应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位

目的 筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法 以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果 经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论 用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.     

糖皮质激素受体对大鼠中性粒细胞粘附的影响

本文通过Percoll梯度离心法分离获得大鼠中性粒细胞(PMNS)后,采用PMNS与玻璃珠粘附的模型,通过给予Dex及糖皮质激素受体(GR)阻断剂Mifepristone(RU_(38486))研究大鼠PMNS粘附过程中GR的作用。结果显示,Dex可以明显抑制PMNS的粘附,其作用随着Dex浓度的增大而增强;单纯给予不同浓度的RU_(38486)未发现明显的PMNS粘附增强,说明RU_(38486)本身对离体的PMNS粘附没有明显的作用;若同时给予Dex和RU_(38486),则Dex抑制PMNS粘附的作用逐渐减小,直至完全逆转。该结果强烈提示:糖皮质激素(GC)具有抑制PMNS粘附的作用,其作用是通过GR介导的,当GR被阻断时,这一抑制作用减弱,甚至消失。     

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜双向凝胶电泳图谱建立及差异分析

目的类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一个多基因多因素参与的病理过程。实验中通过建立与RA发病机制相似的胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠动物模型,运用蛋白质组技术对正常大鼠和CIA大鼠模型不同时间点滑膜组织的蛋白质点进行比较分析,为鉴定CIA大鼠滑膜病变相关蛋白质及研究RA发病机制奠定基础。方法用牛Ⅱ型胶原和完全福氏佐剂建立CIA大鼠模型,采用一步抽提法抽提滑膜蛋白质,运用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各组大鼠滑膜组织的总蛋白质,用PDquest软件分析图谱,比较差异蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flightmass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应肽质指纹图谱,用Mascot查询软件搜索数据库,鉴定部分差异蛋白质。结果成功建立了CIA大鼠模型,获得分辨率较高、重复性较好的大鼠滑膜组织双向电泳凝胶图谱。正常组与25、35和45天模型组大鼠滑膜组织凝胶图谱的平均蛋白质点数分别为1070±41、1049±22、1079±44和1088±39。在4个组均有表达差异的蛋白质点中随机取20个点进行肽质指纹图分析,鉴定了部分与细胞代谢、信号转导及结构相关的差异表达蛋白质。结论建立了分辨率较高且重复性较好的正常大鼠与CIA大鼠不同时间点滑膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了一些与CIA大鼠滑膜病变相关的差异表达蛋白质,为识别RA病变相关蛋白质及推断RA病变过程奠定基础。     

全反式维甲酸下调慢性阻塞性肺病患者NGAL、MMP-9/TIMP-1比率的研究

目的探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血中性粒细胞(PMN)中NGAL活性和血浆中MMP-9、TIMP-1与COPD病变的关系及体外ATRA干预后NGAL、MMP-9和TIMP-1的变化,以揭示ATRA逆转的作用机制。方法以30例COPD患者为实验组,20例发作期哮喘为阳性对照组,20例健康成年人为健康对照组,均进行肺功能检查,RT-PCR测定COPD组及哮喘组和健康对照组PMN中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定其血浆MMP-9和TIMP-1的表达水平。COPD组PMN分为ATRA组和未干预对照组,RT-PCR测定细胞沉淀中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定上清液中MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果COPD组和哮喘组血浆中MMP-9、NGAL水平和MMP-9/TIMP-1比例显著高于未干预对照组(P<0.05);TIMP-1水平显著低于未干预对照组(P<0.05)。COPD组与哮喘组间有统计学意义(P<0.05)。COPD组患者肺功能与MMP-9和NGAL成负相关,与TIMP-1成正相关。ATRA干预后,COPD患者中MMP-9、NGAL水平较前下降,TIMP-1较前上升,MMP-9/TIMP-1比例降低。结论COPD组NGAL、MMP-9和MMP-9/TIMP-1摩尔比例升高,TIMP-1降低;可作为COPD患者PMN活性的诊断依据。ATRA通过下调MMP-9、NGAL,上调TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,可能对肺气肿的治疗提供新的途径。     

粘附分子在缺血再灌注损伤中的作用

在多脏器（如心肌、小肠、脑等）缺血再灌注损伤中，粘附分子起着重要作用，它能调节缺血再灌注时中性粒细胞的浸润，应用粘附分子单抗能不同程度减轻白细胞的组织浸润和减轻缺血再灌注损伤。     

