自拟解郁方对抑郁症大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴相关激素的影响

目的探讨自拟解郁方对慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)致抑郁症大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴相关激素的影响。方法 2014年12月—2015年3月,选择40只大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、解郁方组各10只。模型组、氟西汀组、解郁方组采用CUMS构建抑郁模型,对照组及模型组给予生理盐水灌胃,氟西汀组给予氟西汀灌胃,解郁方组给予自拟解郁方灌胃,持续21 d。用药结束后,进行敞箱实验、糖水偏好实验;检测大鼠血清促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮质酮(corticosterone,CORT)的含量。计量资料采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果模型组水平穿越格数、竖立次数和糖水偏好水平分别为(44.18±2.60)个、(13.24±2.05)次、(0.549±0.019),明显降低对照组的(91.89±2.37)个、(23.46±2.13)次、(0.735±0.021),差异均有统计学意义(均P0.05)。模型组CRH、ACTH、CORT水平分别为(72.62±7.98)pg/ml、(54.34±3.97)、(36.26±6.96)ng/ml,均高于对照组的(51.15±5.67)pg/ml、(40.27±3.16)、(23.75±6.34)ng/ml,差异均有统计学意义(均P0.05)。与模型组相比,氟西汀组、解郁方组水平穿越格数、竖立次数和糖水偏好[(73.09±2.84)个、(19.26±2.14)次、(0.656±0.021)、(72.29±1.59)个、(19.19±2.17)次、(0.661±0.017)]明显增高,差异均有统计学意义(均P0.05)。氟西汀组和解郁方组CRH、ACTH、CORT水平分别为(62.37±6.17)pg/ml、(45.61±3.25)、(25.61±5.35)ng/ml、(61.89±6.03)pg/ml、(45.31±3.34)、(25.37±5.26)ng/ml,均低于模型组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论自拟解郁方对CUMS诱导的抑郁症大鼠HPA轴相关激素具有调节作用。     

焦虑模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴高反应性与糖皮质激素受体蛋白表达降低相关

目的 研究焦虑模型大鼠在应激条件时下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitaryadrenal,HPA)轴呈高反应性是与轴本身功能亢进还是与反馈调节中糖皮质激素受体(glucocorticoid steroid receptor,GR)蛋白表达改变相关.方法 SD健康雄性大鼠随机分为对照组(n=20)和焦虑模型组(n=26).对照组正常饲养.采用不可预知的情绪应激方法建立大鼠焦虑模型.所有大鼠每周称量体质量.造模结束后,通过行为学鉴定造模是否成功.旷场和高架作为应激源刺激大鼠,测定两组大鼠血清中促肾上腺激素和皮质酮水平.Western blot检测GR蛋白在大鼠海马、下丘脑、垂体和肾上腺组织中的表达.结果 焦虑模型大鼠体质量增长率与对照组相比明显降低(P＜0.01).高架十字迷宫实验和旷场实验显示:与对照组相比,模型组大鼠进入开臂次数、开臂停留时间、进入开臂次数百分比和进入开臂时间百分比均显著降低(P＜0.01);总路程、中央活动路程百分比和中央活动时间百分比均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).在基础条件下,两组大鼠分泌促肾上腺激素和皮质酮差异无统计学意义(P＞0.05);而应激条件下,模型组大鼠分泌两种激素显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,模型组在大鼠海马、下丘脑和肾上腺组织中GR蛋白表达显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),而在垂体中表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 焦虑模型大鼠在应激条件下,HPA轴反应性增加与GR所介导的负反馈调节作用减弱有关.     

地黄苷D对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究从地黄Rehmannia glutinosa中分离得到的地黄苷D对皮质酮诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12细胞）的保护作用及机制。方法 以500μmol/L皮质酮处理PC-12细胞24 h建立损伤模型，同时给予氟西汀和地黄苷D进行干预，采用MTT法检测细胞存活率；采用流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及线粒体膜电位水平；采用In-Cell Western法检测细胞内凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达；采用高内涵细胞成像系统检测细胞内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表达。结果 地黄苷D明显提高皮质酮诱导的PC-12细胞存活率（P<0.05、0.01...     

