TGF-β1和IGF-1共同转染大鼠BMSCs向软骨细胞分化的实验研究

目的 探讨应用TGF-β1和IGF-1基因转染大鼠BMSCs后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路. 方法 6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150 g.扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1,酶切、电泳鉴定并测序.采用密度梯度离心法和贴壁分离法,分离、纯化Wistar大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代BMSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志.将TGF-β1和IGF-1基因单独或共转染第3代BMSCs,按转染情况分为5组未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染TGF-β1组(C组)、转染IGF-1组(D组)、TGF-β1与IGF-1共转染组(E组).对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Western blot法检测筛选后细胞的表达. 结果 电泳显示IGF-1和TGF-β1两目的基因条带,基因测序与Gene-Bank cDNA序列相符.大鼠BMSCs原代细胞接种24 h后可见少量贴壁突起细胞,4、5 d开始形成典型的BMSCs簇状增生,9、10 d细胞生长即可达80%～90%融合;传代后细胞形态较均一.免疫荧光法检测BMSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD45呈阴性反应.转染24 h后有少量细胞死亡,筛选3周后细胞克隆形成,至第4周细胞可传代,多数细胞变成多边形,部分细胞边界不清,呈圆形,核偏位,核周颗粒明显.MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490 nm波长处的吸光度(A)值,分别为0.432±0.038、0.428±0.041、0.664±0.086、0.655 ±0.045和0.833 ±0.103.A、B组与C、D、E组间差异均有统计学意义(P＜0.01),但A、B组以及C、D、E组间差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR和Westernblot检测目的基因和蛋白的表达量,TGF-β1表达以C组最多,分别为0.925 ±0.0220、124.341 7 ±2.982 0,E组次之,分别为0.771 7±0.012 0、101.766 7±1.241 0(P＜0.01);IGF-1表达以E组最多,分别为1.0200±0.026 0、128.171 7±9.152 0,D组次之,分别为0.465 0 ±0.042 0、111.045 0 ±6.248 0(P＜0.01);Ⅱ型胶原表达以E组最多,分别为0.980 0 ±0.034 0、120.355 0 ±12.550 0,C组次之,分别为0.720 0 ±0.026 0、72.246 7 ±7.364 0(P＜0.01). 结论 通过TGF-β1和IGF-1基因共同转染BMSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义.     

吲哚胺2,3-双加氧酶在移植免疫中的作用研究进展

目的总结吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）参与免疫调节的可能机制，以及在移植免疫过程中的作用。方法广泛查阅近年国内外相关文献，对IDO分布、免疫调节机制及其在移植免疫中的作用研究进展进行回顾总结与分析。结果IDO通过降解局部组织微环境中的色氨酸、抑制宿主同种异体T细胞增殖而发挥免疫调节作用。应用转基因技术将IDO基因整合至目的细胞基因中并表达IDO，体内试验表明可明显延长异体移植物的平均存活时间。结论IDO在移植免疫中有广阔的应用前景，为提高异体移植物术后长期存活率提供了新的思路。     

富血小板血浆及其在骨科领域的应用进展

目的介绍富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）及其在骨科领域的应用。方法查阅国内外近年来PRP制备、生理机制及其在骨科领域最新应用的文献，并进行回顾和综合分析。结果PRP具有促进组织愈合及促进骨再生等功能，缺点是缺乏标准的制备方法，PRP所含生长因子和蛋白质数量以及各种生长因子的相互作用机制仍不明确。临床应用前仍需建立可靠的动物模型和标准化的临床试验。结论PRP在骨科领域有着广泛的应用前景。     

β-防御素上皮组织天然的化学防御屏障

产生抗微生物肽 (antimicrobial peptide)是真核生物宿主防御的一个重要途径。防御素(defensins)是重要的一类抗微生物肽 ,包括四个亚家族 ,即植物防御素、昆虫防御素、α-防御素和β-防御素。其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织 ,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障 ,在组织烧伤等创伤感染中发挥重要作用。本文主要对β-防御素的结构、功能、分布和作为抗生素肽的应用前景进行综述     

β-防御素--上皮组织天然的化学防御屏障(文献综述)

产生抗微生物肽(antimicrobial peptide)是真核生物宿主防御的一个重要途径.防御素(defensins)是重要的一类抗微生物肽,包括四个亚家族,即植物防御素、昆虫防御素、α-防御素和β-防御素.其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障,在组织烧伤等创伤感染中发挥重要作用.本文主要对β-防御素的结构、功能、分布和作为抗生素肽的应用前景进行综述.     

