rhG-CSF联合低剂量TA/NA方案治疗急性髓系白血病疗效观察

目的观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合低剂量吡喃阿霉素 阿糖胞苷(THP Ara-C,TA)或米托蒽醌 阿糖胞苷(NVT Ara-C,NA)诱导缓解方案能否提高急性髓系白血病(AML)患者对化疗药物的敏感性并减低化疗药物的毒副反应。方法40例初治、复发的AML患者随机分为实验组和对照组,实验组21例采用rhG-CSF联合低剂量方案诱导化疗,对照组19例采用标准剂量的TA/NA方案诱导化疗。结果实验组与对照组完全缓解(CR)率分别为57.1%和52.6%,总有效率为80.9%和73.7%,2组间无差异(P>0.05);患者住院费用分别为(25623.10±19192.9)元和(29327±13771.2)元(P>0.05);住院时间分别为(29.43±13.67)天和(46.56±20.82)天,实验组住院时间较对照组缩短(P<0.05)。实验组较对照组化疗副反应相对较轻,中性粒细胞绝对值(ANC)>0.5×109/L的时间较对照组明显缩短,分别为(10.62±5.53)天和(18.68±11.53)天(P<0.05)。结论rhG-CSF联合低剂量TA/NA方案治疗AML的CR率和总有效率与标准剂量的化疗方案疗效相当,其毒副作用较轻,并可减少住院时间及缩短中性粒细胞的减低时间,而不增加住院费用。     

人PBMC和脐血CD34+细胞诱导DC2的实验方法研究

目的:探讨从人外周血单个核细胞(PBMC)和脐血CD34+造血干细胞(HSC)诱导DC2方法。方法:分别用rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)和rhFlt-3L(100ng/ml)+rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)诱导人PBMC和脐血CD34+HSC向DC2分化,并采用流式细胞仪分析细胞的表型,同时观察rhTNF-α和人CD40单抗诱导DC2分化成熟的作用。结果:rhG-CSFh+rhIL-3未能较好地从PBMC中诱导出DC2,但是从富集的脐血CD34+HSC用rhFlt-3L+rhIL-3+rhG-CSF诱导,可以获得相对较多的DC2,并有较高的扩增效率,但离临床研究和应用还有一定距离,因此DC2的诱导方法仍需进一步优化。人CD40单抗和rhTNF-α一样,能有效地诱导DC2分化成熟。结论:体外联合多种细胞因子从CD34+HSC成功地诱导出DC2,抗人CD40单抗有利于DC2的活化成熟。     

溶氧浓度对rhG-CSF工程菌高密度发酵的影响

目的确定rhG-CSF工程菌高密度发酵的最佳溶氧浓度。方法通过通入纯氧,高密度发酵的溶氧值可以精确控制。考察不同溶氧浓度对工程菌的生长、质粒丢失率、乙酸积累情况以及rhG-CSF表达的影响,来确定溶氧的最佳控制范围。结果工程菌生长阶段溶氧控制在25%,诱导后控制在35%,最有利于菌体生长和外源蛋白表达,最终菌体密度为(79.6±2.1)g/L,表达量为(40.2±1.2)%。结论溶氧对工程菌rhG-CSF高密度发酵有显著影响。     

rhG-CSF联合bFGF对缺血性脑卒中鼠神经功能及CD34,MAP-2表达的影响

目的:研究bFGF和rhG-CSF单独和联合应用对缺血性脑卒中模型鼠神经功能和神经分化特异性抗体CD34,MAP- 2表达的影响.方法:线栓法造模,bFGF组脑区注射bFGF,动员剂组rhG-CSF,联合组同做.分别于干预不同时段神经功能评价及脑区切片免疫荧光检测CD34,MAP-2表达.结果:处理早期,联用组及rhG...     

