亚甲基四氢叶酸还原酶基因rs4846049 G/T多态性与中国汉族人群缺血性卒中的相关性

目的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolatereductase, MTHFR)基因3'-非翻译区rs4846049 G/T多态性与中国汉族人群缺血性卒中发病风险的相关性。方法采用病例对照研究设计,选取396例缺血性卒中患者和378名健康体检者(对照组),病例组大动脉粥样硬化和小动脉闭塞型分别为268例和128例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和直接测序法检测MTHFR 基因rs4846049 G/T多态性。结果以GG基因型为参照,TT基因型使缺血性卒中发病风险显著增高[优势比(odds ratio, OR)2．87,95%可信区间(confidence interval, CI)1．43~5．76;P=0．003];与G 等位基因比较,T 等位基因使发病风险显著增高( OR 1．62,95% CI 1．28~2．06;P<0．001)。亚组分析显示, rs4846049 G/T 多态性可显著增高 LAA 和 SAO 亚型卒中的发病风险(P均<0．05)。结论 MTHFR基因rs4846049 G/T多态性可能与中国汉族人群缺血性卒中易感性增高有关,T等位基因可能是中国汉族人群缺血性卒中的遗传危险因素。     

慢性间歇低氧诱导小鼠学习记忆障碍的实验研究

目的 探讨慢性间歇低氧（CIH）诱导小鼠空间学习记忆能力的变化及CIH对认知功能损伤的可能机制.方法 60只ICR雄性幼鼠随机分为常氧对照组（UC组）和间歇低氧组（CIH组）,每组30只;CIH组小鼠置于低氧舱内,通过吹入氮气及压缩空气,每60s做一次缺氧/再氧合循环,使氧浓度波动在6％～8％和20％～ 21％之间,每天8h.CIH组根据低氧造模时间分为3d（A组）、1周（B组）、2周（C组）、4周（E组）、6周（F组）,以及造模结束后常氧饲养1月的10周组（G组）,共6组,每组5只小鼠,同期设6组对照,每组5只小鼠.在慢性间歇低氧3d、1周、2周及6周终点,采用Morris水迷宫的方法测定CIH组和UC组空间学习记忆功能的变化;Western blot法分别测各组海马N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位1（NR1）蛋白表达的变化;采用免疫荧光标记测定海马Caspase-3表达情况.结果 ①CIH组小鼠在间歇低氧3d时,水迷宫逃避潜伏期较对照组有所延长,但无统计学差异（P＞0.05）;随着间歇低氧时间的延长,逃避潜伏期较对照组逐渐延长（P＜0.05）;低氧6周后,CIH组逃避潜伏期[（68.64±26.52）s]较对照组[（21.36±14.14）s]明显延长（P＜0.01）.低氧6周后,CIH组穿越平台次数[（4.58±2.58）次]较对照组[（8.06±2.74）次]明显减少（P＜0.01）;②与对照组比较,CIH组B、C、E、F及G组小鼠海马神经元NR1蛋白表达均降低（P＜0.叭）,C、E组降至最低水平（P＜0.01）;复氧1月后的G组NR1蛋白与F组相仿,仍较对照组降低（P＜0.01）.CIH各组海马Caspase-3表达均明显升高,并成时间-效应关系,除A组外,其余各组与对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,CIH组组内指标比较无显著差异（P＞0.05）.结论 慢性间歇低氧诱导小鼠空间学习记忆障碍,且随低氧暴露时间延长学习记忆功能损害加重,这可能与海马神经元NR1蛋白表达下调以及与Caspase-3介导的海?     

小鼠谷胱甘肽S转移酶K1启动子荧光素酶报告基因的构建及功能鉴定

目的:构建小鼠谷胱甘肽S转移酶K1(mGSTK1)启动子荧光素酶报告基因质粒,并分析其活性。方法:根据GeneBank中mGSTK1基因序列设计引物,应用PCR技术扩增mGSTK1启动子片段,插入pGL3-basic载体,获得mGSTK1启动子报告基因质粒pGL3-mGSTK1-2046。再以pGL3-mGSTK1-2046为模板,进一步构建了2个5’端部分缺失的报告基因质粒:pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76。将构建的报告基因质粒瞬时转染不同的细胞株3T3-L1和人胚肾(HEK)293,48 h后检测荧光素酶的活性。结果:所构建的质粒经酶切、测序鉴定正确。pGL3-mGSTK1-2046在3T3-L1和HEK293中均有不同程度的转录活性。将pGL3-mGSTK1-2046、pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76转染HEK293细胞,结果显示pGL3-mGSTK1-936转录活性最高,而pGL3-mGSTK1-76转录活性显著降低。结论:成功构建mGSTK1启动子荧光素酶报告基因质粒;翻译起始点上游的-971～-111 bp片段是mGSTK1启动子的重要区域。为深入了解mGSTK1启动子的调控机制以及今后对代谢性疾病的治疗提供一定的实验基础。     

