肢体缺血预处理在未成熟心脏移植中的应用

背景：有学者提出远隔器官预处理概念,即在心脏以外的器官施行缺血预处理,同样能达到缺血预适应效果。肢体缺血预处理是一项机体自我调节的保护机制,但是对未成熟心肌保护的研究较少,在心脏移植方面的利用价值尚未明确。 目的：通过对未成熟幼犬进行肢体缺血预处理,与传统心脏保存方法比较,试图分析肢体缺血预处理在供体心脏保存中的应用价值。 方法：纳入未成熟幼犬12只,按随机数字表法分为2组,每组6只,采用有创性方法游离股动脉,肢体缺血预处理组夹闭股动脉10 min,开放5 min,3个循环后常规开胸,游离心脏,插灌注管,灌注st.Thomas停跳液,离体心脏于保护液中4 ℃保存(离体前取上腔静脉血3 mL)。对照组游离股动脉但不夹闭,余同实验组。在心脏保存时期(3 h)内每隔半小时取左心室心肌样本,3 h后取心尖部心肌烘干测得干湿比。测量心肌组织丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性及肌钙蛋白Ⅰ含量。 结果与结论：离体前心肌组织肌钙蛋白Ⅰ含量无明显变化(P > 0.05),离体后肢体缺血预处理组的心肌丙二醛含量及干湿比均低于对照组(P < 0.05),超氧化物歧化酶活性高于对照组(P < 0.05)。结果提示,肢体缺血预处理对未成熟心脏有明显的保护作用,在未成熟供体心脏离体前进行缺血预处理可以提高供体心脏的保存效果,降低心肌水肿。离体前肌钙蛋白Ⅰ含量无变化说明肢体缺血预处理对心肌没有损伤,是一种安全的保护措施。 关键词：肢体缺血预处理;未成熟心肌;心脏移植;心肌保护;犬     

犬黑皮质素受体3原核表达载体的构建与表达

背景：近年黑皮质素受体家族在体内能量平衡中的作用越来越受到重视。黑皮质素受体3基因突变是引起体质量增加的重要因素之一,但是目前对黑皮质素受体3的深入研究很少,且未见在蛋白水平上检测其表达的单克隆抗体。 目的：构建犬黑皮质素受体3基因编码区的原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。 方法：以Beagle犬基因组DNA为模板,设计特异性引物,经PCR技术扩增目的片段后,克隆到pMD18-T载体上,双酶切鉴定以后将目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E. coli DH5α,筛选阳性克隆,DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R转化到E. coli BL21内,经IPTG诱导后,利用Western blot检测犬黑皮质素受体3融合蛋白的表达。 结果及结论：成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R,经DNA测序证实插入序列与Genebank上公布的序列一致。此重组体经诱导后能在E. coli BL21内表达犬黑皮质素受体3融合蛋白,为进一步获取犬黑皮质素受体3的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究犬黑皮质素受体3蛋白的结构和生理功能提供帮助。     

犬颅脑爆震伤早期救治的实验研究

目的观察早期运用大剂量青霉素钠、甘露醇对颅脑爆震伤实验犬的救治效果。方法杂种雄性犬30只,使用简单随机化的方法将犬分为:对照组(6只)、外伤组(12只)及治疗组(12只),外伤组和治疗组制作成颅脑爆震伤模型,治疗组运用大剂量青霉素钠、甘露醇进行治疗,然后观察每一组犬的血浆内皮素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF)、谷丙转氨酶(ALT)、淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)水平,以及颅内压(ICP)、头颅CT表现、细菌定性培养结果和犬生存时间。结果与对照组相比,外伤组伤后6h血浆ET、TNF及伤后12h血浆ALT、AMY、BUN、CK、ICP水平均显著升高(P0.01),伤后24 和48h,治疗组的ET、TNF、ALTAMY、BUN和CK水平均明显低于外伤组(P0.05)。头颅CT检查示治疗组脑水肿明显轻于外伤组;伤后48h,治疗组血液细菌培养阳性率8.33%(1/12),显著低于外伤组的83.33%(10/12)(P0.01);治疗组的生存时间为(138.6±8.0)h,明显长于外伤组的(96.53.0)h(P0.01)。结论颅脑爆震伤后早期运用大剂量青霉素钠、甘露醇治疗可减轻机体感染,降低颅内压,减轻脑组织水肿及机体继发损伤,延长动物的生存时间。     

