肝细胞的低温保存及应用研究进展

随着生物人工肝和肝细胞移植研究的开展，对肝细胞的需求不断增加，迫切需要有效的肝细胞长期保存方法以促进其在临床上的应用。低温保存是目前保存肝细胞的重要方法，其影响因素较多，主要有低温保存肝细胞的形式冻存液的组成、降温、复温速度，复苏肝细胞的功能检测及应用范围等。本对国内外该方面的最新进展进行踪述。     

长时段深低温保存血管和骨组织超微结构观察及力学研究

目的:报道长时段深低温冷冻保存血管和骨组织的超微结构及力学变化。方法:采用-196℃液氮保存18个月人的带血管骨段标本,复温后取其血管、骨组织,行光镜、透射电镜观察和力学测试,测试结果与新鲜标本对照组进行比较。结果:电镜下3种不同口径血管组织的3层结构都有不同程度损伤,以内皮细胞损伤最为严重,主要表现为内皮细胞层严重脱落,基膜裸露,内皮细胞多已坏死,核内染色质均质化,胞膜不完整,胞浆内细胞器减少或胞浆崩解;中膜平滑肌细胞的线粒体有不同程度水肿,嵴减少或消失;外膜滋养血管内皮细胞脱落。骨胶原原纤维排列整齐,分布均匀、致密,周期性横纹清晰可见,但骨细胞多已退变或坏死。18个月组与对照组胫骨的压缩强度极限为(71.23±6.60)MPa和(88.80±9.10)MPa。结论:长时段液氮保存带血管骨段,血管组织损伤严重,骨的压缩极限强度有明显差异(P<0.01)。     

深低温长期保存角膜穿透性角膜移植术临床报告△

目的评价深低温长期保存角膜在穿透性角膜移植术中的应有价值。方法应用深低温长期保存21～1230d的供眼角膜行穿透性角膜移植术34例(35眼)。结果术后随访2～30(平均7.3±4.0)mo,角膜植片透明率达82.9％,部分患者视力改善,角膜植片内皮细胞密度达903～3083.7个     

不同处理方法同种异体半月板移植修复兔膝关节软骨的远期效果比较

背景：目前尚无理想的材料来替代半月板，半月板移植就成为半月板损伤保留半月板功能较为可行的治疗方法。目前移植半月板的保存方法主要是新鲜半月板、低温保存的半月板和冻干保存的半月板。 目的：观察经不同方法处理后的兔半月板移植后的远期效果差异。 方法：成年新西兰大白兔70只，其中30只作为供体取出半月板。将原有的半月板切除制成半月板缺失模型。随机将大白兔分为4组，每组10只。①半月板缺失组作为对照。②新鲜半月板组移植新鲜半月板。③低温半月板组移植低温保存的半月板。④冻干半月板组移植冻干保存的半月板。30个供体其中10个行新鲜移植，另20个分别行低温保存、冻干保存1周后移植。术后12个月处死兔取标本，进行动物一般观察。半月板大体观察和组织学观察。 结果与结论：移植兔切口均愈合好，无死亡。大体观察：新鲜半月板移植组外形、质地和弹性均接近正常半月板。胫骨平台覆盖好，胫骨平台和股骨髁软骨无额外磨损。低温保存、冻干保存半月板移植组半月板边缘愈合好，但是体积缩小，弹性差。胫骨平台有部分没有半月板覆盖。病理观察：新鲜移植半月板切片显示胶原纤维排列、软骨细胞的形态、数量和分布，均与正常半月板相近，而低温保存、冻干保存半月板移植组的半月板切片显示胶原纤维稀疏，数量较新鲜移植的半月板少。结果表明，同种异体半月板移植能够成活，并且能具有一定的结构和功能，防止膝关节退变。但是以新鲜移植的半月板效果最好。低温保存和冻干保存的半月板术后1年出现不同程度的退变和体积缩小。     

组织工程骨-80 ℃低温保存的初步研究

目的：了解不同冻存方法对组织工程骨生物活性的影响。方法：以骨髓基质干细胞（marrow stromal cells，MSCs）复合部分脱蛋白骨培养制备组织工程骨，实验分为：A组，组织工程骨用添加冻存保护荆的保存液保存；B组，组织工程骨用不添加冻存保护荆的保存液保存；C组，组织工程骨未行低温保存；D组。单纯MSCs培养。A组和B组的组织工程骨于-80℃深低温保存3个月，3个月后复温冻存的组织工程骨。扫描电镜观察MSCs的黏附和分布情况，MTT法检测细胞活力，对硝基苯磷酸法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AIP）活性，流式细胞仪分析细胞周期。结果：MSCs在材料表面和孔隙内均可黏附和分布，黏附于材料的细胞活力大小依次为C组〉A组〉B组（P〈0．01，P〈0．05）。黏附于材料的细胞AIP活性大小依次为C组〉A组〉B组（P〈0．01）。各组细胞周期未见明显变化，未见异倍体细胞。结论：选择适宜的冻存保护荆对组织工程骨的生物活性有一定的保护作用。     