鱼胶原肽保湿功能的比较研究

目的：通过体表和体外实验验证鱼胶原肽的保湿功能。方法：以0．3％透明质酸钠为阳性对照，通过体表试验比较鱼胶原肽和市场上销售的同类产品在相同条件下对皮肤水分含量的改善效果，以及比较鱼胶原肽体表改善皮肤含水率功效与其浓度的关系，同时通过体外试验比较鱼胶原肽和市场上销售的同类产品在相对湿度为85％、温度为20℃时放置若干时间内的失水率，以及鱼胶原肽体外失水率与其浓度的关系。结果：鱼胶原肽总体保湿效果优于市场上同类产品。结论：鱼胶原肽作为廉价的高品质保湿剂，拥有广阔的发展前景。     

自酸蚀封闭剂与玻璃离子联合用于托槽粘结的临床观察

目的：评价自酸蚀粘结剂与树脂加强型玻璃离子联合用于正畸托槽粘结的临床使用效果。方法：随机选择50名患者，采用自身对照的方法进行为期12个月的临床观察。385个托槽用自酸蚀封闭剂（3MESEP）和光固化树脂加强型玻璃离子水门汀（FUJI ORTHO LC）粘结，390个托槽用京津釉质粘结剂粘结。观察托槽脱落的时间和脱落后粘结剂在牙面上的残留量，计算托槽脱落率和粘结材料残留指教。结果：光固化树脂加强型玻璃离子水门汀和自酸蚀封闭剂粘结的托槽脱落率为10．1％；京津釉质粘结剂粘结的托槽脱落率为9．0％，两者差异没有统计学意义（P〉0．05）。两种材料粘结的托槽脱落后，牙釉质上的粘结材料残留指教差异无显著统计学意义（P〉0．05）。结论：自酸蚀封闭剂和树脂加强型玻璃离子所构成的粘结技术粘结正畸托槽的粘结强度，可以满足正畸治疗的需要，在临床上有广阔的应用前景。     

人arresten基因转染对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨体内转染arresten基因对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:建立大鼠自体静脉移植模型。血管吻合术前，用脂质体介导重组质粒pSecTag2-AT（Ⅰ组），空载体pSecTag2转染（Ⅱ组）移植血管，等体积脂质体溶液处理移植血管(空白对照组，Ⅲ组）。各组动物均于4周后切取移植血管，RT-PCR检测移植血管中arresten mRNA的表达；常规HE，Verhoeff弹力纤维染色；计算机图象分析检测移植静脉血管内膜及中膜面积、厚度；免疫组化检测移植血管内膜α-SMA及PCNA的表达；Western blot检测TGF-β1蛋白的表达。结果:Ⅰ组转染的移植静脉中有目的基因mRNA的表达, 而Ⅱ、Ⅲ组无Ⅰ组内膜、中膜面积小均于Ⅱ组和Ⅲ组，差异有显著性（P<0.05）。而内膜面积/中膜面积3组间无统计学差异（P>0.05）；Ⅰ组内膜厚度小于Ⅱ组和Ⅲ组，组间比较有统计学差异（P<0.01）；α-SMA染色表明增生内膜中的细胞是血管平滑肌细胞；PCNA阳性细胞数及表达指数Ⅰ组均低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）；Ⅰ组TGF-β1蛋白的表达明显低于Ⅱ组和Ⅲ组。结论:移植血管转染arresten基因，可有效抑制自体移植静脉内膜的增生，在防治血管移植术后再狭窄方面显示出良好的临床应用前景。     

张力带技术在骨科手术中的应用前景

近年来,随着骨科技术的不断进步及生物力学研究的不断发展,生物力学原理在骨科手术中的应用越来越多。张力带技术就是一个典型的利用生物力学原理固定骨折的方法,张力带技术是一个既古老而又崭新的技术,它充分应用生物力学原理解决了不同部位骨折固定难题,取得了良好的效果。笔者就张力带技术的固定原理,作用机制,特点,局限性及应用前景等方面进行分析,探讨张力带技术在骨科手术中的应用前景。     

背景噪声下言语测听

本文在对中枢听觉神经系统功能的解剖、生理及其检查开展的必要性进行略述后,提出语言的最基本、最主要的形式是“言语”.能否听懂言语,是判断听功能状态的最主要指标.通过对言语测听及背景噪声下言语测听的历史、现状进行概述后,对背景噪声下言语测听的影响因素及其作为听处理套查方法之一的临床应用前景、在中枢听处理障碍检查中的灵敏性进行展望.