犬颅脑爆震伤后血液流变学变化实验研究

目的建立不同伤情颅脑爆震伤动物模型,探讨颅脑爆震伤后实验犬血液流变学变化。方法杂种雄性犬30只,随机分为：Ⅰ组（13mm,n=10）,Ⅱ组（9mm,n=10）及Ⅲ组（5mm,n=10）,用1gTNT当量的球型爆炸源置于距右颞顶部不同距离（13mm、9mm、5mm）对犬的颅脑部引爆致伤,制作轻、中、重型颅脑爆震伤动物模型,伤后0h、1h、6h、12h、24h抽血行全血粘度（ηb）、血浆粘度（ηp）、红细胞压积（HCT）、血小板、血沉（ESR）指标监测。结果犬爆震伤后,各组全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、血沉指标均出现升高,而血小板计数（PLT）下降,各组指标与伤前比较有显著性差异（P〈0．01）,重伤组与轻、中度伤组比较也有显著性变化（P〈0．05）。结论不同伤情的颅脑爆震伤模型均出现血液流变改变,且与伤情轻重密切相关。     

温度对犬肺灌注保存效果的影响

目的评价不同温度灌注和保存犬肺对肺保存效果的影响。方法将24只犬随机分为实验组和对照组两组,每组供、受体各6只。实验组以23℃低钾右旋糖酐(LPD)液灌注后切取右肺保存于10℃LPD液,对照组以4℃LPD液灌注后切取右肺保存于4℃LPD液,其后两组均行左肺移植术。比较两组供体肺组织不同时间段的髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量及湿/干重量比(W/D),比较两组受体犬移植前后不同时间肺血流动力学参数以及血气分析指标,并比较病理结果。结果与对照组相比,实验组肺组织灌注后各时间段的MPO活性、丙二醛含量及W/D较低(P0.05)。实验组受体犬移植后的肺毛细血管楔压(PCWP)、平均肺动脉压(MPAP)较低,动脉血氧分压(PaO2)较高,差异均有统计学意义(均为P(0.05)。病理学结果显示,实验组肺组织中性粒细胞浸润、肺泡水肿及损伤等病理变化较对照组减轻。结论在本实验条件下,与4℃灌注+4℃保存相比,23℃灌注+10℃保存的温度对犬肺具有较好的保存效果,更适用于实验肺移植。     

窦房结区甲醛湿敷法建立犬窦房结损伤模型

目的 探讨甲醛湿敷法建立犬窦房结损伤模犁的可行性和电生理特征变化.方法 20只实验犬按随机数字表法随机分为湿敷后2 h、4 h、1周及4周组(n=5).用20%甲醛湿敷窦房结区建立窦房结损伤模型.各组于湿敷前、湿敷后各自相对应时间点行电生理功能检测,同步记录体表心电图(electrocardiogram,ECG).结果 20只实验犬甲醛湿敷时间为3～12(6.2±2.6)min.5只犬甲醛湿敷后窦性心率(heart rate,HR)显著减慢[(140±11)、(89±6)次/min,P<0.01],无心律失常;4只犬除窦性心率明显减慢外出现窦性心律不齐、窦性停搏及频发房性早搏,但很快恢复为规整的窦性节律;11只犬予甲醛湿敷后P波消失,呈交界性逸搏心律,其中4只于湿敷后24 h行ECG监测时转为窦性心律,但HR仍显著低于湿敷前.湿敷后2 h、24 h、1周及4周组的HR均较甲醛湿敷前显著减慢(P<0.01);各组湿敷后的窦房结恢复时间(sinus node recovery time,SNRT)及校正的窦房结恢复时间(corrected sinus node recovery time,CSNRT)则均较湿敷前显著延长(P<0.01,P<0.05).结论 采用甲醛湿敷法可以成功建立犬窦房结损伤模型,其电生理改变与临床病态窦房结综合征表现相似.     

