女性生育力保存冷冻技术研究进展

由于生存环境和生活方式的改变、晚育、卵巢功能低下、卵巢早衰的发病年龄提前等因素的影响,导致人类生殖能力不断下降,因此生育力保存越来越受到人们的关注。冷冻保存技术是通过超低温冷冻细胞或组织使其生物学活性停止并保存[1]。保存生育力的方法主要有：胚胎冷冻、未成熟和成熟卵母细胞冷冻、卵巢组织冷冻以及卵母细胞体外培养技术,其中冷冻技术对于生育力保存具有重要意义。现将该技术适用人群及方法综述如下。     

迟发缺血预处理低温保存肾移植供体中血红素加氧酶1的表达

背景：缺血预适应延迟反应通过诱导保护性蛋白增强组织对缺血再灌注损伤的耐受能力;血红素加氧酶1参与缺血预适应延迟保护作用。迟发缺血预处理对低温保存肾脏的作用及血红素加氧酶1是否参与其中尚不清楚。目的：观察缺血预处理诱导血红素加氧酶1的迟发缺血预处理反应对低温保存肾脏移植供体的作用。方法：雄性SD大鼠随机分入5组：空白对照组、低温保存组、缺血预处理组、缺血＋低温组（n=12）;缺血＋给药＋低温组。各组大鼠均行右肾切除,预处理或假手术操作处理后24h采用大鼠肾脏非循环离体灌注模型获取肾脏,分别于保存24,48,72h取样。缺血＋给药＋低温组除上述处理外,还于原位低温灌注术前1h接受1次血红素加氧化酶1抑制剂锡原卟啉腹腔注射。低温保存肾脏于各保存终点留取保存液,测定pH值和乳酸脱氢酶含量;切取1/2肾脏按照光镜要求制备标本送检;剩余1/2肾脏用于免疫印迹法测定血红素加氧酶1表达,比色法测定皮质Na-K-ATP酶活性、丙二醛和还原型谷胱甘肽含量;未保存肾脏仅通过免疫印迹法测定血红素加氧酶1的基础表达情况。结果与结论：迟发缺血预处理诱导了肾组织血红素加氧酶1的表达,与单纯低温保存组相比保存24,48h后,缺血＋低温组保存液pH值、乳酸脱氢酶活性降低;肾脏组织Na-K-ATP酶活性、谷胱甘肽含量增加,丙二醛含量降低;同时点预处理组肾组织光镜形态学改变稍好于单纯低温保存组。给予血红素加氧酶1抑制剂后,这种保护作用消失。提示,迟发缺血预处理延长了肾脏低温保存时限,这可能与诱导血红素加氧酶1,增加组织抗氧化能力,减轻低温保存氧应激有关。     

脐带血单个核细胞分离及保存的优化研究

目的优化脐带血单个核细胞的分离制备及保存的方法。方法采集符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿脐带血,采用二次回浆法分离制备脐带血有核细胞并与传统离心法比较。对分离制备的脐血有核细胞采用不同的降温速率进行低温保存研究,优化降温速率及程序降温终止温度。结果采用二次回浆法和传统离心法分离制备脐带血有核细胞,其总数(×109)分别为1.52±0.89和1.11±0.35,回收率(%)分别为92.12±5.78和86.94±7.34,差异有统计学意义(P<0.05)。脐血造血干细胞在4℃～-40℃降温过程中,采用1℃/min和5℃/min的降温速率,细胞回收率(%)分别为92.4±2.3和84.7±2.4,P<0.05;在-40℃～-90℃时,采用l℃/min或5℃/min的降温速率,细胞回收率(%)分别为91.1±1.9和90.3±2.8,P>0.05。在程序降温仪降至-90℃和-130℃后移至液氮,细胞回收率(%)分别为91.1±2.1和92.3±1.9,P>0.05。结论二次回浆法能提高脐带血制备有核细胞数;脐血干细胞保存优化的方法为4℃～-40℃时采用1℃/min的降温速率,再以5℃/min的降温速率降至-90℃后...     