脊柱术后感染病原菌及CD64和中性粒细胞百分比的早期预测价值

目的分析脊柱术后医院感染患者病原菌分布特征及中性粒细胞64(CD64)和中性粒细胞百分比(NEU%)表达情况。方法选取2017年6月-2019年6月天津市天津医院收治的脊柱术后医院感染患者51例为感染组,并选取同期于医院就诊的脊柱术后未发生感染患者51例为未感染组。分析感染组患者病原菌情况,检测患者NEU和CD64水平;ROC曲线分析CD64和NEU%指标水平预测感染的诊断价值。结果 51例感染患者共培养分离病原菌78株,其中革兰阴性菌42株(53.85%)、革兰阳性菌33株(42.31%)、真菌3株(3.85%),以铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌为主。术后7 d,感染组体温、WBC、中性粒细胞计数、CRP、ESR分别为(38.47±0.52)℃、(8.34±2.17)×109/L、(5.98±1.94)×109/L、(54.52±19.93)mg/L、(51.74±21.88)mm/h均高于非感染组(P<0.05)。术后7 d,感染组CD64、NEU%分别为(8.87±2.13)%、(84.93±13.39)高于非感染组(P<0.05)。CD64指数与NEU%水平诊断ROC曲线下面积分别为0.922、0.826。结论脊柱术后医院感染以革兰阴性菌为主,CD64及NEU%水平有助于脊柱术后医院感染的早期诊断。     

改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶的应用

目的 寻求更加准确、简便、快速、实用的乳酸脱氢酶同工酶（LDH）测定方法。方法 据LDH同工酶等电点不同,选择琼脂糖胶作支持物,对以往LDH同工酶测定方法进行改进,将五型LDH同工酶进行分离并定量测定。结果 改进后的LDH同工酶测定方法稳定,区带清晰,重复性好,结果可靠,试剂可长期保存。结论 改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶应用前景良好。     

白细胞进入腹腔是引起蛋白质经腹腔丢失的关键

目的为了研究细菌性腹膜炎时经腹腔蛋白质丢失的机制,阐明白细胞移行与蛋白质丢失的关系。方法给兔腹腔内注射大肠杆菌(E.coil)4×106CFU+生理盐水(35ml/kg),做成急性腹膜炎动物模型。通过测定实验6或8h期间腹透液中白细胞总数(WBC)及中性粒细胞(PMNs)计数情况以及腹膜对蛋白质的通透性(蛋白质D/P比值)。设立了两个系列的实验系列一,应用氮介(mustine),1.2mg/kg,实验前3天静脉注射,以耗尽循环血中的白细胞;系列二,用单克隆抗体(mAb)60.32mg/kg,实验前5min静脉注射,以阻滞PMNs上的粘附分子CD18,从而抑制PMNs向腹腔移行。同时设立了阳性对照组(即腹膜炎组)及阴性对照组(无腹膜炎组)。结果系列一中mustine降低87%循环血中白细胞及93%循环血中PMNs,此时即使腹腔内注射细菌,白细胞向腹腔的移行及腹腔蛋白质的渗出均较未注射mustine的腹膜炎组明显降低,而与无腹膜炎的正常对照组结果相似。系列二,静脉注射mAb60.3同样也明显降低白细胞及PMNs向腹腔的移行及经腹腔蛋白质的丢失。结论急性细菌性腹膜炎时白细胞向腹腔移行导致了经腹腔蛋白质的丢失。     

赛强,格拉诺赛特与惠尔血治疗实体瘤化疗后中性粒细胞减少的疗效比较

目的：比较赛强,格拉诺赛特与惠尔血3种重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗实体瘤化疗后中性粒细胞减少的疗效。方法：对实体瘤化疗后白细胞减少病人用rhG-CSF来治疗,A组用国产药赛强,男性47例次,女性33例次,年龄(41±17)a。B组用进口药格拉诺赛特,男性48例,女性32例次,年龄(41±17)a。C组用进口药惠尔血,男性49例,女性31例次,年龄(41±17)a。剂量均为150～300μg,4次/d,10～14d为一个疗程。结果赛强、格拉诺赛特与惠尔血的总有效率分别为97.0%.98.5%,98.5%。中性粒细胞恢复正常所需要的时间分别为(7.2±3)d、(7±3)d及(7±3)d,感染发热的发生率(T>38℃),三组分别为19%、18%及18%,三组差异无显著意义(P>0.05)。结论：赛强,格拉诺赛特与惠尔血均能缩短化疗后的骨髓抑制期,促进中性粒细胞的恢复,减少严重感染的发生率,三者的疗效,安全性基本相似。但国产赛强价格低,更适合我国国情,从减轻病人的经济负担及为发展我国医药事业考虑,建议使用国产赛强。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质快速染色

聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳 ,这种凝胶由丙烯酰胺 ( acrylamide,Acr)和交联剂 N,N-叉基 (亚甲基 )双丙烯胺 ( N,N- methy/ ene- bis- acrylamide,Bis)聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗等特性。在盘状电泳过程中有 3种物理效应 :1样品的浓缩效应 ;2凝胶的分子筛效应 ;3一般电泳分离的电荷效应。由于这 3种物理效应 ,使样品分离效果好 ,分辨率高。如人血清用醋酸纤维膜电泳 ( p H8.6)可分成 5～ 7个成分 ,而用…