海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

低温保存血小板的制备与质控效果的观察

本研究探讨建立系统的二甲亚砜 (DMSO)低温保存血小板的制备及质控的技术和方法 ,以保证低温保存血小板的质量。采取的方法 :①DMSO在使用前进行超滤替代消毒 ;②采血后 6小时内对血液进行离心 ,将血袋管道系于套桶上方 ;③以 4 80×g的相对离心力 ,离心加速 9档 ,减速 4档 ;④分离血小板时流速不能太快 ,80 - 10 0ml富含血小板血浆应在 1分钟左右分完 ;在加入DMSO时速度以 1毫升 /分钟为宜 ;加好DMSO后放入 - 80℃冰箱保存 ;临床输注前将血小板置于 38- 4 0℃的循环水浴中 ;⑤融化后进行血小板计数、白细胞和红细胞计数 ,检测HBsAg、抗 HCV、抗 HIV、梅毒特异性抗体 ,测定丙氨酸氨基转移酶 (ALT)并进行细菌培养。结果表明 :共制备14 80 0单位低温保存血小板 ,其中机采血小板 80单位。对其中 30 0单位进行质控。手工分离血小板计数≥ 2 .4×10 10 /单位 ,平均得率在 70 %以上。机采血小板计数≥ 2 .5× 10 11/单位。手工分离血小板红细胞污染数≤ 1× 10 9个/单位 ,白细胞污染数≤ 5× 10 7个 /单位。融化后进行细菌培养 ,无细菌生长 ;ALT均在正常范围内。患者输注后具有明显的止血作用。结论 :本方法制备的手工分离和机采低温保存血小板质量可靠 ,临床应用效果良好。     

自制多脏器保存液对大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响

背景：在睾丸移植过程中,低温保存和缺血可导致睾丸产生氧自由基而损伤睾丸组织。目的：观察自制多脏器保存液对低温保存大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响。方法：采用自制多脏器保存液和UW液低温保存大鼠睾丸,分别于保存24,48,72h时切取睾丸,测定睾丸组织内的总抗氧化能力和一氧化氮合酶活性。结果与结论：自制多器官保存液低温保存各时点大鼠睾丸一氧化氮合酶活性和总抗氧化能力与UW液组比较差异均无显著性意义（P〉0.05）。表明自制多脏器保存液能明显减轻低温保存大鼠睾丸氧自由基损伤,其作用与经典的美国威斯康星大学UW保存液基本相当。     

玻璃化冷冻人卵巢组织形态学研究

目的：探讨玻璃化冷冻及体外培养对人卵巢组织内各级卵泡的形态影响。方法采用液氮直接覆盖玻璃化冷冻（DCV ）方法冷冻保存成人卵巢组织,复苏后行体外培养,观察卵巢组织中卵泡的形态学改变。结果新鲜培养组与新鲜组、冷冻培养组与冷冻组相比,原始卵泡所占比例明显下降,初级卵泡和次级卵泡构成比显著增加（P＜0．05）;新鲜培养组较新鲜组形态正常的原始、初级、次级卵泡比例降低（P＜0．01）;冷冻组形态正常的初级、次级卵泡比例均低于新鲜培养组（P＜0．05）;冷冻培养组形态正常的次级卵泡比例低于新鲜培养组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 DCV方案卵泡形态结构有一定损伤,体外培养有一定修复作用。     

白木香种子的超低温保存研究

【目的】探讨白木香种子长期保存的方法。【方法】将不同含水量的白木香种子放置在液氮罐(-196℃)中保存55 d后取出,测定其发芽率,并考察冷冻方法对其发芽率的影响。【结果】含水量为16.30%的种子发芽率完全丧失;含水量为13.02%、9.34%的种子发芽率大大降低;而含水量为7.35%的种子仍能保持较高的发芽率。速冷的白木香种子比缓冻的发芽率高。【结论】含水量为7.35%的白木香种子置于液氮中保存为一种安全、有效的长期保存方法。     

