基于固体培养基的金黄色葡萄球菌计数方法的相关性研究

目的 基于固体培养条件下对金黄色葡萄球菌传统计数方法 的比较研究,并探讨A600值和金黄色葡萄球菌活菌数二者之间的关系.方法金黄色葡萄球菌在固体条件下培养至对数生长期,无菌生理盐水制成菌悬液,采用平板计数法、麦氏比浊法、显微计数法检测菌悬液,同时记录3种方法计数结果 ;在相同培养条件下初步稀释后检测菌液的吸光度(A600)值,取A600值在0.2～1间的菌液进一步稀释并检测A600,同时对各个稀释度的菌液进行平板菌落计数.结果在固体培养条件下,传统细菌计数方法计数结果:显微计数法>平板计数法>比浊法;同时A600值和金黄色葡萄球菌活菌数二者之间呈线性相关,线性回归方程为Y=28.98601X-0.17331,A600值(X),菌液浓度(Y×107cfu/mL).结论 基于固体培养条件下,3种传统计数方法之间存在各自的特点.同时,金葡菌菌液的吸光度与金黄色葡萄球菌活菌数之间呈良好的相关性,适用于金黄色葡萄球菌浓度的测定.     

依替米星联合左氧氟沙星对糖尿病足MRSA感染的疗效

目的 探讨依替米星联合左氧氟沙星对糖尿病足耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的治疗作用,并对MRSA荚膜多糖致病基因多态性进行初步研究。 方法 选取2012年10月-2014年10月期间于杭州师范大学附属医院接受治疗的糖尿病足MRSA感染患者78例,采用随机数字表法分为对照组和实验组。对照组39例,其中男性20例,女性19例,年龄30~72岁,平均年龄(47.8±18.2)岁,采用左氧氟沙星进行治疗;实验组39例,其中男性20例,女性19例,年龄28~75岁,平均年龄(49.1±19.5)岁,采用硫酸依替米星联合左氧氟沙星治疗,2组患者治疗时间均为4周,采用Wagner分级法对患者疗效进行评定,比较2组患者糖尿病足治疗有效率,并且对其致病因素荚膜多糖中致病基因进行研究。 结果 实验组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05),在治疗后28 d,创面细菌金黄色葡萄球菌阳性率实验组显著低于对照组(P<0.05);荚膜多糖主要是通过保护细菌倍吞噬系统吞噬从而抵抗抗生素杀伤力,对患者创面细菌进行荚膜多糖基因PCR分析结果显示荚膜多糖致病基因主要以5型以及8型为主(61.5%)。 结论 依替米星联合左氧氟沙星对MRSA所致糖尿病足患者有较强的治疗作用,显著增加患者治疗有效率,其荚膜多糖基因主要是以荚膜多糖5型以及荚膜多糖8型为主。      

亚抑菌浓度亚胺培南对MRSA体外增殖及毒力相关基因mRNA表达水平的影响

目的：探讨亚抑菌浓度亚胺培南对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）生物学活性的影响,阐明碳青霉烯类抗生素对MRSA活性的抑制作用及其机制,为临床应用碳青霉烯类抗生素治疗MRSA感染提供依据。方法：选取5株ST239型MRSA临床分离株,采用1/10和1/2最小抑菌浓度（MIC）亚胺培南与其体外共培养1.5、6.0和12.0h,分为对照组（培养液中不加亚胺培南）、1/10MIC组（培养液中添加1/10MIC浓度亚胺培南）和1/2MIC组（培养液中添加1/2MIC浓度亚胺培南）。采用荧光定量PCR方法检测各组MRSA株毒力相关基因纤维黏连蛋白A（fnbA）、葡萄球菌蛋白A（spa）、α溶血素（hla）、白细胞毒素D（lek-D）和E（lek-E）、肠毒素A（sea）mRNA相对表达水平,分光光度法检测各组MRSA株体外增殖活性。结果：与对照组比较,体外共培养6.0和12.0h时,1/2MIC组MRSA株增殖活性明显降低（P<0.01）;培养1.5和6.0h时,6个MRSA毒力相关基因mRNA相对表达水平均明显低于对照组（P<0.01）;培养12h时,1/10MIC和1/2MIC浓度组MRSA株各毒力相关基因mRNA表达未能检测到。结论：亚抑菌浓度亚胺培南对ST239型MRSA多种毒力相关基因mRNA表达具有明显抑制效应,高浓度亚胺培南可抑制MRSA的体外增殖,提示亚胺培南对于重症MRSA感染患者具有潜在的应用价值。     

