钙调素拮抗剂E6对大鼠神经细胞内钙的影响

目的　观察钙调素拮抗剂E6对神经细胞静息[Ca2 +]i、KCl (5 0mmol·L-1)和谷氨酸 (glutamicacid ,Glu ,0 1mmol·L-1)引起的神经细胞 [Ca2 +]i 升高的影响。方法　用Ca2 +敏感荧光指示剂Fura 2 /AM负载大鼠脑细胞 ,测定神经细胞内游离Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)。结果　E6可升高神经细胞静息 [Ca2 +]i,EC50 为 6 6 8μmol·L-1;无外Ca2 +条件下 ,也升高 [Ca2 +]i,EC50 为 1 30 μmol·L-1,说明E6主要是通过促进细胞内贮存Ca2 +释放引起内Ca2 +升高。E6抑制KCl升高细胞 [Ca2 +]i 的IC50 为 6 0 μmol·L-1;抑制Glu激发的细胞 [Ca2 +]i 升高的IC50 为 0 15 μmol·L-1。结论　E6可能是通过与细胞内钙调素 (Calmodulin ,CaM)结合后 ,影响兴奋性氨基酸受体的开放和电压依赖性钙通道的活性状态 ,表现出对由去极化或受体激动剂引起的内Ca2 +升高的抑制作用     

Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其机制

目的： 探讨Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其作用机制。方法： 培养鼻咽上皮细胞NP69和4种鼻咽癌细胞系（CNE1、CNE2、HONE1和5-8F）,分别采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测细胞中Orai1的mRNA和蛋白表达水平。采用靶向Orai1的短发夹RNA（shRNA）质粒,转染CNE2细胞,设转染对照质粒的CNE2细胞为阴性对照组,钙离子成像检测钙库调节的钙离子内流,Transwell小室检测细胞转移和侵袭,qPCR和Western blot法检测上皮-间充质转化（EMT）标志物E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的mRNA和蛋白表达水平。结果： NP69、CNE1、CNE2、HONE1和5-8F细胞中均表达Orai1,且CNE2细胞中表达相对较高,故选择CNE2细胞进行后续试验。与阴性对照组相比,转染Orai1 shRNA后,CNE2细胞中Orai1的mRNA和蛋白水平均显著降低（P<0.05）;CNE2细胞的钙库调节钙离子内流能力、转移/侵袭能力和EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。结论： 抑制Orai1表达可抑制鼻咽癌细胞钙库调节钙离子内流、转移侵袭和EMT进程,提示Orai1可能成为治疗鼻咽癌转移的新靶标和新方向。     

S100A4蛋白和E-cadherin蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨钙离子结合蛋白A4(S100A4)及上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin,E-cad)在前列腺癌中的表达和临床意义.方法:应用免疫组织化学S-P法检测68例前列腺癌组织及50例良性前列腺增生组织中的S100A4蛋白及E-cad蛋白的表达,并进行半定量分析和比较.结果:68例前列腺癌组织中32例(47.1%) S100A4蛋白阳性表达,31例 (45.6%) E-cad蛋白阳性表达.50例良性前列腺增生组织中8例(16.0%)S100A4蛋白阳性表达,41例(82.0%)E-cad蛋白阳性表达.良性前列腺增生与前列腺癌组织之间S100A4蛋白及E-cad蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).S100A4蛋白及E-cad蛋白在肿瘤组织中表达的差异,与前列腺癌的组织学分级、临床T分期和淋巴结转移有关,而与年龄和远处骨转移无关.结论:在前列腺癌组织中,S100A4蛋白及E-cad蛋白的表达变化与肿瘤的进展密切相关,是判断其生物学行为,预测转移趋势极具价值的指标.     

喹乙醇诱导HepG2细胞线粒体的氧化损伤

背景与目的:探讨喹乙醇(olaquindox)对人肝癌细胞(HepG2)线粒体的氧化损伤作用. 材料与方法:用0、200、400和800μg/ml喹乙醇处理HepG2细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法确定喹乙醇对HepG2细胞的IC50分子探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA)和双氢溴乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;罗丹明123检测线粒体膜电位(△Ψm)变化;钙离子荧光探针Fluo-3AM检测胞浆游离钙离子浓度并用定量PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的损伤情况. 结果:随着喹乙醇浓度的增加,HepG2细胞的存活率逐渐降低(P均<0.01),呈时间-剂量-反应关系;不同浓度的喹乙醇作用细胞24 h后,随着喹乙醇浓度的增加细胞内ROS和胞浆游离钙离子浓度显著增加(P<0.05或P<0.01),△Ψm明显降低且呈剂量-反应关系;喹乙醇能引起HepG2细胞mtDNA和nDNA损伤(P均<0.01),且mtDNA损伤程度显著高于nDNA,并呈剂量-反应关系. 结论: 喹乙醇在体外实验中,可诱导HepG2细胞线粒体氧化性损伤.     

