大鼠及人肝枯否细胞的分离纯化和培养

目的 改进大鼠肝枯否细胞分离、纯化和培养技术,探讨从人体肝脏手术标本中分离、纯化和培养枯否细胞的可行有效方法.方法 32只SD大鼠肝脏及9例人体肝脏手术标本用于本实验.大鼠肝脏经门静脉、人体肝组织通过肝静脉灌注预灌流液,灌注后肝脏标本采用离体胶原酶灌注消化获得细胞悬液,差速离心获得富含KC的肝非实质细胞.改传统PBS重悬肝非实质细胞为25%percoll重悬,形成新percoll梯度由上向下为:PBS、含肝非实质细胞的25%percoll、50%percoll,不连续密度梯度离心分离获得枯否细胞,最后选择性贴壁进一步纯化.应用吞噬功能实验对KC进行鉴定,台盼蓝拒染实验判定细胞活力.结果 最终获得的枯否细胞的产量分别为:大鼠3.1±0.5×106/g肝脏,人体肝脏组织为2.3±0.4×106/g肝脏,细胞活力和纯度均达90%.结论 本实验建立的大鼠及人体肝脏枯否细胞分离方法,简便经济,效果稳定,获得的枯否细胞可用于进一步的实验研究.     

片仔癀对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 观察片仔癀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 用MTT法检潮片仔癀对HUVEC增殖的影响,用划痕损伤实验观察片仔癀对HUVEC的迁移的影响.结果 片仔癀干预6、12、24、48 h后,与空白对照组比较,各剂量组抑制HUVEC的增殖能力(P＜0.01),且有剂量和时间依赖;片仔...     

产后抑郁与初乳中转化生长因子-β水平的关系：90例巢氏队列研究

目的 探究产后抑郁（PPD）与初乳转化生长因子-β（TGF-β）水平的关系。方法 于2020年12月~2021年9月在广东省某家三级综合医院建立的母婴队列中招募产妇。产后第2天下午，采用爱丁堡产后抑郁量表（EPDS）对产妇进行筛查，评分≥10分者为产后抑郁产妇（PPD暴露组），并按1∶1配比（年龄±5岁、分娩方式相同）正常产妇（PPD非暴露组）。产后第3天上午，采集初乳标本并采用酶联免疫法测定其TGF-β水平。分析比较两组产妇初乳TGF-β水平，并探究其与EPDS评分的相关性。结果 共招募90例产妇。PPD 暴露组产妇初乳TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3的水平分别为 684.03（321.22，859.25）pg/mL，（5116.50±1747.04）pg/mL及（147.84±48.68）pg/mL；而PPD非暴露组产妇初乳TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3的水平分别为745.67（596.00，964.22）pg/mL，（4912.40±1516.80）pg/mL及（168.21±48.15）pg/mL。PPD暴露组产妇初乳TGF-β1（P=0.026）和TGF-β3（P= 0.049）水平显著低于正常产妇。Spearman相关分析显示初乳TGF-β1（r=-0.23，P=0.03）及TGF-β3（r=-0.25，P=0.02）水平与EPDS评分呈负相关。结论 初乳TGF-β1和TGF-β3水平降低与PPD有关，提示我们应加强孕产期PPD的早期筛查与早期干预，降低其对母乳成分的影响，从而促进婴幼儿健康发育。     

基于肿瘤基因组图谱数据库探索性筛选潜在泛癌生物标志物

目的: 基于肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库筛选潜在泛癌生物标志物,为多种肿瘤的诊断和预后评估提供帮助。方法: 利用“GDC Data Transfer Tool”和“GDCRNATools”软件包获取TCGA数据库,完成数据整理,将13种肿瘤纳入研究。以错误发现率(false discovery rate, FDR) <0.05且差异倍数(fold change, FC) >1.5作为差异表达标准,筛选在13种肿瘤中均上调或均下调的基因和微小RNA(microRNAs,miRNAs)。利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC曲线)的曲线下面积(area under the curve, AUC)、最佳截断值及对应的灵敏度和特异度反映诊断价值。利用Kaplan-Meier法计算生存概率后进行对数秩(log-rank)检验并计算风险比(hazard ratio, HR)反映预后评估价值。利用DAVID工具对差异表达基因进行GO (Gene Ontology)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析。利用STRING和TargetScan工具对差异表达基因和miRNAs进行调控网络分析。结果: 共发现48个基因和2个miRNAs在13种肿瘤中均差异表达,其中25个基因均表达上调,23个基因和2个miRNAs均表达下调。多数差异表达基因和miRNAs区分病例和对照的能力较好,AUC、灵敏度和特异度可达0.8~0.9。生存分析结果显示,差异表达基因和miRNAs与多种肿瘤患者的生存显著相关,且多数上调基因是患者生存的危险因素(HR>1),而多数下调基因是患者生存的保护因素(0<HR<1)。GO和KEGG富集分析显示,差异表达基因多富集于与细胞增殖有关的生物学事件。在调控网络分析中,共13个基因和2个miRNAs存在调控和相互作用关系。结论: 在13种肿瘤中均差异表达的48个基因和2个miRNAs可能作为潜在泛癌生物标志物,为多种肿瘤的诊断和预后评估提供帮助,并为发展肿瘤治疗的广谱靶点提供线索。     