慢性间歇低氧对大鼠肝脏的损伤及4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶的干预作用

目的 探讨慢性间歇低氧(CIH)对大鼠肝脏损伤机制和4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶( tempol)的干预作用及其可能机制.方法 应用CIH大鼠模型,模拟OSAS慢性间歇低氧/再氧和病理生理过程.32只雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为低氧对照组、低氧干预组、低氧盐水组和常氧对照组,共4组,每组8只.CIH各组最低氧浓度均为5％,低氧频率均为30次/h,8 h/d.暴露6周后处死大鼠,取肝脏组织行石蜡切片HE染色观察肝细胞形态变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肝脏中核因子-κB、谷胱甘肽过氧化物转移酶(GSH-PX)和丙二醛的水平.结果 肝脏病理检查可见低氧对照组及低氧盐水组肝细胞胞膜破坏,细胞水肿,胞质稀疏,核深染;低氧干预组、常氧对照组未见明显肝脏损害.与常氧对照组比较:低氧对照组和低氧盐水组核因子-κB[(12.4±2.0) ng/g,(12.2±1.9) ng/g]和丙二醛[(101±22)μmol/g,(99±18) μmol/g]水平均升高(均P＜0.05),GSH-PX活性[(88±17) U/mg,(90+15) U/mg]均下降(均P＜0.05);与低氧对照组、低氧盐水组比较,低氧干预组核因子-κB[(7.8 +1.3) ng/g]和丙二醛[(59±10) μmol/g]水平均下降(均P＜0.05),GSH-PX活性[(181±29) U/mg]均升高(均P＜0.05);低氧干预组与常氧对照组比较,GSH-PX和丙二醛水平差异均无统计学意义(均P＞0.05),但核因子-κB水平高于常氧对照组[(4.1±0.9) ng/g,P＜0.05];低氧对照组与低氧盐水组比较以上指标差异均无统计学意义(均P＞0.05).核因子-κB水平与GSH-PX活性和丙二醛水平分别呈负相关(r=-0.0754,P＜0.01)和正相关(r =0.689,P＜0.01)关系.结论 CIH可通过氧化应激和激活前炎性转录因子核因子-κB造成肝脏损伤;tempol可通过抗氧化作用清除活性氧干预CIH肝脏损害的发生.     

谷胱甘肽硫转移酶GSTO1基因Glu155△Glu位点多态性与燃煤污染型地方性砷中毒的关系

目的 探讨谷胱甘肽硫转移酶GSTO 1基因Glu155△Glu位点多态性与贵州省燃煤污染型地方性砷中毒发生的关系.方法 采用双相引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-with confronting twopair primers,PCR-CTPP)技术检测贵州省130例燃煤污染型地方性砷中毒患者和130例健康对照人群的GSTO1 Glu155△Glu基因型,DNA测序验证检测结果.用非条件Logistic回归模型分析GSTO1 Glu155△Glu多态性与燃煤污染型砷中毒发病风险的关系.结果 PCR-CTPP法检测出的Glu/Glu和Glu/△Glu基因型结果与DNA测序结果一致.砷中毒组GSTO1 Glu155△Glu位点Glu/Glu和Glu/△Glu基因型分布频率分别为94.85％(92/97)和5.15％(5/97),对照组分别为99.15％(117/118)和0.85％(1/118),二者比较差异有统计学意义(x2=3.896,P＜0.05),两组均未检测到△Glu/△Glu基因型,调整年龄和性别后发现GSTO1 Glu155△Glu的多态性是燃煤污染型砷中毒发病的危险因素[比值比(OR)=1.85,95％可信区间(CI):1.39～17.48].结论 GSTO1 Glu155△Glu多态性与燃煤污染型砷中毒的发病风险有一定关联,两者之间的关系值得进一步扩大样本量进行深入研究.     

重复经颅磁刺激改善血管性痴呆大鼠认知功能及机制的研究

目的从行为学、形态学、电生理学和分子生物学等不同层面研究重复经颅磁刺激(rTMS)对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆的影响。方法选择健康雄性SD大鼠20只,随机分为假手术组6只,VaD组6只,rTMS组8只。治疗后进行Morris水迷宫行为学测试,记录各组大鼠海马长时程增强效应(LTP)。应用Western blot技术及免疫组织化学技术检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)蛋白的表达。应用HE染色,观察各组大鼠海马CA1、CA3区细胞形态。结果 VaD组和rTMS组水迷宫检测均显示全时程平均逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0.05),rTMS组较VaD组明显缩短(P<0.05);VaD组和rTMS组在原平台象限游泳时间和在原平台象限游泳路程占总路程百分比较假手术组明显缩短[(5.50±0.83)s、(9.76±1.56)s vs(13.53±3.70)s,(19.78±3.54)%、(30.33±3.82)%vs(46.73±14.08)%,P<0.05],rTMS组较VaD组明显延长(P<0.05)。rTMS组LTP,海马BDNF、NMDAR表达较VaD组显著升高。光镜下可见,rTMS组海马CA1、CA3区神经细胞排列、层次数量、细胞受损程度均明显改善。结论 rTMS可上调大鼠海马BDNF、NMDAR的表达,从而促使LTP形成,增强突触可塑性,改善大鼠空间记忆能力及认知功能。     

