影响及血浆、脑内NO含量的变化。方法　给断乳分窝小鼠MSG灌胃 ,每天 2次 ,连续 30d ,31d早灌胃后对小鼠进行迷宫行为训练 ,2 4h后对其进行迷宫记忆检测 ,用硝酸还原酶法检测血浆脑内的NO含量。结果　MSG对小鼠学习记忆能力有影响并存在剂量效应关系 ,其血浆、脑中NO含量均升高并有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　NO可加重MSG对小鼠学习与记忆的损害作用。     

谷氨酸脱羧酶抗体在成人隐匿性自身免疫性糖尿病的诊断意义

谷氨酸脱羧酶抗体 (ＧＡＤ65-Ａｂ)是近年来发现一种新的 1型糖尿病患者胰岛 β细胞自身抗体 ,与糖尿病的病理及胰岛 β细胞分泌功能密切相关 ,对早期诊断成人隐匿性自身免疫性糖尿病 (ＬＡＤＡ)有着重要的临床意义。1　对象与方法1 1　对象　糖尿病组 1 2 6例 ,平均年龄 4 8 5± 1 3 6岁。按ＷＨＯ( 1 985年 )糖尿病诊断标准确定为 2型糖尿病 ,发病年龄≥ 2 5岁。正常对照组 1 8例 ,平均年龄4 2 7± 8 5岁 ,为健康体检者。1 2　方法 　所有对象测体重指数 (ＢＭＩ)体重 (ｋｇ) /身高2 (ｍ2 ) ,血清ＧＡＤ65 Ａｂ采用酶免法 ,糖化血红蛋…