荧光猝灭法快速测定芦荟大黄素血浆蛋白结合率的研究

目的:建立荧光猝灭法快速测定芦荟大黄素血浆蛋白结合率的理论和实验方法学。方法:在模拟人体生理条件下,以牛血清白蛋白(BSA)为荧光剂,芦荟大黄素为荧光猝灭剂,研究激发波长280nm下的荧光光谱。结果:芦荟大黄素和BSA的荧光猝灭是静态猝灭过程,其结合常数K30℃=6.024×104 L.mol-1和K37℃=5.104×104 L.mol-1;结合分子数n30℃=0.9776和n37℃=1.0548;相互作用力主要是静电作用;同时建立了预测血浆蛋白结合率的理论模型,并根据实验数据分析了芦荟大黄素浓度与BSA浓度动态变化时药物血浆蛋白结合率的全程规律。结论:不同蛋白质浓度与药物浓度条件下血浆蛋白结合率处于动态变化中,血浆蛋白结合率随药物浓度的增大而减少。     

Suppression of C-myc expression associates with anti-proliferation of aloe-emodin on gastric cancer cells

Aloe-emodin is a hydroxyanthraquinone found in Aloe vera, as well as in leaves and roots of other plants. The mechanisms of its anticancer effect are largely unknown. The present study investigated its molecular mechanisms. Crystal violet assay showed that aloe-emodin had a long-term anti-proliferation effect on human gastric cancer MGC-803 and SGC-7901 cells. Scratch wound-healing motility assays indicated its anti-migration effect. Aloe-emodin arrested SGC-7901 cells at G2/M phase. More importantly, aloe-emodin inhibited the expressions of protein kinase C and c-myc. In conclusion, the anticancer effect of aloe-emodin on gastric cancer cells involves suppression of c-myc expression.     

双波长标准加入法同时测定芦荟大黄素甙和芦荟大黄素

应用双波长标准加入分光光度法同时测定芦荟中芦荟大黄素甙和 芦荟大黄素的含量。根据两种物质的吸收光谱,选择芦荟大黄素甙为标准加入组分,在芦荟大黄素的等吸收波长361.4nm和480.9nm处进行标准加入测定。芦荟大黄素甙和芦荟大黄素 浓度在0～1×10-4mol·L-1范围内均符合比尔定律。对库拉索芦荟中芦荟大黄 素甙和芦荟大黄素含量测定的相对标准偏差(n＝6)小于2%。     

HPLC同时测定小承气汤中4个化学成分

目的:建立小承气汤中肉桂酸、大黄酸、芦荟大黄素和川陈皮素的HPLC同时测定方法。方法:采用Apollo C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈和0.011%冰乙酸溶液,梯度洗脱,时间25min,流速1mL/min,检测波长为254nm。结果:肉桂酸、大黄酸、芦荟大黄素和川陈皮素的线性范围分别为0.08-0.47、0.58-2.02、0.19-0.37和0.02-1.39μg,精密度为0.44%、0.17%、0.52%和0.33%,平均回收率分别为97.3%、99.1%、99.3%和100.5%。结论:建立的方法简便、灵敏、准确,可用于小承气汤的质量控制。     

芦荟大黄素的提取分离与含量测定

目的:建立芦荟大黄素的提取方法及含量测定方法.方法:采川葡聚糖凝胶分子筛及重结品的方法对芦荟中芦荟大黄素进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构,并建立其薄层色谱(TLC)定性鉴别及高效液相色谱含量测定方法.结果:从芦荟中分离并鉴定出芦荟大黄素.TLC鉴别斑点清晰;芦荟大黄素进样浓度在17.2～258μg.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9996),平均回收率为99.32%,RSD=1.48%(n=9).结论:本方法简便、准确,可用于芦荟大黄素的质量控制.     

高效液相色谱法同时测定止嗽化痰丸中5种蒽醌类成分含量

目的 应用高效液相色谱法同时测定止嗽化痰丸中5种蒽醌类活性成分的方法,以利于制剂的质量控制.方法 流动相为乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为254 nm,柱温30℃.结果 5种蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.7％(RSD=1.25％、n=5),99.2％(RSD=1.17％、n=5),99.6％(RSD=1.32％、n=5),98.9％(RSD=0.95％、n=5),99.2％(RSD=1.13％、n=5).结论 高效液相色谱法操作简便,结果准确、可靠,重复性好,可用于止嗽化痰丸的质量控制.     