氨氯地平治疗老年高血压临床观察

根据《中国高血压防治指南》的规定 ,年龄超过 60岁达高血压诊断标准者即为老年高血压[1 ] 。众所周知 ,合理控制老年人高血压 ,可使总的脑卒中率下降 ,降低心脑血管病病死率及脑卒中病死率[2 ] 。国内国外多项临床试验显示 ,积极降压治疗 ,对老年高血压也有好处。我们自 2 0 0 0年至 2 0 0 2年在门诊随机选择 35例老年高血压患者 ,应用氨氯地平治疗 ,现报告如下。1　资料与方法1.1　病例选择　 35例均为来自门诊就诊的老年高血压病患者 ,其中男 2 0例 ,女 15例 ,年龄 60～ 78岁 ,平均 (68± 8.5 )岁。35例患者除外急性心脑血管病、恶性高血…     

细胞内游离Ca2＋和cAMP浓度在胃癌细胞凋亡过程中的变化特点

目的：探讨胃癌细胞凋亡过程中细胞内游离Ｃａ＾２＋（「Ｃａ＾２＋」ｉ）浓度和环磷酸腺苷（ＣＡＭＰ）浓度的变化特点及意义。方法：选择顺铂诱导胃癌细胞凋亡,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡;Ｆｕｒａ－２荧光负荷技术测「Ｃａ＾２＋」ｉ,竞争性蛋白结合法测ｃＡＭＰ浓度。结果：顺铂浓度为２μｇ／ｍｌ作用于胃癌细胞２４小时出现典型的凋亡改变,即凋亡小体、细胞皱缩、染色质固缩和片段化,ＤＮＡ梯状     

人参总皂甙对大鼠胰岛释放胰岛素的作用及其特点

人参总皂甙本身可以刺激分离的大鼠胰岛释放胰岛素,并可促进葡萄糖引起的胰岛素释放。人参总皂甙与胰岛素释放之间的剂量—反应关系曲线呈"S"型。人参总皂甙对胰岛素释放的作用不依赖细胞外钙的存在,也不被肾上腺素所抑制,提示人参总皂甙对胰岛素释放的作用机理与葡萄糖不同。     

大麻素WIN55 212-2对牛眼小梁细胞内钙离子及组织型转谷氨酰胺酶表达的影响

<正>青光眼主要与病理性眼压升高有关。眼压升高的重要发病机制是小梁细胞形态和功能发生改变以及细胞外基质增多致房水流出阻力增加。研究表明小梁细胞有平滑肌样功能,而钙离子使小梁细胞收缩,增加房水流出阻力[1]。组织型     

爱大霉素和庆大霉素对胞浆Ca~(2+)影响的初步机制

目的 :探讨爱大霉素 (EM )和庆大霉素 (GM )对胞浆Ca2 +影响的初步机制。方法 :以Fura -2/AM为探针测定EM和GM在不同浓度时对LLC -PK1肾上皮细胞胞浆Ca2 +的影响 ,同位素示踪法测定EM和GM对线粒体Ca2 +摄取和内质网Ca2 +摄取的影响。结果 :EM和GM在1mmol/L时对胞浆Ca2 +浓度无显著影响 (P>0 05) ;在10mmol/L时可使胞浆Ca2 +显著上升 (P<0 01)。EM和GM在1mmol/L时显著促进线粒体Ca2 +摄取 (P<0 05) ;在10mmol/L时 ,二者显著抑制线粒体Ca2 +摄取。EM和GM在>3 4×10-1mmol/L时显著抑制内质网Ca2 +摄取 (P<0 05或P<0 01)。结论 :低浓度EM和GM未能引起胞浆Ca2 +升高 ,可能与其促进线粒体Ca2 +摄取与抑制内质网Ca2 +摄取相互平衡有关 ;高浓度EM和GM引起胞浆Ca2 +升高 ,可能与其均抑制线粒体和内质网Ca2 +摄取有关     

黄体酮对豚鼠结肠平滑肌及细胞膜钙依赖的钾通道电流的影响

目的　观察黄体酮 (Progesterone)对豚鼠结肠平滑肌肌条和细胞的作用 ,借此探讨肠易激综合征 (IBS)的病理生理机制。方法　急性分离豚鼠结肠平滑肌肌条和单个平滑肌细胞。采用TD 112S型等张传感器测量肌条收缩与舒张的幅值、频率 ,并用Axopatch 1 D膜片钳放大器测全细胞模式下的单个平滑肌细胞大电导的钙离子依赖钾通道电流(BKCa)。结果　 6 4 8μmol·L-1黄体酮可抑制结肠带肌条的收缩 (0 1792± 0 0 873) g(n =6 ,P <0 0 5 ) ,而低浓度黄体酮仅抑制结肠环行平滑肌肌条的收缩 (16 2pmol·L-10 2 36 0g± 0 15 78g ,n =6 ,P <0 0 5 ;1 6 2nmol·l-10 4 332 g±0 2 111g ,n =6 ,P <0 0 1;3 2 4nmol·l-1部分肌条完全抑制P <0 0 1) ,其效应呈剂量依赖的趋势。细胞实验中 12 96μmol·L-1的黄体酮可抑制BKCa的幅值约 6 0 %± 17% (n =10 ,P <0 0 1) ,而灌流液含 5 μmol·L-1尼卡地平 (nicardip ine)时抑制BKCa的作用不明显。结论　高浓度黄体酮对纵行和环行平滑肌均有抑制作用 ,而低浓度主要抑制环行平滑肌的收缩 ,作用机制与减少细胞外钙离子内流及抑制BKCa有关 ,这种作用可部分解释在临床上IBS妇女患病更普遍的现象 ,对女性IBS患者的激素治疗有一定的提示作用