金黄色葡萄球菌在聚醚醚酮(PEEK)、钛(Ti)、钽(Ta)3种融合器材料上成膜能力研究

目的研究金黄色葡萄球菌在聚醚醚酮(PEEK)、钛(Ti)、钽(Ta)3种常用脊柱融合器的成膜能力材料成膜的形态学。方法细菌培养至对数期后接菌在PEEK、Ti、Ta 3种常用脊柱融合器材料上,通过结晶紫染色、绿色荧光检测和菌落实验观测3种材料成膜的形态学。结果用结晶紫染色手段发现成膜能力TiPEEKTa。绿色荧光检测:成膜能力:TiTa。PEEK为白色材料,自发荧光过强,不适合荧光成膜观察。应用活菌计数测(CFU)法测定粘附在材料上的总活菌量,为TiPEEKTa。结论金黄色葡萄球菌在PEEK、Ti、Ta 3种材料上表面的成膜能力有明显差异。     

性病愈后前列腺炎病人葡萄球菌感染及其耐药性分析

20世纪 90年代以前 ,引起前列腺炎的病原菌主要是大肠埃希菌、变形杆菌等肠杆菌科的细菌和假单胞菌等非发酵菌。随着第三代头孢和氟喹诺酮类抗生素的广泛应用 ,葡萄球菌感染日趋严重。尤其是耐甲氧西林凝固酶阳性的葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)和耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌 (ＭＲ ＣＮＳ)引起的感染 ,已成为临床医学和流行病学的重要研究课题。1998年 7月～ 2 0 0 1年 7月 ,我们对 2 91例性病后前列腺炎病人的葡萄球菌感染率及其耐药性进行了分析 ,现报道如下。1　资料与方法1.1　一般资料　我院性病门诊就诊的男性病人 ,年龄 18～6 3岁 ,平均 …     

生物喋呤合成酶抑制剂对烫伤大鼠金葡菌脓毒症的保护效应及机制

目的　探讨生物喋呤合成限速酶抑制剂 - 2 ,4 二胺 6 羟基嘧啶 (DAHP)对金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )脓毒症的保护效应及机制。　方法　 5 6只Wistar大鼠随机分为正常对照组、2 0 %TBSAⅢ度烫伤对照组、烫伤后金葡菌感染组和DAHP拮抗组。无菌留取大鼠心、肝、肺、肾组织检测三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP CHI)、诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)及肿瘤坏死因子α (TNFα )基因表达 ,同时测定组织中四氢生物喋呤 (BH4)和一氧化氮 (NO)的水平。　结果　烫伤后金葡菌感染可导致组织GTP CHI基因表达广泛上调、BH4合成显著增加。同时 ,组织iNOSmRNA表达和NO水平亦明显升高 ,其中肝、肺改变尤为显著。给予DAHP不仅可显著抑制各组织GTP CHImRNA表达和BH4的产生 (P<0 .0 5～ 0 .0 1) ,iNOSmRNA表达和NO的生成亦明显受抑 ,同时TNFα表达也明显降低。此外 ,DAHP拮抗组动物 6h死亡率有所降低 (分别为 2 5 .0 %和 5 5 .6 % ,P =0 .0 8)。　结论　DAHP早期干预可在一定程度上改善革兰阳性菌脓毒症动物的预后 ,其机制可能与DAHP抑制体内BH4和NO的产生有关。     

烫伤合并金葡菌感染大鼠组织CD14 mRNA的改变

目的　探讨细菌脂多糖受体CD14在烫伤合并金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )感染中的变化规律及其意义。　方法　采用大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤合并金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,动态检测心、肝、肺、肾等重要器官中CD14mRNA表达的改变 ,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点。　结果　烫伤合并金葡菌脓毒症早期 ,各脏器内毒素含量即明显高于正常对照组 ,并于2～ 6h达峰值 ,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著 (P <0 .0 5 )。而血浆内毒素水平亦于伤后 2h显著高于正常对照组 (分别为 0 .30 5 6EU/ml和 0 .12 5 0EU/ml,P <0 .0 5 )。与此同时 ,小肠组织中二胺氧化酶的活性明显降低 (P <0 .0 5 )。烫伤合并金葡菌感染后 ,各组织CD14mRNA的表达亦呈不同程度升高 (P <0 .0 5 ) ,其中肺脏改变尤为显著 ,伤后 6、2 4h肺脏CD14mRNA表达分别为正常对照组的 1.80和 1.81倍。　结论　烫伤合并金葡菌攻击可导致内毒素移位和组织CD14mR NA表达不同程度升高 ,CD14基因表达的上调可能与移位内毒素的刺激作用有关。     

