ACE/ACE2在AGT-REN双转基因高血压小鼠肾组织的表达变化及意义

目的: 观察血管紧张素原(AGT)-肾素(REN)双转基因高血压小鼠肾脏组织病理改变及血管紧张素转化酶(ACE)/血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化,探讨ACE和ACE2在高血压肾损伤中的作用。方法: 实验分为4组,随机选择10月龄野生型、AGT转基因、REN转基因以及AGT-REN双转基因雄性C57小鼠各6只。每组动物颈动脉插管检测平均动脉压(MAP),1 h后处死小鼠;左侧肾脏置于10%中性甲醛固定,常规HE染色方法观察肾脏组织病理改变,免疫组化法观察肾脏ACE及ACE2的表达变化;右侧肾脏取出后放入蛋白裂解液中,提取蛋白,进行Western blotting实验,观察肾组织中ACE和ACE2蛋白表达。结果: 与野生型小鼠相比,AGT转基因小鼠MAP无明显变化(P>0.05),REN转基因小鼠MAP降低约15 mmHg(P<0.05);AGT-REN双转基因小鼠MAP明显升高约30 mmHg(P<0.05)。与野生型小鼠相比,AGT转基因和REN转基因小鼠肾组织未见明显病理改变,AGT-REN双转基因小鼠肾组织可见肾小动脉内膜及管壁显著增厚、管腔狭窄、纤维素样坏死、玻璃样变等典型恶性高血压肾损伤病理改变。免疫组化结果显示,与野生型小鼠相比,AGT转基因和REN转基因小鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显差异(P>0.05),AGT-REN双转基因鼠肾组织ACE表达明显增高(P<0.05),而ACE2表达明显降低(P<0.05)。Western blotting结果显示:与野生型小鼠相比,AGT转基因鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显变化;REN转基因鼠肾组织ACE表达无明显变化,ACE2表达稍降低(P<0.05);双转基因鼠肾组织ACE蛋白表达明显增强, ACE2蛋白表达水平显著降低,ACE/ACE2表达显著失衡。结论: AGT-REN双转基因可致小鼠恶性高血压,导致肾脏严重损伤;ACE/ACE2的表达失衡与血压改变密切相关,降低ACE或提高ACE2的表达可能对防治高血压具有重要意义。     

大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究

目的: 体外分离培养SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群,并对其增殖特性和血管功能进行初步分析。方法: 克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,RT-PCR鉴定细胞亚群纯度,MTT检测血管外膜成纤维细胞亚群增殖能力。荧光定量PCR检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(losartan)和PD-123319对前内皮素原-1(preproET-1)mRNA表达的影响。结果: 克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群:圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,经RT-PCR检测,结果显示无von Willebrand因子、CD8、结蛋白和肌球蛋白重链的表达,是纯细胞系。2个细胞亚群的增殖情况有所不同,圆形细胞在第2~4 d进入指数分裂期;纺锤形细胞于第3~5 d进入指数分裂期。AngⅡ在0~1 000 nmol/L范围内对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无显著影响,而呈浓度依赖性地增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达(P<0.01);losartan阻断了AngⅡ诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,但对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无明显影响。结论: SD大鼠血管外膜成纤维细胞有2个细胞亚群:圆形细胞和纺锤形细胞,其生长特性略有不同。AngⅡ显著促进圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,提示这2个细胞亚群可能在血管重建和修复过程中发挥不同作用。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对Ang Ⅱ刺激的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的: 探讨含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2 (Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase 2, SHP-2) 对血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ) 刺激的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的作用。方法: 差速贴壁法体外培养心肌成纤维细胞,以波形蛋白(vimentin)鉴定CFs纯度; MTT法检测Ang Ⅱ作用下心肌成纤维细胞增殖率,采用重组腺病毒过表达SHP-2和SHP-2抑制剂NSC-87877分别对Ang Ⅱ作用下的细胞增殖的影响。结果: Ang Ⅱ 对CFs增殖的促进作用有剂量依赖性,其促进细胞增殖的最高浓度为10^-7 mol/L;在AngⅡ 的刺激下,SHP-2可以促进心肌成纤维细胞增殖,并且突变体组比野生型组增殖更明显(P<0.01)。 SHP-2抑制剂NSC-87877达到50 μmol/L时可以明显抑制Ang Ⅱ刺激下的CFs增殖。结论: Ang Ⅱ的促CFs增殖作用是通过SHP-2调控的。     

糖尿病大鼠肾小管骨调素表达上调

目的观察骨调素(OPN)在糖尿病(DM)大鼠肾小管的表达,探讨其与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、核转录因子-κB(NF-κB)及肾损害之间的关系。方法雄性SD大鼠70只,注射链尿佐菌素(STZ)诱导DM,随机分为5组,每组分别设鼠龄匹配的对照组。免疫组化检测肾小管OPN、AngⅡ、NF-κB及纤连蛋白(FN)的表达;Western blot检测肾皮质OPN和I-κB蛋白水平;生化测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量;光镜观察肾组织形态。结果DM大鼠肾小管AngⅡ和NF-κB表达从第3天、OPN从第7天、FN从第2周开始随病程发展而增多;肾皮质I-κB从第3天开始减少;4周时,OPN与AngⅡ、NF-κB、FN及蛋白尿呈显著正相关。结论DM大鼠肾小管OPN表达增加可能受AngⅡ和NF-κB调控,并参与肾小管间质病变的发病机制。     