去颗粒方法对卵母细胞冻融的影响

目的:探讨去除卵母细胞周围部分颗粒细胞对冻融后卵母细胞发育潜能的影响。方法:将来源于行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者捐赠的43枚多余成熟卵母细胞(MⅡ期)随机分为A、B两组,在不同条件下进行慢速冷冻法冻融。根据不同的去除卵母细胞周围部分颗粒细胞的方法将卵母细胞分为两组,A组:21枚,透明质酸酶消化法去颗粒;B组:22枚,机械法去颗粒。观察不同的去颗粒方法对冻融后的卵母细胞存活率、受精能力及胚胎早期发育力的影响。结果:A组存活率(52.38%vs 77.27%)、受精率(63.64%vs 70.59%)及卵裂率(57.14%vs 75.00%)均略低于B组,但无显著性差异;两组优质胚胎率(50.00%vs 55.56%)、桑葚胚率(25.00%vs 22.22%)及囊胚率(25.00%vs 11.11%)也均无显著性差异(P>0.05)。结论:不同的去颗粒方法不影响卵母细胞冻融后的发育潜能。     

冷冻胚胎复苏878周期临床分析

胚胎冷冻可以合理限制移植胚胎数,降低多胎妊娠率,提供再次移植的机会,从而降低了再次超排卵的费用.此外,对中-重度卵巢过度刺激综合征不宜移植者,将胚胎全部冷冻,可以在以后非刺激周期进行冷冻胚胎移植,以减少周期撤销率及卵巢过度刺激综合征的发生率.     

RhD阴性血液冷冻保存及意义

Rh血型系统的临床意义仅次于 ABO血型系统 ,我国汉族人群中 Rh阴性者仅占 3‰～ 4‰ [1 ] ,为了及时向临床提供 Rh D阴性血液 ,周口市中心血站于 1999- 0 1始对所采集的无偿献血者的血液进行 Rh血型筛查 ,至 2 0 0 3- 0 9共查出 15 0人次 ,并建立了 Rh血型档案 ,于 2 0 0 2 - 0 9开展了红细胞冷冻保存项目 ,现报告如下。1　对象和方法1.1　对象　自 1999- 0 1我站检验科用单克隆 lg M lg G抗 - D试剂普查无偿献血者血液 132 6 10 U(2 0 0 ml为 1U) ,筛查出的Rh阴性的反应者 ,再用 3种不同批号的试剂采用菠萝酶法和抗人球蛋白法排除 D…     

各种心肌保存液对鼠心低温保存效果的形态学观察

目的 研究在冷缺血期3种液体对鼠心保存的效果。方法 将离体鼠心分别用HTK液，UW液及St.ThomasⅡ液灌注并4℃冷冻保存6h。利用离体鼠心非循环式Lan-gendorff灌流功能测定模型，复灌1h后，取心肌组织做心镜电镜观察。结果 经过HTK液保存后的鼠心细胞损伤较轻，UW液鼠心细胞损伤较重，但冠脉血管内膜剥脱较重。St.ThomasⅡ液鼠心细胞损伤最生。结论 HTK液心肌保存效果最好，高钾对血管内皮有损害。     

冻融人脐血树突状细胞瘤苗的生物学特征

目的 利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞和食管癌细胞融合瘤苗,低温冻存,研究冻融后融合瘤苗的生物学特征.方法免疫磁珠法分离脐血CD34 干细胞,多种细胞因子联合诱导扩增为成熟树突状细胞(DC).聚乙二醇(PEG)融合DC与食管癌细胞EC109,免疫磁珠法筛选阳性克隆EC109-DC为融合瘤苗.-80℃低温冻存;流式细胞术鉴定冻融前后融合瘤苗免疫表型;绘制冻融后融合瘤苗生长曲线;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定EC109-DC融合瘤苗诱导T淋巴细胞体外特异性抗肿瘤免疫应答能力. 结果 融冻后融合瘤苗EC109-DC可在体外继续培养成长,高表达CD80、CD83、CD86,增殖活性较新鲜融合瘤苗稍低,但两者相比无统计学意义(P>0.05);融冻后融合瘤苗EC109-DC体外能诱导CTL细胞对EC109食管癌细胞的产生特异杀伤作用,其活性与新鲜融合瘤苗相比,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 融冻后融合瘤苗EC109-DC仍保存其刺激免疫细胞活化的分子表型,可望为食管癌-DC融合瘤苗的保存方法提供一定的实验依据.