固相萃取-串联液质法测定重组人粒细胞刺激因子注射液中氨苄青霉素残留

目的:建立SPE-LC-MS/MS法测定重组人粒细胞刺激因子注射液中氨苄青霉素残留。方法:选择阿莫西林为内标,样品经过HLB固相萃取小柱净化,浓缩,有效地去除杂质。采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(甲酸调pH 3.1)为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM)。氨苄青霉素,内标监测离子对的m/z分别为350.0/106.1,350.0/192.0和366.0/114.0,366.0/208.0。结果:氨苄青霉素浓度在0.0442～3.5362μg.L-1范围内线性关系良好(r=0.9995),最低定量限为0.0442μg.L-1,方法回收率在101.1%～106.7%之间,批内,批间RSD分别小于5.8%及7.3%。结论:本方法准确可靠,重复性好,灵敏度高,适用于重组人粒细胞刺激因子注射液中氨苄青霉素残留检测。     

长效与常规干扰素治疗慢性乙型肝炎引起骨髓抑制的特点及其对疗效的影响

目的分析聚乙二醇干扰素α(Peg-IFN-α)与干扰素α(IFN-α)治疗慢性乙型肝炎(CHB)引起骨髓抑制的特点和差别、对抗病毒疗效的影响和两类干预药物的效果。方法 252例CHB患者分别给予Peg-IFN-α或IFN-α治疗48周,比较IFN应用过程中Peg-IFN-α治疗组和IFN-α治疗组白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)和血小板(PLT)的变化及差异;以IFN治疗24周内血细胞计数最低值将患者再分组,比较各亚组干扰素的疗效;比较口服升白细胞药物和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对干扰素所致Neu减少的疗效。结果 Peg-IFN-α治疗组引起骨髓抑制较IFN-α治疗组常见,两组WBC、PLT减少比率、Neu≤0.75×109/L比率差异有统计学意义(P<0.05);3.6×109/L>WBC≥2.5×109/L亚组较WBC≥3.6×109/L亚组有更高的HBeAg和HBVDNA阴转率(P<0.05),1.5×109/L>Neu≥0.75×109/L亚组较Neu≥1.5×109/L亚组有较高的HBeAg阴转率(P<0.05);与口服升白细胞药物相比,rhG-CSF对IFN引起的Neu减少疗效快速而短暂,二者升白细胞治疗1周和1月时的Neu计数及有效率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Peg-IFN-α引起骨髓抑制较IFN-α更为常见,白细胞下降幅度可一定程度预测IFN的疗效,rhG-CSF用于IFN治疗CHB引起的骨髓抑制的临床价值值得进一步探讨。     

两种rhG-CSF制剂用于自体外周造血干细胞移植的效果比较

目的探讨两种重组人粒细胞集落刺激因子吉赛欣(国产rhG-CSF)和惠尔血(进口rhG-CSF)在外周造血干细胞(PBSC)动员及移植后造血恢复中的效能差异。方法选择2000-01～2003-05在本院进行自体外周造血干细胞动员的47例血液肿瘤患者,随机分为两组,在化疗后白细胞降至最低点时分别接受国产rhG-CSF和进口rhG-CSF进行干细胞动员,比较rhG-CSF使用时间及采集所得CD34+细胞数量,其中接受干细胞回输的41例再随机分组,在预处理和干细胞回输后,外周WBC达到0×109/L时分别接受两种rhG-CSF促进造血恢复,比较外周血中性粒细胞绝对计数(ANC)恢复至≥1.5×109/L的天数及rhG-CSF使用时间。结果47例进行干细胞动员的患者中,24例应用进口rhG-CSF,23例应用国产rhG-CS,使用时间分别为6.17±2.64d和5.78±1.83d,所得采集物CD34+细胞总数分别为(5.90±5.06)×106/kg体重和(5.13±6.07)×106/kg体重,两者比较无显著性差异。41例接受自体干细胞回输的患者,22例应用进口rhG-CSF,19例应用国产rhG-CSF,使用时间分别为10.86±2.41d和10.83±4.75d,ANC恢复至≥1.5×109/L的时间分别为9.07±1.50d和10.00±4.20d,两者比较亦无显著性差异。结论两种rhG-CSF制剂在PBSC动员、PBSC回输后造血恢复等方面无明显差异,均可供临床上选择使用。     

