流式细胞术联合测定保存血小板表达的磷脂酰丝氨酸和CD62p

人类血小板通过不同的技术进行离体保存后，其特性改变差异较大。建立适用于各种保存血小板特性分析的流式细胞术（FCM）对保存血小板的质量监测和新保存方法研究有重要意义。本研究通过对FCM分析方法主要条件的优化评估，建立了联合测定血小板膜表面包括磷脂酰丝氨酸在内的多参数FCM定量分析方法。在标本制作中，血小板不需要洗涤即可直接进行标记，减少了血小板离心洗涤过程中的激活。除了FCM常用的同型对照外，中还将新鲜富含血小板血浆（FPRP）、凝血酶激活FPRP和液氮处理FPRP作为血小板标准阴性、阳性对照，直接应用于FCM分析，且效果良好。该方法中Gly-Pro-Arg-Pro乙酸盐（GPRP）的选择应用，既防上了血小板聚集和纤维蛋白的形成，同时可稳定血小板，减少制备过程中人为激活，克服了在血小板、Ca^2 和血浆共存条件下FCM定量分析血小板的困难，尤其是为深低温处理血小板包括PS在内的多参数分析提供了良好的方法基础。研究表明该方法标本处理简单，结果分析简便、准确，重复性好。作还通过低温、低渗或激活剂的方法制备了几种膜表面分子标记显不同的血小板应用于FCM分析，不仅证实了所建立的FCM分析方法在各种不同膜表面分子标记的血小板分析中的实用性，又表明了中制备的4种不同膜表面分子标记的血小板在FCM分析保存血小板方法学中的实用价值。     

多功能蛋白p62调节细胞自噬及相关疾病的研究进展

Sequestosome 1 （p62/SQSTM1）是一种由应激诱导产生的细胞内蛋白并作用于选择性自噬的多功能蛋白.p62包含多种蛋白作用域,可结合聚泛素化蛋白并将其进一步降解,在信号转导过程中发挥重要作用.研究表明,p62参与多种疾病的病理过程,如神经退行性疾病、糖尿病、肥胖甚至是癌症.因而从p62的结构和功能这两方面阐述其在相关疾病中的作用很有必要.     

PAC-1、CD62P检测在慢性阻塞性肺疾病患者防治中的应用价值

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者PAC-1、CD62P水平在肺心病发生发展过程中的意义。方法病例来自江苏省苏北人民医院呼吸科确诊的COPD患者60例,按有无肺心病分为肺心病组30例,单纯COPD组30例,另设20名健康体检者为对照组。应用流式细胞术检测全血活化血小板标记物PAC-1、CD62P的水平,以及与肺动脉压、血氧分压关系的分析。结果单纯COPD组,肺心病组PAC-1、CD62P表达水平均高于正常对照组(P0.01),肺心病组PAC-1C、D62P表达水平又高于单纯COPD组(P0.01)。PAC-1、CD62P的表达水平重度肺动脉高压组(45 mmHg)轻度肺动脉高压组(45mmHg)(P0.01)。PAC-1、CD62P的表达水平重度缺氧组(60 mmHg)轻度缺氧组(60 mmHg)(P0.01)。结论 COPD患者尤为合并肺心病患者存在血小板活化,PAC-1、CD62P可作为判断病情严重性及抗血小板药物治疗的依据。     

CD62p、vWF和脂联素水平与糖尿病肾病的关系

目的观察血小板膜糖蛋白(CD62p)、血浆von Willebrand因子(vWF)和脂联素(APN)在糖尿病肾病(DN)各期的水平,探讨其在DN发生、发展中的作用。方法采用Coulter EPICL-XL型流式细胞仪测定CD62p,应用酶联免疫吸附试验测定血清APN和血浆vWF,应用放射免疫法测定尿清蛋白。结果未并发肾病(Ⅰ)组、并发肾病微量蛋白尿(Ⅱ)组、并发肾病临床蛋白尿(Ⅲ)组vWF水平高于健康对照(NC)组,差异均有统计学意义(P0.05);虽然Ⅰ组CD62P与NC组差异无统计学意义(P0.05),但当发展为微量蛋白尿和临床蛋白尿时与Ⅰ组及NC组差异均有统计学意义(P0.05);Ⅲ组APN水平高于Ⅱ组和Ⅰ组,差异均有统计学意义(P0.01),但低于NC组,差异无统计学意义(P0.05);血清APN与CD62p、vWF、尿清蛋白排泄率(UAER)均呈正相关;多元逐步回归分析显示,CD62P、vWF、UAER是影响糖尿病患者APN的独立危险因素。结论血管内皮细胞损伤,血小板活化随着DN的进展呈进行性加重趋势,血清APN升高可能参与了DN患者的内皮功能损害机制。     

奥扎格雷钠干预治疗原发性血小板增多症合并血栓形成的研究

本研究观察了原发性血小板增多症（primary thrombocytosis,PT）患者临床血栓发生率及其与血小板功能变化的关系,探讨阿患者预防性应用血栓素A2抑制剂对其血小板活性的影响及其对血栓的预防和治疗的临床效果。以流式细胞术测定血小板表面的CD62P、PAC-1水平;ELISA方法测定血浆血栓素A2（TXA2）代谢产物TXB2和前列环素（PGI2）代谢产物6-K—PGF1α水平;观察和比较各组血小板功能的变化及其与血栓形成的关系。结果表明：奥扎格雷钠干预治疗前合并血栓组TXB2、CD62P、TXB2／6-keto—PGF1α比值均比未合并血栓组高,统计学差异具有显著性（P〈0．01）;奥扎格雷钠干预治疗后2组各项血小板功能指标除6-keto—PGF1α外,均较治疗前有明显降低（P〈0．01）,且合并血栓组在奥扎格雷钠治疗后除CD62P仍较朱合并血栓组高（p〈0．05）以外,其余指标均与未合并血栓组无显著性差异（P〉0．05）。结论：PT合并血栓者血小板多项功能指标均较未合并血栓者异常升高,血小板功能活化也是PT患者血栓发生的高危因素。奥扎格雷钠均可使2组患者血小板活化指标明显降低,体内TXA2的生成减少和TXA2／PGI2的比值改善.奥扎格雷钠不但具有治疗血栓作用,而且还有较好的预防血栓效果。     