间充质干细胞向肝样细胞的诱导与分化

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,与传统肝移植相比,具有免疫原性低、易低温保存、一个供体可提供多个受体等优点。目前用于肝再生研究的干细胞种类较多,主要包括间充质干细胞、肝卵圆细胞、胚胎干细胞等。其中间充质干     

兔深低温保存同种带瓣主动脉移植模型的研究

目的建立兔颈动脉移植深低温保存同种带瓣主动脉模型。方法成年中国白兔20只作为受体,1个月龄的中国白兔40只作为供体,取其带瓣主动脉深低温保存后,移植于受体的两侧颈动脉,术后28 d取出观察血管通畅情况、有无血栓形成及组织学变化。结果受体17只存活,两侧颈动脉85%搏动良好、血流通畅,大体标本无血栓形成。结论建立兔颈动脉移植模型对动物损伤小、位置表浅易于操作,是一种实用、稳定可靠和易于复制的带瓣血管移植动物模型。     

生殖细胞的细胞膜渗透特性研究进展

生殖细胞的低温保存在多个领域具有重要应用价值。为提高保存后细胞的存活率与活性,研究细胞膜对水和低温保护剂的渗透特性十分必要。本文综述了近年来动物生殖细胞的细胞膜渗透特性研究概况,列出了典型的精子细胞和卵母细胞的细胞膜对水和常见低温保护剂的渗透系数,分析了这些细胞的渗透特性对制定其低温保存方案的影响。论文还介绍了细胞膜渗透特性的最新测量方法。     

Supplemental effect of varying L-cysteine concentrations on the quality of cryopreserved boar semen

Cryopreservation is associated with the production of reactive oxygen species, which leads to lipid peroxidation of the sperm membrane and consequently a reduction in sperm motility and decreased fertility potential. The aim of this study was to determine the optimal concentration of L-cysteine needed for cryopreservation of boar semen. Twelve boars provided semen of proven motility and morphology for this study. The semen was divided into four portions in which the lactose-egg yolk （LEY） extender used to resuspend the centrifuged sperm pellet was supplemented with various concentrations of L-cysteine to reach 0 mmol L^-1 （group Ⅰ, control）, 5 mmol L^-1 （group Ⅱ）, 10 mmol L^-1 （group Ⅲ） and 15 mmol L^-1 （group Ⅳ）. Semen suspensions were loaded in straws （0.5 mL） and placed in a controlled-rate freezer. After cryopreservation, frozen semen samples were thawed and investigated for progressive motility, viability using SYBR-14/EthD-1 staining and acrosome integrity using FITC-PNA/EthD-1 staining. There was a significantly higher （P 〈 0.01） percentage of progressive motility, viability and acrosomal integrity in two L-cysteine-supplemented groups （group Ⅱ and group Ⅲ） compared with the control. There was a biphasic effect of L-cysteine, with the highest percentage of progressive motility, viability and acrosomal integrity in group Ⅲ. In conclusion, 5 or 10 mmol L^-1 was the optimum concentration of L-cysteine to be added to the LEY extender for improving the quality of frozen-thawed boar semen.     

低温冻存对人绒毛膜来源的间充质干细胞多向分化潜能的影响

目的 探讨低温保存对人绒毛膜来源的间充质干细胞(hCDMSC)体外生长特性和多向分化潜能的影响,验证冻存后hCDMSC作为组织工程种子细胞的可行性.方法 用胶原酶和胰蛋白酶法消化胎盘组织基蜕膜,传代培养,取第4代细胞置于液氮深低温(-196 ℃)条件下冻存3个月后复苏,采用MTT法测定复苏hCDMSC的增殖活性,茜素红...     

深低温保存前后的单采血小板体外功能和细菌污染情况的研究

目的 探讨在常温（22±2℃）震荡下不同保存时期的单采血小板冰冻保存后功能指标的变化.方法 对冰冻保存前后的单采血小板进行血小板计数、pH、回收率、黏附率、聚集强度和血小板第3因子（PF3）活性及细菌污染情况进行检测.结果 冰冻保存后的血小板计数、pH值、粘附率、聚集强度及PF3活性、细菌污染情况和冰冻前比较无显著性差异,回收率符合要求.结论 冰冻保存后的单采血小板仍具有良好的功能活性.     

循环温差法测定生物组织活性的实验研究

如何测定低温损伤后的生物材料活性是低温保存和低温医疗领域中的重要课题.本文提出了循环温差法测定生物组织活性的新方法,并进行了初步的实验研究,给出了定量评价生物组织活性的数学关联式.实验证明,该方法所采用的测试装置简单,易于操作,结果稳定可靠,重复性较好.本文最后指出了进一步的改进方法.