不同负荷运动训练对大鼠血清白细胞介素2、皮质酮、下丘脑和血清β内啡肽及血浆T淋巴细胞亚群的影响

目的：研究长时间不同负荷运动训练对大鼠免疫系统功能和神经内分泌系统反应的影响。方法：将24只大鼠随机分为对照组、60min训练组、120min训练组，训练方法采用无负重游泳，其中60min游泳训练为中等强度．120min游泳训练为大强度，为期8周。结果：与对照组相比，120min训练组大鼠体内T淋巴细胞亚群数目和白细胞介素2水平显著低于对照组（P〈0．05），下丘脑和血清中β内啡肽，以及血清中皮质酮水平显著高于对照组：60min训练组T淋巴细胞亚群数目和白细胞介素2水平显著高于对照组，下丘脑β内啡肽显著高于对照组，而血清中β内啡肽，以及血清中皮质酮水平显著低于对照组。结论：不同负荷运动训练对大鼠免疫功能和神经内分泌的影响不同．两系统之间的内部机制需进一步探讨。     

肠激安胶囊对腹泻性肠易激综合征模型大鼠腹痛的影响及分子机制研究

目的:研究肠激安胶囊对腹泻性肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠腹痛的影响及降钙素基因相关肽(CGRP)与皮质酮(CORT)相关分子机制。方法:采用母乳分离联合醋酸刺激法复制IBS-D大鼠模型后,将大鼠随机分为模型(等容生理盐水)组,匹维溴铵(0.018 g/kg)组和肠激安胶囊高、中、低剂量(2.812、1.406、0.703 g/kg)组;另取SD大鼠作为正常对照(等容生理盐水)组。ig给药,每天1次,连续14 d。采用注入生理盐水法对大鼠进行腹痛敏感性测定,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中CORT含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠下丘脑与结肠组织中CGRP m RNA的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠拱背阈值和抬腹阈值降低,血清中CORT含量增加,下丘脑与结肠组织中CGRP m RNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,匹维溴铵组与肠激安胶囊高、中剂量组大鼠拱背阈值和抬腹阈值升高,血清中CORT含量减少,大鼠下丘脑及结肠组织中CGRP m RNA表达均减弱;肠激安胶囊低剂量组大鼠拱背阈值升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:肠激安胶囊对IBS-D模型大鼠腹痛有改善作用,其作用机制可能与下调下丘脑和结肠组织中CGRP m RNA表达和降低血清中CORT含量有关。     

GABAB受体信号对皮质酮所致神经元凋亡的影响

目的 研究皮质酮是否可通过调节γ-氨基丁酸（GABA）受体影响神经细胞凋亡。方法 体内实验：将健康雄性SD大鼠（8~9周龄,20只）制备慢性束缚应激高血糖模型,测定血清皮质酮水平。取脑干进行HE染色观察显微结构,利用活化型Caspase-3 免疫组化、TUNEL染色检测细胞凋亡。体外实验：NG108-15细胞（神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞系）经皮质酮（10^-7mol/L）作用后用免疫印迹法检测活化型Caspase-3含量。NG108-15细胞重组GABAB2受体后,用100 μmol/L巴氯酚和100 μmol/L CGP35348分别激动和拮抗GABAB受体,检测皮质酮（10^-7mol/L）作用下重组NG108-15细胞内活化型Caspase-3的表达量。结果 慢性束缚应激高血糖大鼠脑干孤束核HE染色见异常细胞,免疫组化染色可见活化型Caspase-3阳性凋亡细胞、TUNEL染色也可见阳性细胞核,血清皮质酮呈现先升高后回落的趋势。体外培养NG108-15细胞表达GABAB1受体,其在皮质酮的作用下活化型Caspase-3表达量增高（P<0.05）。在皮质酮和巴氯芬作用下,重组NG108-15细胞活化型Caspase-3的表达量低于皮质酮和CGP35348作用下的活化型Caspase-3的表达量（P<0.05）。结论 皮质酮对GABAB受体的抑制是导致神经细胞兴奋性水平的异常,从而引发凋亡的机制之一。     

