脑红蛋白在眼科的研究现状

脑红蛋白(neuroglobin,NGB)是继血红蛋白和肌红蛋白之后发现的第三类神经系统特异的携氧球蛋白,与氧有很高的亲和力,具有重要的神经保护功能.近来发现NGB在视网膜内的含量是大脑的100倍,高表达的NGB对眼部组织的缺血缺氧、氧化应激损伤有一定的保护作用,在眼科疾病的发生发展中亦具有重要的研究价值.本文主要针对NGB的眼内分布、神经保护机制及其在视网膜光化学损伤、糖尿病视网膜病变、青光眼等眼科疾病中发挥的作用进行综述.     

高原环境下兔眼球挫伤后视网膜脑红蛋白的表达调控研究

目的研究高原环境下兔眼球挫伤后视网膜脑红蛋白（NGB）的表达水平调控,探讨高原环境下眼球挫伤的损伤修复机制及救治。方法在高原环境用重击法造成2月龄健康北京青紫蓝兔眼球挫伤,随机分为吸氧组和非吸氧组,吸氧组动物模型在自制氧箱中以35％氧浓度每天持续给氧10h,于伤后12h、1d．3d,7d、14d分别摘取眼球,40g/L多聚甲醛固定．石蜡包埋切片,免疫组化检测NGB,比较吸氧组和非吸氧组NGB表达水平的不同。结果高原环境下兔眼球钝挫伤后吸氧组较非吸氧组NGB表达低,在3d和7d时差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高原环境下兔眼球挫伤后通过吸氧可调控视网膜NGB的表达水平,伤后1d内视网膜处于应激期,吸氧等措施可减轻应激损伤,1～14d吸氧可大大促进视网膜损伤修复。     

年龄因素对大鼠睾丸中脑红蛋白表达的影响

目的:探讨脑红蛋白(neuroglobin,NGB)在不同年龄段大鼠睾丸中的分布特征及表达差异。方法:随机选取3月、9月、15月龄SD雄性大鼠,每个年龄段各8只,处死后立即在无菌情况下取睾丸组织,免疫组织化学SP法观测NGB在大鼠睾丸中的定位,巢式PCR和Western blotting分析NGB mRNA和蛋白的表达差异。结果:免疫组织化学显示NGB在大鼠睾丸的间质细胞、精原细胞、各级精母细胞、支持细胞和精子细胞的胞质和胞核都有表达;巢式PCR检测表明9月龄组大鼠睾丸组织中NGB mRNA表达量最高,15月龄组表达次之,3月龄组表达量最低;而NGB蛋白表达与其mRNA相一致。结论:NGB在各年龄段大鼠睾丸组织中广泛表达,且年龄因素影响大鼠睾丸中脑红蛋白的表达。     

脑红蛋白在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征和急性脑梗死患者的表达及相关性研究

目的 探讨脑红蛋白(Ngb)在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)和急性脑梗死患者的表达及其因缺氧引发脑损伤的相关性.方法 采用酶联免疫吸附测定法检测经睡眠监测确诊的40例OSAHS组、16例健康对照组和16例急性脑梗死组患者血清Ngb水平.结果 OSAHS组和急性脑梗死组患者Ngb分别为(10.8±5.0)μg/L和(11.6±3.6)μg/L,比健康对照组(3.4±1.4)μg/L明显升高(均P<0.01),而OSAHS组和急性脑梗死组间Ngb含量差异无统计学意义(P>0.05).Ngb含量与呼吸暂停低通气指数(AHI)呈正相关(r=0.948,P<0.01),与最低血氧饱和度(LSaO2)呈负相关(r=-0.800,P<0.01),与睡眠时间百分比[CT90(%)]无明显相关性(r=-0.005,P>0.05).结论 OSAHS患者存在缺氧性脑损伤,Ngb可用于OSAHS缺氧性脑损伤的评估.     

