SSH技术及其在肿瘤研究中的应用

随着人类基因组计划的完成，人们已经把越来越多的目光投向不同细胞或者不同生理和病理状态下基因的差异性表达（differential display）。这些基因的选择性表达决定了机体的整个生命过程，基因表达的改变正是处于控制生物学调节机制的中心位置。对于肿瘤来说，其发生发展涉及多种基因的相互作用，这些基因的差异性表达也决定了肿瘤的多样性表型。目前分离并且克隆差异性表达基因成为了功能性基因研究的热点。对肿瘤差异基因的分离克隆不但有助于我们理解肿瘤发生发展的分子机制，而且对肿瘤的早期诊断、靶向治疗和有效预防都具有重要的生物学和临床意义。分离差异表达基因的方法有很多，我们比较熟悉的经典方法有：差异显示技术（DD-PCR）、在此基础上发展起来的代表性差异显示技术（RDA—PCR），     

B组轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达与抗体的制备

目的：在大肠杆菌中表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白并制备其兔抗血清。方法：根据B组轮状病毒（GBRV）WH-2株vp7基因的全序列设计引物,用PCR的方法扩增得到vp7基因的编码区。将其克隆到原核GST融合表达载体pGEX-KG内,转化大肠杆菌E.coliDH5α,IPTG诱导表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白,经SDS-PAGE分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白抗血清。结果：经鉴定确认,vp7基因以正确的方式插入到载体中,此重组表达载体经IPTG诱导后,可表达相对分子量为53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白。制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1：500倍稀释后用Western Blot分析,与53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白获得特异性显色信号。结论：人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达,所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础,也为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础,具有重要实际应用价值。     

肝癌差异表达基因研究进展

目前发现大量的癌基因、抑癌基因 ,或相关基因参与肝癌的发生、发展 ,在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织之间 ,在 RNA、蛋白水平都存在众多的差异表达基因 ,认识这些基因及其转录、调控的分子机制 ,对于揭示肝癌的发病机制具有重要意义 ,本文就该领域的研究进展进行综述     

人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达

对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现４个克隆中３个克隆的重链和轻链完全相同，ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ分别属于ＶＨ１亚群和Ⅱ亚群，其轻链ＶＬ分别属于ＶλⅡ亚群和ＶλⅠ亚群。构建了可溶性Ｆａｂ段表达载体，显示出在细菌中表达的Ｆａｂ段抗体与ＨＢｓＡｇ特异性结合，这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有ＨＢdisplay status     

正常成人QTpeak离散度与QT离散度对比研究初探（附500例分析）

目的 :研究正常成人QTpeak离散度 (QTpd)的正常范围 ,并与QT离散度 (QTd)作对比研究。方法 :以纸速2 5mm/s描记常规十二导联同步体表心电图 ,人工测量QTpd及QTd ,比较不同测量者之间QTpd及QTd的测量误差 ,对QTpd及QTd作比较分析。结果 :5 0 0名正常成人QTpd为 11ms～ 5 0ms[( 3 1± 10 )ms] ,QTd为 16ms～ 5 6ms[( 4 0±10 )ms] ;不同测量者之间的QTpd结果差异无显著性 ,而QTd结果差异有显著性 ;QTpd与QTd结果具有较好的相关性。结论 :5 0 0名正常成人QTpd值为 11ms～ 5 0ms[( 3 1± 10 )ms] ,QTpd与QTd相关性好 ,QTpd测量方法简便 ,结果准确 ,误差小     

外源基因在大肠杆菌中的表达

随着生物技术的迅猛发展,采用基因工程方法大量制备一些有用蛋白质,特别是医用蛋白质药物已成为可能.目前,表达系统可分为原核表达系统和真核表达系统.原核表达系统主要是指大肠杆菌表达体系,其它尚有枯草杆菌体系等;真核表达系统包括酵母细胞表达体系、杆状病毒-昆虫细胞表达体系和哺乳动物细胞表达体系.各种表达体系都     

牙本质基质蛋白-1与骨的形成及发育

牙本质基质蛋白-1作为牙特异性细胞外基质蛋白，其在骨形成及发育的作用与功能得到了广泛的关注与研究。研究表明，牙本质基质蛋白-1在骨组织中高度表达，牙本质基质蛋白-1在骨形成及发育中起重要作用，本文拟就牙本质基质蛋白-1在骨发育中的作用与机理研究进展作一综述。     

MDM2在口腔疣状癌中的表达及意义

口腔疣状癌是鳞状细胞癌的特殊类型。它生长缓慢 ,有局部侵袭性 ,很少发生转移。本文作者通过观察MDM2 在疣状癌中的表达 ,对疣状癌的生物学行为做出了新的认识。但癌的发生发展是一个多因素参与和调节的复杂过程 ,对其生物学特性的认识更是需要采用多种手段和途径进行观察和研究 ,才能获得令人信服的证据     

人牙本质涎蛋白在COS-7细胞中的表达

目的 :构建人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将hDSP全长基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3 ,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,脂质体转染法转染COS 7细胞 ,48～ 72h收集细胞及培养上清 ,Westernblot和免疫组化检测表达产物。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;Westernblot检测显示在 60 0 0 0处出现一条清晰的特异性免疫阳性条带 ;免疫组化染色显示细胞胞质内有大量棕黄色颗粒 ,进一步证明该转染方法可行 ,转染效率较高。结论 :hDSP全长基因可以在COS 7细胞获得瞬时高效表达。     

SEN病毒D亚型ORF1-C端基因的克隆、表达和鉴定

目的:获得SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,并进行表达,为进一步研究及诊断、治疗应用奠定基础.方法:用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-DORF1C端基因,测序验证后,构建了pQE30-SENV-D重组表达质粒,并经过转化E.coli M15,IPTG诱导表达,Western blot分析表达结果.结果:获得了正确序列的SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,表达出Mr约为38×103的蛋白.表达蛋白能与患者血清中相应的抗体结合,发生抗原抗体反应.结论:成功获得并表达了SENV-D-ORF1-C端蛋白,并经Western blot印迹法证实能与阳性血清中的抗体发生抗原抗体反应,有可能用于检测SENV-D抗体.为今后进一步研究有助于疫情监测及早期发现感染者的抗体奠定了坚实的基础.