局部解剖学虚拟实验室的设计与应用

近年来随着招生规模的扩大,加之各医学院校相继开设局部解剖学实验课,尸源紧张,激发了我们利用校园网创办局部解剖学虚拟实验室,作为局部解剖实验教学的重要补充,使学生无论是在校还是在假期期间,都可以利用学校的网络资源或其他方式,通过互联网模拟尸体解剖操作。     

Angiotensin-(1-7)对血管平滑肌细胞钙化的影响及信号转导通路

目的:在钙化大鼠主动脉血管平滑肌细胞上观察血管紧张素-(1-7)[Angiotensin-(1-7)]对钙化的影响及其信号通道。方法:用β-磷酸甘油制备钙化的大鼠血管平滑肌细胞,再以血管紧张素-(1-7)、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅱ 血管紧张素-(1-7)、选择性蛋白激酶A(PKA)或蛋白激酶C(PKC)抑制剂等干预,通过Von Kossa染色及检测钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达来探讨血管紧张素Ⅱ对钙化的影响及其信号通道。结果:血管紧张素-(1-7)抑制钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性(P>0.05)、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达(P<0.05),也抑制血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达的促进作用(P<0.05);血管紧张素-(1-7)提高血管平滑肌细胞内cAMP浓度(P<0.05),PKA抑制剂可阻断血管紧张素-(1-7)对钙化血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达的抑制作用(P<0.05)。结论:血管紧张素-(1-7)可抑制β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,并拮抗血管紧张素Ⅱ促进的血管平滑肌细胞钙化;这些效应与cAMP-PKA-Cbfa1信号途径有关。     

青春年少的事

<正>一个打扮像经理、身高约1.75米的父亲带着一名身高1.84米的男孩来到我的诊室。男孩耷拉着头,双手交叉着放在张开的两膝之间。父亲先开口,说,这孩子半年来害怕上厕所……孩子抬起头,不耐烦地打断说:“我来说吧。我就是上厕所解小便紧张,遇见熟人更紧张,怕他们看我解不出小便笑我,不过,我一个人的时候没有问题,陌生人在     

阿米替林与复方羊角颗粒联合治疗紧张型头痛临床观察

目的探讨阿米替林与复方羊角颗粒联合治疗紧张型头痛疗效。方法对115例紧张型头痛患者随机分为治疗组60例,对照组55例,治疗组给予阿米替林片与复方羊角颗粒口服,对照组给予肠溶阿斯匹林片口服,两组病人疗程均为4周。结果治疗组总有效率88.33%,明显高于对照组总有效率63.64%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。两组均未发现有严重的不良反应。结论阿米替林片与复方羊角颗粒联合治疗紧张型头痛,效果明显,远期疗效显著。     

缬沙坦对阿霉素心肌病大鼠的心脏保护作用及机制研究

目的： 探讨AT1受体阻滞剂缬沙坦对阿霉素心肌病(ADR-DCM)大鼠的心脏保护作用及其机制。方法: 雄性Wistar大鼠分3组：(1)阿霉素心肌病组(ADR-DCM，n=25)，阿霉素 2.5 mg/kg，尾静脉注射，每周1次，连续10周；(2)阿霉素心肌病+缬沙坦治疗组(ARB，n=10)， 缬沙坦 30 mg/kg，每天1次，灌胃治疗；(3)正常对照组(CON，n=10)。12周时进行超声和血流动力学检测，氯胺T法检测羟脯氨酸及胶原含量， Western印迹分析检测MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达，明胶酶谱法检测MMPs活性。结果: ARB组死亡率明显低于ADR-DCM组(20% vs 40%，P<0.01)。ADR-DCM组大鼠左室内径大于CON组，心功能明显低于CON组， ARB组左室内径增加程度及心功能各项指标变化低于ADR-DCM组。ADR-DCM组心肌羟脯氨酸及胶原含量高于CON组， ARB组显著低于ADR-DCM组(P<0.01)。ADR-DCM组左室心肌MMP-2、MMP-9蛋白表达及MMPs明胶酶活性明显高于CON组 (P<0.01)，ARB组MMP-2、MMP-9表达及活性明显低于ADR-DCM组(P<0.01)，而TIMP-1的表达在3组间均无显著差异(P>0.05)。结论: 缬沙坦部分通过抑制MMPs表达及活性逆转ADR-DCM左室重构，改善心功能。     

心力衰竭患者心肌组织ACE2表达与心功能的关系

目的观察心力衰竭(简称心衰)患者不同心功能状态下血管紧张素转换酶2(ACE2)基因和蛋白表达变化,探讨其与心衰患者心功能的关系。方法通过手术取材,采用RT-PCR和W estern B lot技术检测30例瓣膜病所致不同程度心衰患者和5例正常人心肌组织中ACE2 mRNA和蛋白表达。结果瓣膜病所致心衰患者心肌组织ACE2 mRNA和蛋白表达均较正常组明显升高(P<0.01),其中中重度心衰患者升高尤为显著(P<0.01)。结论心衰患者心肌组织ACE2基因和蛋白表达明显增强,这可能是心脏的代偿机制,促进ANG II降解,增加ANG1-7合成,保护残存的心功能。