新生儿缺氧缺血性脑病血清脑红蛋白水平与新生儿20项行为神经测定的相关性

目的:测定新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清脑红蛋白(NGB)的水平与新生儿20项行为神经测定进行相关性分析,防治脑缺氧、脑缺血。方法:选择HIE组44例,其中轻度22例,中度14例,重度8例;同期正常足月新生儿10名为对照组。分别于出生后3 h、3 d和7 d采集血清,酶联免疫吸附测定法检测NGB水平。于出生后1 d、7 d、14 d行新生儿20项行为神经测定(NBNA)评分。将血清NGB含量与NBNA评分作相关性分析。观察HIE组急性期、恢复期血清NGB及对照组血清NGB含量与NBNA评分之间的关系。结果:HIE中、重度组患儿急性期血清NGB水平均明显高于HIE轻度组和对照组(P0.01)。HIE组中、重度组患儿恢复期NGB有所下降,但仍高于对照组(P0.01)。HIE组血清NGB水平与NBNA评分呈负相关关系(P0.01)。结论:血清NGB水平在急性期与恢复期均与NBNA评分呈负相关。血清NGB水平作为早期评价HIE脑损伤程度及脑损伤恢复的指标有重要的临床意义。     

蕨麻对低压缺氧大鼠脑组织脑红蛋白表达的影响

[目的]建立大鼠高原低压缺氧模型,研究大鼠脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达及蕨麻乙醇提取物干预的影响。[方法]将50只健康成年雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组、低压缺氧模型组、蕨麻乙醇提取物0.9、1.8和3.6 g/kg组,每组10只。分别按0.9、1.8和3.6 g/kg剂量将蕨麻乙醇提取物溶于1 mL 0.3%羧甲基纤维素钠溶液。每天于固定时间(8∶00)灌胃给药1次,正常对照组、低压缺氧模型组同时给予等体积0.3%羧甲基纤维素钠。连续灌胃14 d。各组大鼠在最后1次灌胃后1 h置于低压缺氧舱在海拔7 000 m低压缺氧12 h。缺氧结束后,用免疫组织化学方法检测Ngb在脑组织中的表达定位,用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测皮质Ngb mRNA水平,用West-ern blot方法检测皮质Ngb表达量。[结果]低压缺氧模型组大鼠皮质Ngb蛋白免疫反应阳性细胞数增加,胞浆、胞核均可见棕黄色颗粒状免疫反应阳性产物,海马各区未见Ngb表达;脑皮质表达Ngb mRNA及蛋白水平较对照组明显升高(P<0.01);与模型组相比,蕨麻乙醇提取物3.6 g/kg组大鼠脑皮质中Ngb mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.01)。[结论]低压缺氧可刺激脑组织表达Ngb,蕨麻乙醇提取物在低压缺氧时可通过促进Ngb的表达,发挥脑保护作用。     

脑红蛋白-高原性眼疾诊治的新方向

高原是一特殊的地理环境,人类长期处于高原会对身体的各种需氧器官造成一定的损害.眼球也属于高需氧器官,高原环境不可避免的会引起各种各样的眼部疾患,而这些与第三类携氧蛋白-脑红蛋白又有着一定的关系.本文就现阶段高原眼疾的诊治及与脑红蛋白的关系作一综述.     

大鼠神经球蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的 克隆Wistar大鼠神经球蛋白(NGB)基因,通过原核表达制备其多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,测序证明该基因序列正确后,亚克隆人pET-28a( )载体中,通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确.转化大肠杆菌BL21菌株,获得可溶性表达产物,经鉴定、纯化后免疫新西兰兔,分离血清,ELISA法测定抗体效价.结果 神经球蛋白多克隆抗体效价达1:100 000,此多抗可以与293细胞内表达的重组蛋白发生很好的抗原抗体反应.结论 成功制备了兔抗NGB的多抗,为后续研究提供了重要的实验材料.     

成年大鼠视网膜中脑红蛋白表达的亚细胞分布

目的:电镜下观察正常成年大鼠视网膜中脑红蛋白(Ngb)的表达。方法:用电镜免疫金-银细胞化学法研究Ngb在成年大鼠视网膜中的亚细胞定位。结果:Ngb在视网膜除外核层和视锥视杆层的外节段以外的其它各层均有分布。在细胞层Ngb定位于细胞的胞质内,线粒体周围多见,内质网和高尔基复合体的管腔外侧也可见Ngb阳性着色;在丛状层Ngb分布于突触前成分的突触小泡之间。结论:Ngb的特殊亚细胞分布提示其与神经元供氧的紧密关系。