金黄色葡萄球菌感染侵入人成骨细胞的体外实验

目的 体外实验检测金黄色葡萄球菌感染侵入人的成骨细胞情况以及观察不同细菌感染剂量、时间与侵入细胞内细菌数量变化.方法 采用透射电镜方法观察金黄色葡萄球菌感染人的成骨细胞,CFSE荧光标记细菌,流式细胞仪检测细菌感染剂量、时间与侵入细胞内的细菌数量关系.结果 体外金黄色葡萄球菌能够感染侵入到人的成骨细胞内,随着细菌感染剂量增加,侵入细胞内的平均细菌数量和侵入率同步增加;感染时间到4 h时细菌的侵入率最大,侵入细胞内的平均细菌数量在30 min～2 h呈现无统计学差异,但到4 h或8 h时呈现明显差异.结论 体外金黄色葡萄球菌能够感染侵入到人的成骨细胞内,侵入细菌的数量与不同感染剂量及时间相关.     

金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应

成骨细胞的主要功能是合成骨的细胞外基质及调控破骨细胞形成和活性,从而维持骨组织平衡。近年研究发现金黄色葡萄球菌感染能诱导成骨细胞大量分泌白细胞介素-6、白细胞介素-12和单核细胞趋化蛋白-1等免疫炎性因子,诱导成骨细胞膜表面表达主要组织相容性复合体Ⅱ和分化抗原簇40等免疫反应受体,诱导激活成骨细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体、Toll样受体及丝裂原活化蛋白激酶等免疫反应通路,参与免疫反应。该文主要就金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应的机制研究作一综述。     

固载去甲万古霉素缓释微球补片对切口疝金黄色葡萄球菌感染的预防作用

目的补片修补切口疝术后可能发生感染,采用载药补片预防感染是解决方法之一。通过制备大鼠切口疝金黄色葡萄球菌感染模型,观察固载去甲万古霉素缓释微球聚丙烯补片修补切口疝术后对感染的预防作用。方法采用复乳溶剂挥发法制备去甲万古霉素缓释微球,并将其固载至聚丙烯补片(50 mg/片)。扫描电镜观察去甲万古霉素缓释微球形态,采用高效液相色谱法检测微球中去甲万古霉素含量以及补片中去甲万古霉素释放率。取健康10～11周龄雄性SD大鼠40只,体重200～250 g;制备切口疝金黄色葡萄球菌感染模型,分别植入固载去甲万古霉素缓释微球聚丙烯补片(实验组,n=20)和聚丙烯补片(对照组,n=20)。术后观察两组大鼠切口愈合情况,3周时处死大鼠取补片及周围组织进行组织学观察,并进行炎症程度分级。结果扫描电镜观察示去甲万古霉素缓释微球形态完整,表面平滑;微球粒径较均一,64%微球粒径位于60～100μm;去甲万古霉素载药量为19.79%。固载去甲万古霉素缓释微球聚丙烯补片表面均匀,载药量为(7.90±0.85)mg/cm2,去甲万古霉素体外释放达28 d以上,累计释放率达72.6%。两组大鼠术后均存活至实验完成。22只大鼠切口发生感染,其中实验组2只(10%),对照组20只(100%);两组感染率比较,差异有统计学意义(χ2=32.727 3,P=0.000 0)。实验组镜下见局部炎性反应不明显,炎症程度分级Ⅰ级16只,Ⅱ级4只;对照组补片有大量炎性细胞浸润,炎症程度分级Ⅱ级3只,Ⅲ级17只。两组炎症程度分级比较,差异有统计学意义(Z=32.314,P=0.000)。结论固载去甲万古霉素缓释微球聚丙烯补片对大鼠切口疝金黄色葡萄球菌污染具有抗感染作用。