芦荟大黄素对肝癌HepG2细胞放射敏感性的影响

目的 探讨芦荟大黄素（AE）对肝癌HepG2细胞放射敏感性的影响。方法 采用MTT法测定AE对HepG2细胞的IC₅₀值,作为后续实验的药物浓度。将对数生长期HepG2细胞分为对照组、AE组、γ射线组及联合组,对照组给予常规培养液处理,AE组给予IC₅₀浓度的AE处理,γ射线组给予8 Gy γ射线处理,联合组给予IC₅₀浓度的AE联合8 Gy γ射线处理,每组细胞均培养48 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,微核试验检测细胞DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验观察AE对HepG2细胞的放射增敏作用,Western blotting检测p53及γ-H2AX蛋白表达水平。结果 AE对HepG2细胞的IC₅₀值为60 μmol·L^-1,以此作为后续实验的药物浓度。与对照组比较,AE组、γ射线组及联合组细胞增殖抑制率、微核率、凋亡率及p53、γ-H2AX蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,且联合组升高趋势最为明显（P<0.05）;与γ射线组比较,联合组D₀、Dq及SF显著降低（P<0.05）,SER为（1.81±0.24）。结论 AE和γ射线均对HepG2细胞的增殖有抑制作用,并且AE对HepG2细胞具有放射增敏作用。     

毛细管电泳法同时测定清肺抑火丸中5种蒽醌类成分的含量

目的:建立同时测定清肺抑火丸中5种蒽醌类成分大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用毛细管电泳法,以对乙酰氨基酚为内标。毛细管柱为未涂层弹性融硅石英毛细管柱,运行缓冲液为25 mmol/L硼砂溶液+20mmol/L十二烷基磺酸钠+4 mmol/L磺丁基醚-β-环糊精+2%甲醇(pH 10.01),分离电压为18 kV,进样方式为重力进样10 s(高度15 cm),检测波长为254 nm,温度为25Ⅴ,湿度为<70%。结果:大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚检测质量浓度分别在5.0⁴0.0、2.440.0、2.4¹9.2、3.619.2、3.6²8.8、11.228.8、11.2⁸9.9、2.589.9、2.5²0.0μg/ml范围内同各自峰面积与内标峰面积比值呈良好的线性关系(r=0.998 0、0.997 1、0.996 9、0.998 5、0.998 3);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2.40%;平均加样回收率分别为96.6%、99.6%、99.2%、98.2%、98.6%,RSD分别为0.80%、1.32%、2.21%、1.63%、2.02%(n=6)。结论:该方法专属性强,结果准确、可靠,重复性好,可用于清肺抑火丸的质量控制。     

HPLC法测定枳实导滞丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立枳实导滞丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:Waters Symmery C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）,流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液（85:15）,检测波长:254nm,流速:1.0ml·ml^-1。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的线性范围分别为0.011～0.226μg（r=0.9998）、0.005～0.092μg（r=0.9999）、0.010～0.194μg（r=0.999 9）、0.011～0.212μg（r=0.9999）、0.005～0.102μg（r=0.9998）;浓度范围内进样量与峰面积线性关系良好。平均回收率分别为97.47%（RSD=1.56%）、99.57%（RSD=0.91%）、100.66%（RSD=1.09%）、101.97%（RSD=1.60%）、101.54%（RSD=1.58%）（n=6）。结论:所建方法简单、快速、准确,可用于枳实导滞丸的质量控制。     

HPLC同时测定胆宁片中5种蒽醌类成分的含量

目的:探讨HPLC同时测定胆宁片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种活性成分的含量.方法:采用HPLC,色谱柱:Shimadzu VP-ODS柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温30℃.结果:5种成分分别在0.042～0.840μg(r=0.9996)、0.168-3.352 μg(r=0.9998)、0.084～1.680 μg(r=0.9997)、0.093～1.852μg(r=0.9999)和0.174～3.488μg(r=0.9994)内成良好线性关系,平均回收率分别为99.8%(RSD=1.34%,n=5)、99.8%(RSD=1.72%,n=5)、100.0%(RSD=0.89%,n=5)、99.5%(RSD=0.97%,n=5)和100.2%(P,SD=1.04%,n=5).结论:本法操作简便,结果准确,可靠,重复性好,可用于同时测定胆宁片中5种蒽醌类成分的含量.