侵袭性垂体腺瘤磁共振成像与谷胱甘肽转移酶P1的相关性

目的研究侵袭性垂体腺瘤(PA)的磁共振成像(MRI)与谷胱甘肽转移酶(GST)P1的相关性。方法接受磁共振成像(MRI)诊断及手术治疗的PA患者106例,分析手术结果及垂体腺瘤的GSTP1表达情况,PA鞍底扩展与GSTP1表达情况,PA鞍旁扩展与GSTP1表达情况及颈内动脉的包绕程度和侵袭性联系。结果侵袭性PA的GSTP1表达显著高于非侵袭性PA(P0.05)。Spearman法分析PA向下扩展程度和侵袭性呈正相关(r=0.764,P=0.000)。累及鞍底的PA GSTP1表达水平较未累及鞍底者更高。肿瘤和颈内动脉连线关系对PA侵袭性判定有统计学意义(χ2=121.54,P=0.000)。侵袭性与非侵袭性PA颈内动脉包绕程度的差异有统计学意义(χ2=133.89,P=0.000)。累及海绵窦的GSTP1表达水平显著高于未累及海绵窦者(χ2=5.382,P=0.000)。结论侵袭性PA MRI与GSTP1之间具有较好的正相关联系,临床诊断可结合二者的征象及表达情况进行综合判定,最终获得最佳效果。     

中国汉族结核病患者 N-乙酰基转移酶2基因型与药物性肝损伤以及抗结核疗效的关系

目的：了解中国汉族结核病患者 N-乙酰基转移酶（NAT2）基因型与异烟肼引起的药物性肝损伤及与抗结核疗效的关系。方法初治结核病患者108例。采用 PCR 直接测序法对 NAT2基因7个单核苷酸多态性位点分析比对,判定 NAT2基因型。分析基因型与药物性肝损伤的关系,比较基因型与抗结核疗效的关系。统计学处理采用χ2检验。结果108例结核病患者中,中间代谢型59例（54．63％）,快代谢型36例（33．33％）,慢代谢型11例（10．19％）,超快代谢型2例（1．85％）。20例药物性肝损伤患者中快代谢型2例,慢代谢型5例,中间代谢型13例。快代谢型患者发生药物性肝损伤可能性较低（OR ＝0．176,95％CI ：0．038～0．809,P ＝0．014）,慢代谢型患者易发生药物性肝损伤（OR ＝4．556,95％CI ：1．231～16．854,P ＝0．044）。NAT2*4／*6A 基因型（OR ＝7．741,95％CI ：2．653～22．586,P ＜0．01）和 NAT2*6A／*6A 基因型（OR＝15．353,95％CI ：1．506～156．552,P ＝0．020）患者易发生药物性肝损伤,NAT2*4／*4型患者则不易发生药物性肝损伤（OR ＝0．176,95％CI ：0．038～0．809,P ＝0．014）。58例痰菌阳性的患者,治疗2个月后仍痰菌阳性12例,其中快代谢型患者8例,疗效差（OR＝7．200,95％CI ：1．794～28．900,P ＝0．008）。结论中国汉族结核病患者中 NAT2基因型以中间代谢型为主。NAT2慢代谢型发生药物性肝损伤的风险较高。NAT2*6A 为药物性肝损伤高风险等位基因,而 NAT2*4／*4则可能为保护性基因型。快代谢型患者早期的疗效较差。     

Gilbert综合征UGT1 A1基因突变特征及对肝脏和肝外系统的影响

Gilbert综合征是最常见的遗传性高胆红素血症,发病率较高。简述了Gilbert综合征的流行病学特征、常见的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1基因突变位点以及Gilbert综合征对肝脏本身及肝外疾病的影响进展,并认为这对Gilbert综合征的诊疗及某些肝脏及肝外疾病的防治具有重要意义。     

肝癌组织中三种糖基转移酶基因表达水平

一、资料与方法 １．标本：１３例正常肝组织来自尸检标本;１５例ＨＣＣ组织和１５例ＨＣＣ癌旁组织取自手术患者。 ２．方法：Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ｖ）、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ⅲ）、（１,６核心岩藻糖转移酶（α１－６ＦｕｃＴ）和β－肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）四种扩增基因引物由Ｐｒｉｍｅｒ３引物设计程序设计。以β－ａｃｔｉｎ为内标,采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测以上三种基因ｍＲＮＡ的表达情况。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ ＶＤＳ图像分析系统处理并…