探针ASPCR检测肺炎支原体 微量耐药突变A2063G方法的建立

[摘要]　目的　 建立能够特异性检测微量肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR（probe-based allele-specific real-time PCR, 探针ASPCR）方法。方法?建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果?特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型（2063A）模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1％;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01％。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%（55/58）,高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果（75.86%,44/58）;探针ASPCR和染料ASPCR 2种方法检测MP耐药率分别为63.64%（35/55）、70.91%（39/55）,高于传统巣式PCR联合测序方法检测结果59.09%（26/44）。结论?新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。     

广州市儿童和青年新型冠状病毒Delta变异株感染患者临床特征

 目的 探讨儿童和青年新型冠状病毒（SARS-CoV-2） Delta变异株患者的临床特征。方法 选取广州医科大学附属市八医院2021年5月21日—6月18日收治的SARS-CoV-2 Delta突变株感染者,根据年龄分为儿童组（2~14岁）和青年组（15~35岁）,比较两组患者临床、实验室指标及影像学的差异。结果 儿童组21例,青年组24例,两组均无重症患者。儿童以家庭聚集性发病为特征,青年组普通型比儿童组更常见（66.7% VS 33.3%,P<0.05）。与青年组临床表现比较,儿童组咳嗽（33.3% VS 87.5%）、咳痰（33.3% VS 66.7%）和咽喉不适（28.6% VS 70.8%）少见（均P<0.05）,儿童发热时间更短（2.5 d VS 4 d,P<0.05）,但两组患者发热（76.2% VS 83.3%）差异无统计学意义。与青年组生化学指标比较,基线时儿童组C-反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A （SAA）和白介素-6（IL-6）更低（均P<0.05）,但淋巴细胞（LYM）、嗜酸性粒细胞（EOS）、乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）更高;第1周儿童组CRP和SAA更低,但LYM、EOS、LDH和CK-MB更高（均P<0.05）。儿童基线CK-MB和LDH升高更常见（均P<0.05）。儿童组基线时LYM减少5例（23.8%）,EOS减少3例（14.3%）,第1周LYM和EOS均恢复正常。胸部CT显示儿童组7例（33.3%）肺部感染,单侧受累为主;青年组16例（66.7%）肺部感染,双肺受累为主。儿童组SARS-CoV-2核酸转阴时间中位日数为17（12,25） d,青年组核酸转阴时间中位日数为19（15,21） d,两组患者均预后良好。结论 儿童SARS-CoV-2 Delta变异株感染以家庭聚集性发病为主要特征。与青年患者比较,儿童患者呼吸道症状、炎症反应、免疫细胞和肺损伤更轻,免疫细胞恢复更快。儿童患者基线CK-MB和LDH升高更常见,需关注急性心肌损伤的可能性。青年和儿童患者SARS-CoV-2核酸转阴时间长,需延长监测上呼吸道核酸的时间。     

神经外科ICU疑似耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌医院感染暴发调查与控制

目的对神经外科重症监护病房(ICU)一起疑似耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)医院感染暴发进行调查和控制,为多药耐药菌医院感染预防与控制提供参考。方法对2019年5月-6月华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科ICU的6例CRKP感染患者进行流行病学调查和环境卫生学监测,并采取针对性防控策略。结果共发生CRKP医院感染6例;其中5例的住院时间和床位存在重叠或相邻;6例患者的保洁人员为同一人;环境卫生学监测显示CRKP检出率为3.13%(2/64),分别从呼吸机和保洁人员手检出;患者检出的6株CRKP菌株和环境检出的2株CRKP菌株药敏结果基本一致。采取改进环境清洁消毒流程、严格执行手卫生、加强科室人员管理和全员医院感染防控培训及督导等针对性防控策略后,此次事件得到有效控制。结论神经外科ICU内环境清洁消毒不彻底以及医务人员手卫生执行不到位是导致此次疑似CRKP医院感染暴发的主要原因。及时识别并调查原因,采取针对性防控策略是有效控制医院感染暴发的关键。     

