骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca2+浓度的变化

背景：单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。 目的：探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。 方法：分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50 mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24 h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和Realtime PCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。 结果与结论：①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P < 0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P < 0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。     

神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤

背景：近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。 目的：探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展。 方法：以“neural stem cells, stem cell transplantation, ischemic brain injury”为检索词,检索Pubmed数据库1990至2012年相关文献;以“神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤”为检索词,检索CNKI数据库2005至2012 年相关文献。分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究。 结果与结论：①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离。②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等。③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等。正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等。④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活。神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高。缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望。     

微管相关蛋白2和巢蛋白在人胚胎胃组织中的表达

摘要：目的探讨微管相关蛋白2 (MAP-2)和巢蛋白(Nestin) 与人胚胎胃组织的发育关系。方法应用免疫组织化学PV法检测第
2、3、4三个月龄段,人胚胎胃壁、贲门和幽门组织内MAP-2和Nestin的表达规律。结果第2、3、4三个月龄段,MAP-2和Nestin阳
性表达主要集中于人胚胎胃壁、贲门和幽门组织黏膜下神经丛和肌间神经丛,随胎龄的增大,MAP-2和Nestin蛋白在肌间神经
丛内阳性表达细胞数量和强度均呈增高趋势。而MAP-2和Nestin蛋白在胃壁、贲门和幽门组织的黏膜上皮和腺体处均呈阴性
表达。结论MAP-2和Nestin参与调节人胚胎胃组织的生长发育过程。
     

磁刺激对脊髓内源性神经干细胞增殖分化影响

目的 探讨磁刺激对脊髓内源性神经干细胞（NSCs）增殖分化的作用。 方法 将46只Wistar大鼠分为正常组、对照组和治疗组,对照组和治疗组采用改良的Allen重物坠落法造成大鼠脊髓损伤（SCI）模型,治疗组于SCI后24 h开始,每天给予脉冲磁刺激,频率为0.5 Hz,强度为1.44 T,每次30个脉冲,每天1次,连续7 d。应用BBB运动功能评分评价磁刺激治疗后大鼠运动功能的改善,采用免疫组织荧光化学技术检测脊髓神经上皮干细胞巢蛋白的表达,采用免疫荧光三标技术结合激光共聚焦显微镜检测微管相关蛋2（MAP2）/巢蛋白/4,6 二乙酰基 2 苯基吲哚（DAPI）的表达。 结果SCI后,治疗组大鼠运动功能改善明显,治疗组脊髓中央管室管膜、室管膜下区、损伤病灶周围和血管周围巢蛋白阳性细胞数较对照组多（P<0.05）,且尽管总体细胞数量有限,在上述部位的MAP2/巢蛋白双标阳性细胞数多于对照组。 结论磁刺激可以促进脊髓内源性NSCs的激活,并有可能诱导其向神经元细胞分化,该诱导分化作用是否在神经再生方面具有实质性意义值得进一步深入研究。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血区血管新生及神经前体细胞增殖的影响

目的：探讨骨髓问充质千细胞（MSC）移植促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的可能机制。方法：用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,分缺血对照组和移植治疗组（经颈动脉移植体外培养异体MSC）。采用免疫组织化学染色及原位杂交技术观察缺血区脑组织的新生血管、细胞增殖及巢蛋白表达的变化。结果：（1）移植组比对照组缺血区皮层微血管密度（MVD）明显增高,血管内皮生长因子（VEGF）mRNA阳性信号明显增强。（2）缺血区顶叶皮层、尾壳核、室管膜、室管膜下区均可见大量Nestin阳性细胞及BrdU阳性细胞．各时间段移植组两种阳性细胞数均比对照组显著增多。结论：MSC可能通过改善缺血区血运及促进缺血区神经前体细胞再生达到修复缺粗区损伤组织．从而改善脑缺血大鼠神经功能。     

神经中间丝蛋白Nestin在胎肝中的表达

目的 采用免疫组织化学方法标记不同发育时期人胚胎肝干细胞中巢蛋白(Nestin)的表达,探讨肝干细胞新的表面标志蛋白。方法 取材不同发育时期胎儿肝脏,固定并制成石蜡切片,ABC法标记神经前体细胞的特异性表面标记Nestin在胎肝干细胞中的表达。结果 汇管区周边界板处卵圆样干细胞表达Nestin阳性,Nestin阳性细胞呈单层紧密排列成管,呈鞘样包绕着早期汇管区,部分包绕着初级汇管区,随着次级汇管区的成熟,Nestin阳性卵圆样干细胞逐渐局限于赫令管周围;此外胚胎发育不同时期可见Nestin阳性单个核样细胞散布在肝实质内。结论 肝脏内有Nestin表达阳性的干细胞存在,其功能、来源需要进一步深入研究。     

脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白和干细胞因子基因的表达★

背景：干细胞因子是缺氧诱导的神经再生因子，可能刺激动物的神经再生。 目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白和干细胞因子基因表达的变化，分析两者变化的时间规律。 设计：随机对照动物实验。 单位：青岛大学医学院附属医院超声诊断科。 材料：实验选用成年健康雌性SD大鼠36只，由中国科学院上海实验动物中心提供。实验所用巢蛋白和干细胞因子 mRNA原位杂交试剂盒、DAB试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。 方法：实验于2005-01/06在山东省脑病防治重点实验室完成。选取32只大鼠，应用线栓法经左侧颈外一颈内动脉插线建立左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型，在缺血1.5 h再灌注后2，6 ，1 2 ，24 h，2，3，7，14 d进行观察，每个时间点4只。其余4只为假手术组：除不插线外，其余步骤同实验组。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后皮质、纹状体和室旁区巢蛋白和干细胞因子mRNA的表达。 主要观察指标：大鼠皮质、纹状体和室旁区神经细胞巢蛋白和干细胞因子基因表达。 结果：进入结果分析数量保持为36只。①巢蛋白 mRNA表达：假手术组皮质、纹状体和室旁区巢蛋白 mRNA表达很弱。缺血再灌注后，在皮质中的表达除再灌注后2 h、纹状体除再灌注后2,6 h以外，室旁区除2,6 h,14 d以外各时间点均明显高于假手术组，差异有显著性意义（P < 0.05）。②干细胞因子表达:假手术组皮质、纹状体和室旁区干细胞因子表达很弱。缺血再灌注后，在皮质中的表达除2,6,12 h以外，纹状体除2,6 h以外，室旁区除2 h,14 d以外各时间点均明显高于假手术组，差异有显著性意义（P < 0.05）。 结论: 干细胞因子表达的时间规律与神经干细胞增殖的时间规律基本一致，可以提示脑缺血再灌注后干细胞因子 mRNA表达可能具有促进神经干细胞增殖作用。     

巢蛋白与脑损伤

巢蛋白是第Ⅵ类中间丝蛋白，主要在胚胎期神经前体细胞和神经干细胞一过性表达。巢蛋白表达的时空顺序与前体细胞朝终末分化方向发育为成熟细胞的过程相匹配：脑缺血、创伤以及理化等因素造成的损伤可诱导其重新表达。巢蛋白可作为中枢神经系统损伤时最早、快速应答的敏感标志物，可能与神经细胞的修复有关。     

乳腺癌中Nestin与CD133的表达与上皮间质转化的关系

目的 探讨乳腺癌中巢蛋白(Nestin)与CD133的表达与上皮间质转化(EMT)的关系.方法 收集复旦大学附属中山医院青浦分院2010年1月至2013年6月67例乳腺癌病理标本,使用免疫组织化学染色,观察Nestin、CD133与E-cadherin在乳腺癌中的表达.结果 Nestin的总体阳性率为73.13%(49/67),CD133的总体阳性率为40.30%(27/67).Nestin在三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌中的阳性率分别为90.48%(19/21)和65.22%(30/46),差异无统计学意义(P>0.05),而CD133的分别为71.43%(15/21)和26.09%(12/46),差异有统计学意义(P<0.01).Nestin和CD133在E-cadherin阴性组中的阳性率为95.83%(23/24)和58.33%(14/24),高于在E-cadherin阳性组中的60.47%(26/43)和30.23%(13/43),差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论 Nestin能够用以特异性检测乳腺癌干细胞的表达,CD133能够用以特异性检测三阴性乳腺癌中干细胞的表达,乳腺癌组织表达干细胞标记可能与肿瘤细胞发生EMT有关.     

探索学习对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质巢蛋白及突触素表达的影响

目的探讨探索学习对局灶性脑梗死大鼠巢蛋白（nestin）及突触素（synaptophysin,SYP）表达的影响。方法健康雄性SD大鼠70只,其中60只经电凝法造成右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型后,随机分为探索学习组（n=30）和手术对照组（n=30）,探索学习组居于探索笼,手术对照组5只一组群居于标准笼;假手术组（n=10）仅开颅不电凝大脑中动脉,居于标准笼。探索学习组和手术对照组分别于术后第1、7、14、28天随机选取5只大鼠处死,假手术组分别于术后第7、28天随机选取5只大鼠处死,即进行巢蛋白及突触素免疫组化染色,测定其在脑梗死灶周围皮质的表达情况。结果探索学习组大鼠巢蛋白阳性神经元数在第7、14天明显多于手术对照组（P〈0.01）,探索学习组突触素的表达在第14、28天明显多于手术对照组（P〈0.01）。结论探索学习能促进梗死灶周围皮质巢蛋白及突触素的表达。