白膜富集法制备浓缩血小板方法的优化及质量评价

目的优化白膜富集法制备浓缩血小板的离心制备条件,并对其质量进行评价。方法第1次离心：选择4档转速、4个离心时间组合成16组离心条件,对满足血小板得率血小板初产品进行CD62p表达率及再表达率检测;第2次离心：3档转速、3个离心时间组成9组离心条件,对所得血小板终产品进行血小板得率、白细胞残留量、红细胞残留量检测。结果第1次离心共有4组离心条件所得血小板得率达到国家标准,其中2 400 r/min（1 861 g）、15 min离心条件所得血小板初产品CD62p表达率最低,CD62p再表达率最高,与其他3组比较差异有显著性（P〈0.01）;第2次离心：仅1 100 r/min（391g）、6 min所得血小板得率、白细胞残留率、红细胞残留率符合国家标准。结论第1次2 400 r/min、离心15 min;第2次1 100r/min、离心6 min制备的血小板在满足国家标准的同时,血小板损伤最低,功能储备最佳。     

PAC-1、CD62P检测在慢性阻塞性肺疾病患者防治中的应用价值

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者PAC-1、CD62P水平在肺心病发生发展过程中的意义。方法病例来自江苏省苏北人民医院呼吸科确诊的COPD患者60例,按有无肺心病分为肺心病组30例,单纯COPD组30例,另设20名健康体检者为对照组。应用流式细胞术检测全血活化血小板标记物PAC-1、CD62P的水平,以及与肺动脉压、血氧分压关系的分析。结果单纯COPD组,肺心病组PAC-1、CD62P表达水平均高于正常对照组（P〈0.01）,肺心病组PAC-1C、D62P表达水平又高于单纯COPD组（P〈0.01）。PAC-1、CD62P的表达水平重度肺动脉高压组（〉45 mmHg）〉轻度肺动脉高压组（〈45mmHg）（P〈0.01）。PAC-1、CD62P的表达水平重度缺氧组（〈60 mmHg）〉轻度缺氧组（〉60 mmHg）（P〈0.01）。结论 COPD患者尤为合并肺心病患者存在血小板活化,PAC-1、CD62P可作为判断病情严重性及抗血小板药物治疗的依据。     

2型糖尿病患者检查血小板-白细胞聚集体的临床意义

目的 研究2型糖尿病(T2DM)患者外周血血小板-白细胞聚集体(PLA)与血小板活化标志CD62p的变化,分析诊断微血管病变的敏感性与特异性,为T2DM患者的诊断、治疗及并发症防治提供实验依据。 方法 用流式细胞术（FCM）检测T2DM患者外周血血小板CD62p、血小板-粒细胞聚集体（PNA）、血小板-淋巴细胞聚集体（PLyA）和血小板-单核细胞聚集体(PMA)的表达百分率。 结果 T2DM组CD62p、PNA、PLyA及PMA的表达率（%）分别为13.38±8.56、16.44±7.71、13.57±7.30、20.07±9.17,均显著高于健康对照组（P均<0.05);T2DM组中有微血管病变组明显高于无微血管病变组（P均<0.05);其中CD62p的敏感性为93.5%,特异性为90.9%;PNA为60.9%和54.5%;PlyA为65.2%和54.5%;PMA为78.3%和68.2%。 结论 PNA、PLA、PMA 、CD62p均可作为反映T2DM患者微血管病变的临床指标,其中CD62p和PMA较为灵敏和特异,CD62p是首选指标。     

小剂量肝素对脓毒症患者血小板表面膜糖蛋白和血栓烷B2表达的影响

目的探讨小剂量肝素治疗脓毒症患者血小板表面膜糖蛋白（clusterofdifferentiation62p,CD62p）、血栓烷B2（thromboxaneB。,TXB2）水平变化及临床意义。方法44例脓毒症患者随机分为抗凝组23例（常规治疗基础上应用肝素5u／（kg·h）持续静脉泵入,疗程1周）与未抗凝组21例（采用常规治疗）,体检健康者23例为对照组;采用ELISA法检测抗凝组与未抗凝组人院第1、4、7、10天血清TXB。及CD62p水平,检测2组凝血指标水平变化,检测对照组血清TXB。及CD62p水平;观察抗凝组与未抗凝组APACHEⅡ评分及28d病死率。结果治疗前抗凝组与未抗凝组血清TXB2及CD62p水平均明显高于对照组（P〈0．05）;抗凝组人院第7、10天血清CD62p与TXB2水平均低于未抗凝组及人院第1天（P均GO．01）,入院第10天APACHEⅡ评分低于未抗凝组及人院第1天（P均G0．01）;抗凝组28d病死率（21．73％）与未抗凝组（28．57％）比较差异无统计学意义（P〉0．05）;脓毒症患者人院时血清CD62p及TXB2表达水平与APACHEⅡ评分呈正相关（r=0．804,P=0．000;r=0．742,P=0．000）。结论小剂量肝素持续泵人治疗脓毒症可明显抑制TXB2及CD62p表达,其对预测脓毒症严重程度有一定意义。