P75在小鼠肾脏组织中的特异性表达鉴定

目的探讨肾脏中是否存在神经嵴来源的细胞,体外分离后培养,检测其细胞特性。方法通过免疫荧光染色方法及Q-PCR技术,检测P75在小鼠肾脏中是否有表达及在各时间段(1、2、4周)的表达规律;用免疫荧光共染的方法,分别行P75抗体与Nestin抗体、Nephrin抗体共染,观察P75+细胞表达位置;磁珠分选P75+的细胞,并在体外培养及鉴定。结果P75在小鼠肾脏中有表达,在7 d时表达含量最高,达18.7%;随小鼠年龄的增长,P75表达含量降低;P75与Nestin、Nephrin的表达部位一致,在肾小球中表达,而未在肾小管表达;磁珠分选得到的P75+细胞经可体外培养;并在诱导液诱导下,这些细胞可以分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论P75表达阳性的肾脏细胞,有可能起源自神经嵴,且具有部分干细胞特性。     

雄激素替代治疗后去势成年雄性大鼠基底前脑一氧化氮合酶及巢蛋白阳性神经元的变化

背景：基底前脑的内侧隔核、斜角带核垂直支及水平支的神经元音有丰富的雌激索受体和雄激素受体，故雌、雄激素可通过相应受体作用于神经元，进而影响学习记忆过程。 目的：定性和定量分析雄激素替代治疗对成年去势雄性大鼠内侧隔核、斜角带核垂直支及水平支的一氧化氮合酶、巢蛋白阳性神经元的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：中山大学中山医学院人体解剖学教研室和脑研究室。 材料：实验于2001-06／2002-06在中山大学中山医学院人体解剖学教研室和脑研究室完成。选取成年健康雄性SD大鼠28只，随机分为4组（n=7）：去势24h后雄激素替代治疗4周组（ART1）；去势2周后雄激素替代治疗2周组（ART2）；去势24h后载体替代治疗4周组（VRT）；假手术组。 干预：①ART1组：切除双侧睾丸去势后24h开始皮下注射丙酸睾丸酮（25mg／kg，溶于100μL无菌芝麻油），隔日1次，注射时间固定于上午10：30-11：00，注射14次（4周）。②ART2组：去势后2周开始皮注射丙酸睾丸酮，剂量和方法同ART1组，注射7次（2周）。③VRT组：去势后24h开始皮下注射无菌芝麻油1000μL，注射时间和次数同ART1组。④假手术组：假手术组处理，不伤及睾丸，电不进行任何替代治疗，存活4周。 主要观察指标：各组大鼠于相应时间点处死，免疫组织化学法观察内侧隔核、斜角带核垂直支及水平支中的一氧化氮合酶和巢蛋白阳性神经元的形态和数量变化。 结果：28只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠各部位的一氧化氮合酶和巢蛋白阳性神经元的形态特征均无明显改变。②一氧化氨合酶和巢蛋白阳性神经元数：在内侧隔核和斜角带核垂直支VRT组大鼠明显高于假手术组（P〈0．05或0．01），VRT1和VRT2组明最低于VRT组（P〈0．05或0．01）。并接近假手术组水平（P〉0．05）。 结论：雄激素替代治疗对去势成年雄性大鼠基底前脑一氧化氮合酶和巢蛋白阳性神经元的形态无明显影响；但能选择性地使基底前脑不同亚区的阳性神经元数明显降低，这可能与雄性激素通过其受体介导的机制低调其表达密切相关，并有可能通过此机制影响学习记忆过程。     

缺血性脑损伤诱导内源性神经干细胞的增殖和迁移

目的:观察缺血性脑损伤对内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。方法:实验于2004-09/2005-03在新乡医学院人体解剖与组织胚胎重点实验室进行。10～12周体质量300～350g的健康雄性SD大鼠62只,由新乡医学院实验动物中心提供。按随机数字表方法将其分为正常组6只、假手术对照组14只、脑缺血再灌注组42只(分为再灌注1,3,5,7,10,15,20d7个时间点,每时间点6只)。参照Pulsinelli-Brierley法,夹闭大鼠双侧颈总动脉制作短暂性全脑缺血动物模型,全脑缺血10min后再灌注,假手术对照组不夹闭颈总动脉。于脑缺血再灌注不同时间点应用SABC免疫组化法染色显示5-溴-2-脱氧尿嘧啶阳性细胞和巢蛋白阳性细胞,光镜下观察并分析脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖、迁移的变化过程。结果:正常组、假手术对照组大鼠均存活,脑缺血再灌注组大鼠1d、5d、15d、20d各死亡1只,共58只大鼠进入结果分析。①正常组与假手术对照组室管膜下区、海马CA1区、齿状回区域均偶见5-溴-2-脱氧尿嘧啶阳性细胞和巢蛋白阳性细胞。②脑缺血再灌注后1d于海马、齿状回和室管膜下区均有5-溴-2-脱氧尿嘧啶阳性细胞和巢蛋白阳性细胞,随后逐渐增加,7～10d达高峰,术后20d仍有表达;在室管膜下区的5-溴-2-脱氧尿嘧啶阳性细胞和巢蛋白阳性细胞有向皮质、海马迁移的现象。结论:成年大鼠全脑缺血后7～10d内源性神经干细胞增殖达到高峰;增殖的内源性神经干细胞存在由增殖区向靶区迁移的现象。     