中国北方汉族人群HLA-DRB1单核苷酸多态性与脑血管病的关系

目的：研究北方汉族人群脑血管病与HLA-DRB1单核苷酸多态性的遗传关联性,为脑血管病的免疫遗传学研究奠定基础。方法：采用病例对照研究方法,收集160例脑血管病患者和139例健康对照。根据知情同意原则对每例受检者进行身高、体质量、腰围(WC)、腹围(AC)、体质量指数(BMI)等一般指标测量,采集空腹静脉血,检测血白蛋...     

糖尿病基因治疗的实验研究Ⅰ.人胰岛素基因真核细胞表达质粒的构建

为有效开展糖尿病基因治疗，作为第一步，本研究构建了人胰岛素原基因与表达载体PRC／CMV的重组体。首先，从质粒PBCA中酶切回收260bp的人胰岛素原基因片段，利用中间载体PBS．SK构建了含人胰岛素原基困片段的过渡质粒PBS．INS，在此基础上构建了真核细胞表达的人胰岛素基因重组体PRC／CMV．INS。     

hTERT基因永生化人毛乳头细胞系的转化特征

目的 探讨hTERT基因永生化人毛乳头细胞系是否具有转化特征.方法 采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.应用RT-PCR 法检测 hTERT mRNA 的表达.采用细胞形态学观察、染色体核型分析、软琼脂克隆形成实验和裸鼠致瘤实验分析转染细胞是否具有转化特征.结果 转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,现已连续传至50代.检测证实转染细胞稳定表达hTERT mRNA,细胞形态与未转染细胞基本相同,染色体核型正常,在软琼脂内不能生长,无裸鼠致瘤性.结论 hTERT基因永生化人毛乳头细胞系基本上是正常细胞而无明显转化特征.     

HE4在卵巢癌诊断中的价值

目的探讨作为卵巢癌标记物的血清人附睾蛋白4（HE4）在卵巢癌诊断过程中的作用。方法选择100例EOC患者、45例卵巢非癌症患者、65例其他肿瘤患者及100名健康对照者血清作为实验样本,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定HE4浓度水平。结果EOC患者血清HE4水平显著高于健康组和卵巢非癌症患者;以健康对照组的P95（percent95）值为参考值,月经正常者HE4检测的Cut-off值为58．2pmol／L,灵敏度57．5％,特异度93.9％;月经消失者HE4检测的Cut-0fr值为67.6pmol／L,灵敏度80．3％,特异度86．4％。卵巢癌患者血清HE4浓度随着肿瘤的发生发展而不断升高,淋巴结未转移者HE4水平明显低于转移患者。同时对28例EOC患者的血清样本进行了检测,HE4浓度的变化与疾病的发展趋势有着非常密切的关系;HE4浓度变化与病情发展吻合率达到82．2％（23／28）。治疗后,患者HE4水平显著下降（21／25）。结论HE4检测在EOC诊断及治疗方面具有较好的临床应用前景。     

晚期血吸虫病血清补体水平的检测及其临床意义

对136例晚血患者进行了血清补体水平的检测。结果发现:血清C_3、C_4、BF 均降低,而IgGco、IgAco、C_3co 增高,提示晚血患者有补体经典和替代途径的激活。而多数患者Ig 高于正常人,尤以IgG 与IgA 为显著(P<0.01～0.05),81%患者SK-SD 呈阴性反应,提示晚血患者非特异性细胞免疫功能减退,B 细胞功能活跃。作者认为给晚血患者适当使用免疫促进剂和肠道清洁剂对纠正免疫紊乱、减少补体激活可能有所裨益。     

人胚胎胃肠及胰腺D细胞发生的研究

用免疫细胞化学方法研究人胚胎各时期胃肠胰的Ｄ细胞发生及其形态与功能的关系。结果发现：Ｄ细胞最早出现于６周零５天胚的十二指肠，７周零３天胚的胰、胃、空肠，７周零６天胚的回肠，８周零４天胎的结肠及１０周零５天胎的阑尾；细胞密度在胚期低，胎期逐增，至胎晚期又依次在胰、胃窦、十二指肠、胃体、空肠、回肠、升结肠及阑尾中降低，且肠绒毛顶端可见衰老的Ｄ细胞。提示胚胎Ｄ细胞的发生与胃肠胰的发育有关。