瑞芬太尼对实验犬心率的影响

目的探讨静脉注射不同剂量瑞芬太尼对实验犬心率的影响。方法选择实验犬30只,按静脉注射瑞芬太尼剂量不同分为6组,每组5只：A组（瑞芬太尼5μg/kg）、B组（瑞芬太尼10μg/kg）、C组（瑞芬太尼15μg/kg）、D组（瑞芬太尼30μg/kg）、E组（瑞芬太尼60μg/kg）、F组（瑞芬太尼90μg/kg）。全身麻醉后待有创动脉压（MAP）、心率（HR）相对稳定,给予瑞芬太尼静脉注射（注药时间〉1min）,观察6组犬HR、MAP及SpO2变化。结果各组犬注药后HR下降至最低数值与注药前比较,差异有显著性（P〈0.05或〈0.01）。MAP、SPO2变化各组比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论瑞芬太尼静脉注射对实验犬HR有明显影响,但HR下降呈自限性。     

高容量血液滤过对内毒素诱导犬急性肺损伤肺组织炎症介质的影响

目的探讨高容量血液滤过（HVHF）对内毒素诱导犬急性肺损伤（ALI）肺组织炎症介质的影响。方法选择健康杂种雄性犬16条,经中心静脉注入内毒素,建立急性肺损伤模型,成模后将16只犬随机分为对照组和治疗组,每组8只。对照组行机械通气治疗＋体外循环;治疗组行机械通气＋HVHF治疗。测定实验4h后2组肺组织上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）的水平。结果治疗组治疗4h后肺组织上清中TNF-α、IL-6、IL-10水平均较对照组下降（均P〈0.01）。结论HVHF能降低内毒素诱导ALI犬肺组织中TNF-α、IL-6、IL-10的水平,减轻肺内炎症反应,提示HVHF有望成为治疗ALI的新手段。     

犬细小病毒血凝的检测和血凝抑制试验方法的优化

目的 优化血凝和血凝抑制(nmm)试验条件,提高HA/HI试验的稳定性和准确性.方法 在不同的缓冲液、pH值、猪红细胞浓度、BSA浓度下进行HM/HI试验,选择合适的HM/HI条件.结果pH7.0、0.1%BSA、0.2 mol/L PBS、1%猪红细胞可作为HA/HI试验合适的反应条件,猪血球可保存12 d不影响试验结果.结论 方法 优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高.     

Beagle犬的基础数据

目的 检测不同性别年龄段Beagle犬的血液学和血生化指标,解剖称量分析8～12月龄Beagle犬脏器重量、系数等基础数据,为实验用Beagle犬的应用与研究提供参考数据.方法 采用HITACHI-7020自动生化分析仪和SWELAB-AC920EO血球自动分析仪,检测了3000多只次不同性别和年龄的健康Beagle犬的血液学和血生化数据;解剖128头Beagle犬,称量及计算正常Beagle犬各内脏器官重量及系数.结果 和结论获得正常Beagle犬的血液学RBC、HCT、MCV、RDW、HGB、MCH、MCHC、PLT、WBC、LYM、MID、GRA等指标正常值及标准差,血生化ALT、AST、ALP、TP、ALB、BUN、CREA、GLU、TCHO、TBILI、TG等指标正常值及标准差;获得Beagle犬心脏、肝脏、脾脏、肺脏、左右肾、脑、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、前列腺、子宫、卵巢等内脏器官的重量和系数正常值及标准差.