孕期脉冲电磁场与子代大鼠海马神经干细胞增殖及巢蛋白的表达

背景: 电磁场能对机体产生影响,尤其对于神经系统.研究已发现了脉冲电磁场对神经干细胞的影响.目的: 观察产前脉冲电磁场对子代大鼠海马神经干细胞增殖及巢蛋白表达的影响.方法: 选用体质量240～260 g SD雌性大鼠为母鼠,随机分为2组.对照组孕期不给任何干预;产前脉冲电磁场组于怀孕14～20 d,给予脉冲电磁场刺激,3次/d,10 min/次.于雌、雄仔鼠1月龄时每组随机各组6只行脑组织切片,应用免疫组织化学方法检测海马中Nestin蛋白和Brdu阳性细胞的表达.结果与结论: 产前脉冲电磁场组雌雄子代海马Nestin蛋白和Brdu阳性细胞表达均较对照组多(P<0.001),,且产前脉冲电磁场组雌性子代海马Nestin蛋白和Brdu阳性细胞表达较雄性子代的多,差异具有非常显著性意义(P<0.001),对照组雌雄子代之间差异无显著性意义(P>0.05).结果表明,产前脉冲磁场能引起子代海马神经干细胞数增多及增殖能力增加,这可能是机体对产前脉冲电磁场所致脑损伤的代偿性反应.     

星形胶质细胞瘤干细胞的体外分离、培养与鉴定

背景：肿瘤干细胞理论认为肿瘤中存在一小部分具有无限增殖潜能和自我更新能力,能够分化为成熟细胞表型的干细胞样细胞,对肿瘤发生、增殖、侵袭起关键作用。目的：建立体外分离、培养与鉴定星形胶质细胞瘤干细胞的方法。方法：采用直接培养法分离培养星形胶质细胞瘤干细胞。参照神经干细胞培养条件,进行体外培养。观察其增殖、分化并进行巢蛋白、CD133免疫细胞化学鉴定和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白及O4免疫细胞化学鉴定。结果与结论：培养7-10d,可形成大量悬浮生长巢蛋白及CD133免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白或O4免疫阳性。提示星形胶质细胞瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞。CD133和巢蛋白是星形胶质细胞瘤干细胞重要的表面标记,可以用于星形胶质细胞瘤干细胞的分离。     

Nestin在食管癌变过程中的表达及意义

目的 通过检测巢蛋白(Nestin)在食管正常上皮及不同病变组织中的表达及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,探讨巢蛋白在食管癌的发生、浸润和转移中的作用.方法 正常食管断端组织40例、非典型增生42例、原位癌30例、食管浸润癌127例,免疫组织化学及实时定量RT-PCR检测Nestin的表达并分析其与VEGF的协同关系.结果 Nestin的阳性表达率随病变的进展逐步增高,转移组的阳性表达率(96.61%)显著高于未转移组(89.66%)(P<0.05),而转移组内不同分化程度间的表达率无显著差别;Nestin与VEGF在浸润癌组织中的表达具有显著相关性(χ2=8.326,P<0.05,c=0.2578).结论 Nestin表达提示食管上皮发生了癌变以及癌细胞获得了远处转移的能力,食管鳞癌去分化及浸润、转移能力的增强与Nestin及VEGF高表达有关.     

虫草肾茶对慢性肾衰竭大鼠足细胞中巢蛋白的影响

目的观察虫草肾茶对慢性肾衰竭大鼠蛋白尿的影响及其可能的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组(虫草肾茶组)、对照组(福辛普利组)。建立慢性肾衰竭动物模型(5/6肾切除),并予相应的药物干预,于第0、1、2、3、4、6、8周动态观察对各组大鼠蛋白尿、肾功能、肾脏病理及免疫组化的影响。结果总体上对照组比治疗组对肾脏的保护作用更有优势,但治疗组治疗后蛋白尿明显下降,肾功能恶化减慢,肾小球肥大减轻;免疫组化结果表明,治疗组能有效降低肾衰大鼠足细胞中巢蛋白的表达。结论虫草肾茶能够延缓慢性肾衰的进展,其作用机制可能与影响巢蛋白的表达,进而维持足细胞的结构功能的完整性有关。     

益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的探讨益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用.方法采用密度梯度离心法分离获取SD大鼠骨髓单个核细胞层,将细胞经过传代培养使细胞得到扩增和纯化,用流式细胞仪鉴别.用益气活血方联合二甲亚砜(DMSO)、丁羟茴醚(BHA)和β-巯基乙醇(BME)等对碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导的MSCs诱导向神经细胞定向分化.用免疫细胞化学方法检测诱导1 h、3 h后巢蛋白(nestin)的表达,诱导5 h后神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,鉴定分化细胞的类型,并计数MSCs分化的各种细胞的阳性率.结果益气活血方体外诱导MSCs 1h、3 h后分化为nestin免疫细胞阳性率为45.5%±3.4%和38.3%±1.8%,诱导5 h后NSE和GFAP免疫细胞阳性率为82.3%±2.4%、12.1%±1.6%,与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01).结论成年大鼠骨髓MSCs可以在体外培养扩增,益气活血方有体外定向诱导骨髓问充质干细胞向神经细胞分化的作用.     

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

目的 探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达.方法 使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果 脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞.流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征.诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱.结论 脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志.脐血能够成为NSCs的新来源.     

中药对急性局灶性脑缺血大鼠Nestin和EGF表达的影响

目的:观察中药复方对急性局灶性脑缺血大鼠巢蛋白(Nestin)和表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:采用电热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,术后随机分为模型组、中药组、另设假手术组。观察中药对大鼠侧脑室室管膜下层(SVZ区)Nestin和EGF的表达。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠SVZ区Nestin和EGF免疫阳性细胞数增多(P<0.01);与模型组相比,中药组大鼠SVZ区Nestin和EGF免疫阳性细胞数增多(P<0.01)。结论:脑缺血后EGF、Nestin的表达出现增高,说明EGF、Nestin参与神经元内源性保护;中药能明显提高Nestin和EGF在缺血脑内的表达,从而保护神经元、修复损伤。