逍遥散含药血清减轻钙超载抑制皮质酮诱导PC12细胞的凋亡

背景： 逍遥散是中国治疗抑郁症最常用的草本植物药,其抗抑郁疗效在传统中医理论中有着完备的记录,但其具体机制还不清楚。 目 的： 本实验为了观察逍遥散含药血清对高浓度皮质酮处理的PC 12 细胞的保护作用,并初步探讨其潜在机制。 方 法： PC 12 细胞由200 µM的皮质酮和分别含有低中高三种剂量逍遥散的大鼠血清共同孵育48小时后。采用MTT方法测定细胞活力。用药后出现的凋亡细胞以及所有细胞内的钙离子量均由流式细胞仪检验。线粒体膜电位和细胞内ATP含量分别采用激光共聚焦显微镜与高效液相色谱仪测定。 结 果： 经皮质酮处理后,PC 12 细胞的活力显著下降,凋亡率显著上升。而逍遥散能够拮抗这一现象。与损伤相比较,在加有逍遥散含药血清的三个组内,细胞的存活率和凋亡率分别以剂量依赖形式增加,减弱,并在高剂量血清组中出现了显著性的差异。相比较正常对照组,我们又在由皮质酮损伤的细胞内发现了明显的钙超载,伴随这一现象的还有细胞显著下降的线粒体膜电位和ATP含量。但经过逍遥散的处理,由皮质酮所引发的钙超载,线粒体膜电位的下降,以及ATP的减少均得到了显著的抑制。 结 论： 逍遥散能抑制皮质酮所致的PC 12 细胞的凋亡。其拮抗细胞内钙超载,并且通过稳定膜电位和ATP产量来保持线粒体的生物能量功能完整,可能是逍遥散的细胞保护和抗抑郁机制所在。     

普萘洛尔和哌唑嗪对应激大鼠的保护作用

目的观察肾上腺素能受体拮抗剂普萘洛尔和哌唑嗪对慢性轻度不可预知应激模型(CUMS)大鼠行为学及急应激暴露后血清皮质酮水平(CORT)、中枢海马诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨其应激保护作用。方法健康成年Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组：空白对照组、CUMS组、普萘洛尔组和哌唑嗪组。CUMS造模前后,用旷场实验测各组大鼠的行为学变化。造模结束后,应激动物接受1.0?mA,5?s,持续60次的急性电击刺激,2?h?后断头处死。放射免疫分析法测大鼠血清皮质醇含量换算成皮质酮含量;Western blot测中枢海马中iNOS表达量。结果与对照组比较,普萘洛尔组大鼠水平运动得分、竖立次数和修饰次数减少（P＜0.05）,中枢海马iNOS表达量明显增加（P＜0.01）;哌唑嗪组大鼠与对照组比较无明显差异,血清CORT水平明显高于普萘洛尔组（P＜0.05）。结论哌唑嗪可明显改善CUMS模型大鼠的行为学改变,有利于应激个体再次遭遇急性应激时CORT的调动,减轻应激导致中枢海马损伤的程度。普萘洛尔可缓解应激时的焦虑水平,但不能扭转应激对中枢海马的损伤。     