深低温保存羊膜在结膜重建中的临床应用

目的：评价深低温保存羊膜移植进行结膜重建的手术疗效，并分析羊膜移植结膜重建手术成功的基本条件和具体手术方法与操作要点。方法：用深低温保存的羊膜治疗43例结膜整形患者。无眼球结膜囊狭窄10例，大面积结膜肿瘤13例，睑球粘连9例，复发性胬肉7例，并尝试对少数病例（4例）义眼座暴露，进行羊膜修补。结果：随诊6－18个月，总治愈率达88．64％，无眼球结膜囊狭窄的治愈率为80％，睑球粘连的治愈率达88．89％，大面积结膜肿瘤和复发性胬肉的治愈率皆为100％，而应用深低温保存羊膜修补义眼座暴露，治愈率只有50％，结论：深低温保存的羊膜是一种有良好发展前景的生物材料，羊膜移植结膜重建术后整形外观良好，在具体实践中，结膜重建的手术效果不仅与羊膜的制备和保存有关，而且受手术方法的选择，手术操作技巧以及术后处理的强烈影响。     

中药血清药理学的方法研究—含药血清低温保存和血清灭活的影响

以含头风饮（TFY）血清抗血小板释放5－HT和阻滞内皮细胞钙通道作用（^14C-5HT释放法和^45Ca^2 摄取法）为指标，探讨了含药血清低温保存和血清灭活的影响。结果显示：含药血清较长时间低温保存后药效均显较低（P＜0．01）；血清灭活后使其药效作用有所提高，但无明显差异。提示含药血清进行低温冰冻保存仍影响其药效，进行血清药理学实验以使用新鲜血清和保存时间较短的含药血清为宜。     

肝脏低温保存-再灌注期间肝细胞凋亡及其与Bax基因蛋白相关性的研究

目的　研究临床肝移植过程中供肝低温保存-再灌注期间肝细胞凋亡及其相关机制。方法　应用细胞凋亡原位末端标记法并结合电镜观察,检测低温保存时间分别为0(A组)、3(B组)、6(C组)、9(D组)h的4组兔肝脏在低温保存-再灌注过程中肝细胞凋亡情况。同时,对各组肝脏再灌注前后肝细胞内Bax基因蛋白表达进行测定。结果　A、B、C、D各组肝脏于低温保存后的再灌注60min时,组织内可见明显的肝实质细胞凋亡；其凋亡细胞数量(1×10     

深低温保存角膜缘干细胞活性实验研究

目的：评价深低温冷冻保存兔眼角膜缘干细胞活性。方法：１２只（１２眼）新西兰白兔，制备２ｍｍ周边角膜和２ｍｍ球结膜的环形浅层角膜缘植片及解膜干细胞缺乏眼表疾病模型。角膜缘植片通过程序温仪程序降温后－１９６℃深低温保存，３０天和６０天后行角膜缘自体移植。组化及免疫组化证实深低温保存的角膜缘干细胞活性。结果：角膜干细胞缺乏导致角膜上皮愈合延迟，上皮结膜化，ＰＡＳ染色阳性，ＡＥ５染色弱阳性；基质水肿，角膜     

深低温保存兔角膜细胞体外组织培养的实验研究

为探讨“简化四步法”深低温冷冻保存角膜材料的角膜细胞活性，采用体外组织培养技术对深低温保存的兔角膜的上皮细胞、内皮细胞和基质细胞进行培养和观察。结果表明，上皮细胞一般在培养5－7天贴壁，形成单层，形态呈不规则形或多边形；2周以后逐渐出现老化和脱落现象，仅能传1代。内皮细胞2－3天可贴壁，形成单层，但未能显示六边形，仅为不规则形或圆形，不易传代。基质细胞贴壁时间在培养后1周，形成整齐和密度较高的单层，能传2－3代。结论：“用简化四步法”长期深低温冷冻保存的角膜材料细胞尚有良好的活性，证实可用于角膜移植。