人脐带间充质干细胞定向诱导分化成类神经元的实验研究

目的:采用不同细胞因子定向诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元,为脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,采用流式细胞术鉴定细胞。取第5代细胞随机分成A、B、C、D 4组,在A组基础培养基中加入b FGF,B组中加入b FGF和BDNF,C组中加入b FGF、BDNF和BHA诱导培养,D组为对照组,使用含有10%胎牛血清的DMEM-F12培养基培养。诱导2周后采用实时荧光定量PCR检测细胞的nestin、NEFH和GFAP mRNA表达情况,并通过原子力显微镜观察细胞超微结构的的变化。结果:Ⅱ型胶原酶消化法能成功分离人脐带间充质干细胞。通过流式细胞术检测第3代细胞发现,细胞均强表达CD29、CD44和CD105,而CD34、CD45和HLA-DR均未见表达。经定向诱导分化成类神经元后,原子力显微镜观察细胞表面突起增多,实时荧光定量PCR检测显示nestin在A、B、C组均呈阳性表达,NEFH在A、B组呈阳性表达,而GFAP在A、B、C、D 4组均不表达。A、B组n EFH和nestin表达具有显著差异(P﹤0.05)。结论:本实验成功分离培养人脐带间充质干细胞,所培养的细胞扩增迅速,生物学性状稳定;与b FGF单独处理相比,b FGF联合BDNF更能有效诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元。     

人脐带间充质干细胞移植治疗强直性脊柱炎

目的观察人脐带间充质干细胞移植治疗强直性脊柱炎的疗效。方法采用人脐带间充质干细胞治疗强直性脊柱炎病人10例,对干细胞移植治疗的患者分别在移植治疗前后的临床症状评分和化验检查进行监测。结果干细胞移植治疗后患者的BASDAI、夜间疼痛VAS和BASFI较治疗前均有明显下降;干细胞移植治疗后患者的血沉和免疫球蛋白G较治疗前有明显下降。结论脐带间充质干细胞移植治疗强直性脊柱炎安全有效。     

脐带帆状附着并前置血管破裂6例临床分析

目的总结脐带帆状附着并前置血管破裂的临床经过,为临床提供诊治经验。方法回顾性分析6例脐带帆状附着并前置血管破裂的临床资料。结果 6例中1例经阴分娩,阴道流血量约120 m L,新生儿娩出后经抢救治疗后存活良好;4例为产程中出现胎儿宫内窘迫及时行剖宫产术终止妊娠,术前阴道流血量<50 m L,新生儿均存活良好;1例为破膜时阴道流血约150 m L,胎心急剧下降,剖宫产术前听诊胎心消失而经阴分娩一死婴。结论脐带帆状附着并前置血管破裂重在早期诊断和及时处理。一旦确诊,若胎儿存活应及早终止妊娠。     

脐带脱垂抢救成功1例

患者,32岁,孕4产1,因孕足月第2胎,无腹痛于2012年2月24日入院。患者既往月经规律,末次月经2011年5月12日,预产期2012年2月19日。入院查体：体温37℃,脉搏92次／min,呼吸19次／min,血压125／90mm Hg,心肺无异常。产科情况：宫高43cm,腹围114cm,胎位ROA,胎心140次／min。阴道检查：阴道畅,宫颈软,颈管未消失容一指,先露头,浮。 B型超声示：双顶径9．6cm,头围33．6cm,股骨长径7．5cm。根据宫高×腹围＋200,结合B型超声估计胎儿体质量4900g。入院后与患者及家属沟通,患者考虑到曾于2006年12月顺娩一4400g男婴,拒绝剖宫产,要求阴道分娩。患者宫缩规律于2月27日18∶00宫口开大6cm,头浮,胎心162次／min,宫缩持续30s,间歇2min,持续胎儿监护下,用注射器针头给予高位小孔人工破膜,羊水色黄、清,破膜手指保持在阴道内等待下一次宫缩时,18∶02一次宫缩,把原来破膜的小口冲开了,随即脐带脱到了医师手中,即刻嘱咐产妇取膝胸卧位,上推胎头,吸氧,用手在宫颈及胎头间硬撑开一缝隙,缓解脐带受压,胎心于18∶05降到了57次／min,于18∶09得到缓解,持续在130～143次／min。紧急在局麻下取臀高位行剖宫产术,手术顺利,于18∶28娩一男婴,体质量4500g,Apger评分10－10－10,术后给予补液,抗感染治疗。术后7d母子痊愈出院。     