基因工程菌发酵表达rhG-CSF的条件优化

目的通过优化基因工程菌Escherichia coli BL21（DE3）Plys表达重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCSF）蛋白的发酵工艺,提高蛋白产量。方法以100 L规模发酵为例,从不同的接种量（1%～10%）、加入IPTG进行诱导时的不同OD600nm值,诱导表达后的不同溶氧可控制范围（20%～80%）等方面进行优化。用SDS-PAGE对蛋白表达量进行检测。结果优化后的方案为：采用5%的接种量,在OD600nm达到10～15时加入诱导剂IPTG,诱导起始后前20 min控制溶氧在80%以下,20 min后通过补加氨水控制pH在7.0左右,补料调节控制溶氧在20%～40%的范围内,诱导表达5 h后收集菌体。优化后的发酵方案极大提高了蛋白表达量。结论 rhG-CSF蛋白发酵方案的优化对大规模生产具有重要的指导意义。     

rhSCF动员的外周血干细胞对7.0 Gy照射猴造血功能的影响

目的　观察经重组人干细胞因子 (rhSCF)或rhSCF 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG CSF)动员后外周血干细胞移植对 7 0Gyγ射线照射猴的治疗效果。方法　 15只猕猴分成照射对照、rhSCF和rhSCF rhG CSF 3组。rhSCF 5 0 μg·kg- 1 ·d- 1 每天 1次 ,连续 8d皮下注射 ;单独注射rhSCF 3d后每天 1次皮下注射rhG CSF 10 μg·kg- 1 ·d- 1 ,给药 5d ;照射对照组同时给予等体积的生理盐水。照射前 4h收集外周血干细胞 (PBSC) ,7 0Gyγ射线照射后 2～ 3h回输PBSC ,观察其造血恢复情况。结果　单纯rhSCF动员的PBSC可促进照射猴外周血白细胞和血小板数的恢复 ,但不如rhSCF rhG CSF联合动员组。单用rhSCF动员组各系集落数与照射对照组无明显差异 ,rhSCF rhG CSF组的照后 30d的CFU GM、CFU Mix和CFU MK数明显高于照射对照组。照射对照组骨髓病理切片主要为脂肪细胞 ,而另两组骨髓腔内都可见到丰富的造血细胞 ,三系造血活跃。结论　rhSCF和rhSCF rhG CSF动员的PBSC可促进 7 0Gyγ射线照射猴的造血功能恢复 ,两因子联用组的效果优于单因子组。     

Effect of Recombinant Human Granulocyte-Colony Stimulation Factor (rhG-CSF) on Immune System in Pediatric Patients with Aplastic Anemia

To determine the effect of recombinant human granulocyte-colony stimulation factor (rhG-CSF) on the immune system, serum immunoglobulins, lymphocyte subsets, and serum cytokines were analyzed in eight pediatric patients with atlastic anemia (AA) during 8-week rhG-CSF therapy. The rhG-CSF was administered either subcutaneously (200 μglm^' × 4 weeks, followed by 400 Fglm' × 4 weeks) or intravenously (400 μglm^' × 4 weeks, followed by 800 μg/m² × 4 weeks). In response to rhG-CSF therapy, neutrophil counts exceeded the pretreatment counts by twofold during the first week except for one case that did not attain twofold increase until day 41. While serum IgC and IgA were not affected, serum IgM was elevated during treatment in six of the eight cases to more than 1.2-fold basal levels (P < 0.04); however, there was no increase in serum interleukin (IL)-6 and interferon-y levels. On the other hand, CD56 positive NK cells significantly dropped from 7.7% to 4.5% (P < 0.02). These results indicate that systemic administration of rhG-CSF affects not only the neutrophil count, but also serum IgM levels and the natural killer cell population in patients with AA.