巨噬细胞趋化检测方法的建立及皮质酮对其趋化功能的影响

目的 建立改良Boyden趋化小室(Boyden chamber)法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响.方法 分离成年Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔巨噬细胞.应用48孔Boyden chamber趋化板检测趋化功能.下室加入27μL的10nM FMLP作为趋化剂或含1%牛血清清蛋白的RPMI-1640作为阴性对照,将50μL不同细胞密度的大鼠腹腔巨噬细胞悬液(3、6、12×106/mL)置于上室以确定最适细胞密度,将趋化装置置于5%CO2、37℃细胞培养箱内孵育2、3h以确定最适孵育时间.同时,以0、10、50、1 000ng/mL皮质酮处理大鼠腹腔巨噬细胞,应用Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能.结果 巨噬细胞对10nM FMLP趋化剂呈细胞密度依赖性增加,上室巨噬细胞密度为6×106/mL时为最适细胞密度,并且最适孵育时间为3h.低浓度皮质酮(10、50ng/mL)处理大鼠腹腔巨噬细胞其趋化指数显著高于对照组(P＜0.01),而高浓度皮质酮(1 000ng/mL)处理后巨噬细胞趋化指数与对照组相比差异不明显.结论 成功建立了改良Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能方法,皮质酮可呈剂量依赖性地影响巨噬细胞趋化功能,在无免疫刺激状态下,低浓度皮质酮能增强巨噬细胞趋化功能.     

Propofol increases in vitro proliferation of cultured rat hippocampal precursor cells inhibited by corticosterone

BACKGROUND： Previous studies have shown that propofol enhances proliferation of cultured hippocampal precursor cells in vitro and increases proliferation of cultured hippocampal precursor cells inhibited by corticosterone. Because gamma-aminobutyric acid A （GABA-A） receptor is the functional target for propofol, the proliferative effects of propofol are thought to take place through GABA-A receptor. OBJECTIVE： To determine whether propofol enhances proliferation of rat hippocampal precursor cells inhibited by corticosterone by upregulating expression of GABA-A receptor. DESIGN, TIME AND SETTING： A comparative, observational, in vitro experiment was performed at the Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology from April 2005 to April 2006. MATERIALS： Propofol was purchased from AstraZeneca, italy; corticosterone was purchased from Sigma, USA; bicuculline was purchased from Alexis, Switzerland. METHODS： Hippocampal precursor cells were isolated from newborn Wistar rats and cultured in vitro. The second passage of precursor cells was grouped according to the various drugs added to the culture medium： 0.5 μmol/L propofol; 2.5 pmol/L propofol; 100 μmol/L corticosterone; 10 μmol/L bicuculline; 100 μmol/L corticosterone and 0.5 μmol/L propofol; 100 μmol/L corticosterone and 2.5 μmol/L propofol; 100 μmol/L corticosterone, 10 μmol/L bicuculline, and 0.5 μmol/L propofol; 100 μmol/L corticosterone, 10 μmol/L bicuculline, and 2.5 μmol/L propofol; 100 μmol/L corticosterone and 10 pmol/L bicuculline. The cells were cultured for 24 hours with medium containing the respective concentration of drug. The control group consisted of precursor cells absent of drug treatment. MAIN OUTCOME MEASURES： The MTT and ^3H-TdR incorporation assays were used to detect proliferative effects of propofol and bicuculline on cultured rat hippocampal precursor cells inhibited by corticosterone. Immunocytochemistry was used to detect GABA-A receptor expression. Enzyme-linked irnmunosorbent assay was used to quantify GABA-A receptor expression. RESULTS： Propofol, at a concentration of 0.5 and 2.5 μmol/L, increased proliferation of cultured rat hippocampal precursor cells inhibited by corticosterone, while bicuculline antagonized the effects of propofol （P 〈 0.05 or P 〈 0.01 ）. Corticosterone （100μmol/L） decreased expression of GABA-A receptor in the hippocampal precursor cells （P〈 0.05）, and GABA-A receptor expression was upregulated when propofol （2.5μmol/L） was added to the culture medium （P〈 0.05）. CONCLUSION： Low concentrations of propofol increased expression of GABA-A receptor. These results suggest that GABA-A receptor is involved in increased proliferation of cortisone-inhibited rat hippocampal precursor cells in vitro.