小鼠睾丸支持细胞对人脐带间充质干细胞增殖能力的影响

目的 探讨睾丸支持细胞（SCs）对体外培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs）增殖能力的影响。方法 体外分离培养并鉴定hUCMSCs和SCs;
Transwell-insert系统共培养SCs 和hUCMSCs（共培养组）;普通DMEM-F12培养基培养的hUCMSCs作为对照（对照组）;添加细胞因子
(白细胞介素-3,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子) 的DMEM-F-12培养基培养的hUCMSCs作为阳性对照 (细胞因子组）。用流式细胞术、免疫细胞
化学等方法检测SCs对hUCMSCs增殖、细胞周期、表面标记分子表达的影响,透射电镜观察细胞超微结构。结果 与对照组相比,共培养组和细胞
因子组hUCMSCs增殖明显加快,以共培养组尤为显著（P<0.05）;共培养组和细胞因子组hUCMSCs 表面分子CD29和CD105阳性率均增高;细胞周
期分析显示,共培养组G₀/G₁期细胞数与对照组相比无明显改变,而细胞因子组略有减少。透射电镜观察对照组与共培养组细胞均呈现原始细胞
的超微结构特点。结论 SCs共培养可促进hUCMSCs增殖,且共培养后仍保持其干细胞特性。     

脐带间充质干细胞对人类白细胞抗原不全相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血效果的影响

目的探讨不全相合造血干细胞移植联合脐带间充质干细胞(umbilical cord derive mesenchymal Stem cells,UCMSCs)治疗重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)的疗效。方法选择我院血液科2007年7月—2013年6月收治的行不全相合造血干细胞移植的SAA患者14例,按是否应用UCMSCs分为两组,单纯干细胞移植组7例,为亲缘性人类白细胞抗原(HLA)不全相合造血干细胞移植;加UCMSCS组7例,为亲缘性HLA不全相合造血干细胞和UCMSCs联合移植。观察两组移植后造血重建、慢性移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相关并发症发生情况。结果 14例均获供者型造血重建,中性粒细胞中位植活时间、血小板中位植入时间加UCMSCS组分别为移植后17(14~21)d、19(18~22)d,单纯干细胞移植组分别为移植后21(19~25)d、21(20~26)d,两组比较差异均有统计学意义(F=10.556,P=0.007;F=6.644,P=0.024)。a GVHD、c GVHD发生率加UCMSCS组分别为29%、43%,单纯干细胞移植组分别为43%、71%。14例经预处理后均未出现明显肝肾功能损害,仅1例出现肝静脉闭塞症状,经治疗后好转。所有患者中位随访时间14.5(6~74)个月,12例无病生存,单纯干细胞移植组2例因发生GVHD,应用免疫抑制剂后引发感染死亡。结论对SAA行亲缘性HLA不全相合造血干细胞和UCMSCs联合移植,可促进造血重建,提高疗效,明显降低GVHD发生率及相关病死率。     

胎儿脐带异常附着采用彩超诊断的临床分析

目的:对彩超在胎儿脐带异常附着诊断中的临床价值进行评价分析,为今后的临床诊断工作提供可靠的理论依据。方法:选择临床确诊胎儿脐带异常附着病理39例,对其产前彩超检查结果进行回顾性分析。结果:以产后结果为依据对彩超检查结果进行评价发现,彩超检查确诊34例,诊断符合率为87.18%,超声表现为球拍胎盘者33例,帆状胎盘者6例。结论:经彩超检查对胎儿脐带异常附着进行诊断的准确性较高,临床价值显著,值得关注并推广。     

脐带间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭的修复及移植途径的优化

目的：探讨脐带间充质干细胞（hUCMSC）移植对急性肝功能衰竭大鼠的治疗作用,并优化移植治疗途径。方法采用组织块贴壁法收集 hUCMSC,流式细胞术检测细胞表面标志物。将 SD 大鼠随机分为经尾静脉注射移植治疗组,经肝叶注射移植治疗组,模型对照组,空白对照组。急性肝衰竭动物模型采用一次性腹腔注射2．5 mL／kg CCl4橄榄油（1∶1）混合溶液建立,24 h 后移植治疗组分别经尾静脉和肝叶注射 hUCMSC 细胞悬液;治疗后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h和1周收集血清分析肝功能恢复情况;治疗后3 d、1周、2周留取肝脏标本,观察病理学恢复情况,用 Real-time PCR 检测鼠肝中人 CK8、CK18和 AFP 基因 mRNA 转录水平,免疫组化法检测人 CK18的表达。结果移植治疗组 TBil 和 ALT 含量较模型对照组有明显恢复（P ＜0．05）,肝细胞再生程度提高,炎细胞减少,肝脏病理学修复作用增强。在造模后1周、2周时,经尾静脉移植治疗组和经肝叶注射移植治疗组的肝组织中,CK8、CK18和 AFP 基因 mRNA 的相对转录量与模型对照组相比差异有统计学意义（P ＜0．05）。经尾静脉注射移植治疗组和经肝叶移植治疗组中,移植后的 hUCMSC 在鼠肝中诱导分化后表达人肝细胞相关蛋白 CK18。经尾静脉和经肝叶注射移植治疗组的肝功能、移植细胞分化程度比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论采用 hUCMSC 移植治疗急性肝衰竭大鼠模型后,能促进肝功能和肝脏病理学修复。移植后的 hUCMSC 自身能分化为具有肝细胞功能的类肝样细胞。经尾静脉与经肝叶注射移植疗效相似。