儿童哮喘血清胱抑素C和体液免疫功能指标变化及其与肺炎支原体感染的相关性研究

目的 探究哮喘儿童血清胱抑素C(CysC)、体液免疫功能指标变化及其与肺炎支原体(MP)感染的相关性,为哮喘的治疗提供依据。 方法 以2017年9月—2020年6月在苏州市第九人民医院和吴江区儿童医院治疗的哮喘儿童95例为研究组,并以同期健康体检儿童63例为对照组。比较两组血清CysC水平、体液免疫功能指标[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)]及MP感染率;将哮喘患儿分为重症组及轻症组,比较血清CysC水平、体液免疫功能指标及MP感染率,分析MP感染与CysC水平、体液免疫功能指标的相关性,并分析各指标及联合检测对哮喘严重程度的评估价值;检测所有受试者的肺功能指标,根据MP感染情况将哮喘患儿分为MP感染组及未感染组,比较两组及对照组的肺功能指标。 结果 研究组CysC、IgM水平及MP感染率高于对照组(t=9.942、2.880,χ² =10.914,P<0.05),研究组IgA、IgG水平低于对照组(t=10.289、7.968,P<0.05);患儿CysC、IgM水平与MP感染呈正相关(r=0.170、0.183,P<0.05),IgG水平与MP感染呈负相关(r=-0.254,P<0.05);重症组CysC、IgM水平及MP感染率高于轻症组(t=3.695、2.090,χ²=18.459,P<0.05),IgA、IgG水平低于轻症组(t=3.016、3.192,P<0.05),血清CysC水平、IgA、IgG、IgM水平及MP感染联合检测对哮喘严重程度的AUC高于单独检测(Z=2.018、2.899、2.068、3.094、2.799,P<0.05);MP感染组用力肺活量(FVC)、第1秒最大呼气量(FEV₁)、FEV₁/FVC值小于未感染组(t=2.437、2.597、2.261,P<0.05)。 结论 哮喘患儿存在血清CysC水平及体液免疫功能异常的现象,并且血清CysC水平、体液免疫功能指标及MP感染联合检测对哮喘严重程度具有诊断价值。     

内膜转运蛋白编码基因PEG-344在肺炎克雷伯菌毒力鉴别中的应用

 目的 评估新型标志物PEG-344在高毒力肺炎克雷伯菌以及经典肺炎克雷伯菌毒力鉴别中的应用价值。方法 收集2020—2021年某院血流感染患者血标本分离的肺炎克雷伯菌,采用大蜡螟毒力试验结果作为金标准进行分组,将菌株分为高毒力组和经典组;进一步进行黏液丝试验、wzi基因测序和毒力基因检测_p(rmpA、_prmpA2、PEG-1631、PEG-589、PEG-344)。结果 共收集肺炎克雷伯菌36株,根据大蜡螟毒力试验结果将其分为高毒力组16株,经典组20株;高毒力组黏液丝阳性菌株占87.50%(14株),经典组黏液丝阳性菌株占15.00%(3株);毒力基因PEG-344检测的灵敏度、特异度高于经典的独立标志物_prmpA、_prmpA2。除1株经典组wxwh3(wzi-2)菌株PEG-344阳性以外,其余菌株PEG-344结果与毒力分组完全一致。结论 内膜转运蛋白编码基因PEG-344能更准确地鉴别高毒力菌株,及时提醒临床合理用药,为临床医生优化诊疗方案提供依据。     

应用MALDI-TOF MS快速鉴定blaKPC-2基因型肺炎克雷伯菌

 目的 探讨基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对携带bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌的快速鉴定能力。方法 收集2018年9月-2020年11月蚌埠医学院第一附属医院临床住院患者分离的肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法进行药敏试验。应用聚合酶链反应(PCR)方法筛选携带bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌。MALDI-TOF MS鉴定菌株并收集携带bla_KPC-2基因型和碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)的质谱图,各自选取其中70株菌株图谱,建立携带bla_KPC-2基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra)。采用超级图库鉴定除建库以外的肺炎克雷伯菌,根据耐药表型和PCR结果,判断鉴定结果是否准确。结果 共收集295株肺炎克雷伯菌,经耐药表型筛选耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)143株和CSKP 152株。CRKP中鉴定出140株携带碳青霉烯酶基因(134株检出bla_KPC-2基因,3株检出bla_KPC-18基因,2株检出bla_NDM-1基因,1株检出bla_IMP基因),3株不携带碳青霉烯酶基因;其中2株同时检出bla_KPC-2基因和bla_NDM-1基因。根据建库要求,建立携带bla_KPC-2基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra);设置error值<0.5,二者重合率达80%;对比图发现,4 154.4、8 310.7、10 880.8、3 579、10 079.3 m/z五个峰可作为区分携带bla_KPC-2基因肺炎克雷伯菌和CSKP的特征峰。选取除建库以外的155株肺炎克雷伯菌进行验证,准确率为92.90%(144/155);其中携带bla_KPC-2基因肺炎克雷伯菌准确率为94.52%(69/73),CSKP准确率为91.46%(75/82)。结论 通过MALDI-TOF MS建立Super-Spectra,可快速预测bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌,为临床CRKP感染的诊疗及医院感染防控提供可靠的实验室依据。     

沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究

目的：根据肺炎支原体（MP）P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株,调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法：多聚酶链反应扩增MP FH标准株和MP临床分离株的P1基因片段,扩增产物用限制性内切酶HeaⅢ消化,1.5％琼脂糖凝胶电泳分析。结果：肺炎支牟体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论：沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌产酶耐药机制及同源性分析

目的探讨肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要产酶机制及同源性。方法收集长沙市第一医院2016年12月-2017年12月临床分离的非重复碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,聚合酶链反应(PCR)法检测常见耐药编码基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析同源性。结果共收集到57株CRKP,mCIM试验阳性率为91.23%(52/57)。PCR共检出6种耐药基因,包括blaSHV、blaCTX-M-9群、blaKPC-2、blaTEM、blaCTX-M-1群和blaNDM-1,检出率分别为94.74%、68.42%、68.42%、56.14%、3.51%和1.75%,其中2株携带blaCTX-M-1群的菌株经测序证实为blaCTX-M-80和blaCTX-M-123,blaCTX-M-9群中1株为blaCTX-M-27,2株为blaCTX-M-14,其余均为blaCTX-M-65。PFGE结果显示,57株CRKP可分为A~H共8种不同的型别,以A型为主,占76.79%,其中A6亚型占32.56%。MLST结果显示,共检出ST11和ST29两种型别,以ST11为主,占75.00%。结论该院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制为产KPC-2型碳青霉烯酶,且同时携带多种超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。PFGE和MLST结果表明:该院临床分离的CRKP存在克隆传播,需加强流行病学监控。     

Evaluation of effectiveness,safety and cost-benefit of the 23– valent pneumococcal capsular polysaccharide vaccine for HIV-Infected patients

IntroductionDue to the lack of understanding of the protective effects and safety of 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine (PPV23) in immune-deficient populations, the vaccination rate of PPV23 among HIV-infected patients is still very low in China. The main objectives of this study were to determine whether the efforts to assess measures for the prevention of pneumococcal pneumonia are still worthwhile, and provide designated vaccination program of HIV-infected persons for government policy based on.Methods60 HIV-infected adults in Lanshan county who had never been vaccinated with any pneumococcal vaccine were enrolled in this study, voluntary vaccination of PPV23 and One-year follow-up after vaccination can be completed.Result76.67% patients (46/60) had serologic response at 12 months after vaccine, CD4 count(≤500 cells/ul or > 500 cells/ul) and Month from diagnosis to first antiviral therapy (≤1 month or > 1 month) were related to antibody responses (p < 0.05).In this study, PPV23 was well tolerated, no adverse reaction was reported.11 Streptococcus pneumoniae pneumonia (9.17%,11/120) occurred in the Unvaccinated group and 1 case(1.67%,1/60)in the vaccination group within one year after vaccination(Fisher's exact probability, P = 0.225). The VE was 81.79%. The per capita benefit was 39.32 dollars, the benefit-cost ratio = 1.19. There are significant statistical differences between the vaccinated group and the non-vaccinated group in outpatient costs (p < 0.05, 95 %CI: 9.29–32.11), Medicine costs (p = 0.017, 95 %CI: 2.47–24.44), and disease related indirect costs (p = 0.038, 95 %CI: 0.93–33.63) within one year of vaccination.ConclusionOur study results showed that PPV23 can be safely and effectively administered to HIV-1 infected individuals and effectively preventing Streptococcal pneumonia. Considering the cost-benefit of vaccination among HIV-infected persons, as it has been reported in our study, it is necessary to promote the widespread use of the vaccine among HIV-infected persons in the future.     

Epidemiology and virulence gene expression of intracellular group A streptococci in tonsils of recurrently infected adults

Intracellularly persistent group A streptococci (GAS, Streptococcus pyogenes) have been associated with recurrent tonsillopharyngitis and antibiotic treatment failure. As a supplementation of the published in vitro data, conventional bacteriology and molecular epidemiology was performed on material from 29 adult patients of a German army hospital with anamnestic signs of recurrent tonsillopharyngitis. Pre-surgery tonsil swabs and the surgically removed tonsils were examined with respect to growth of aerobic bacteria in absence and presence of antibiotics with exclusively extracellular activity. Under such antibiotic selection, Staphylococcus aureus and GAS were cultured from specimens of 13 and 3 patients, respectively. In every material GAS-positive by culture methods, the intracellular location of the penicillin-susceptible GAS isolates was confirmed by immunohistologic examination of tonsillar sections using a GAS-specific IgG antibody. The three intracellular GAS isolates were typed by emm gene sequencing and could be associated to types M6 and M49 (two isolates). The bacteria were serially passaged on sheep blood agar, and semiquantitative mRNA analysis from virulence genes was performed using bacteria of the 4th and 25th passage after isolation. An M-type-specific pattern of virulence gene expression and different gene expression levels in relation to the passage number were observed.