冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应

目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P＞0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.     

多功能医学实验平台的研制及在体外细胞温度效应观察中的初步应用

目的 研制一种多功能医学实验平台.方法 选用氧气、二氧化碳、湿度、温度传感器、控制器及效应器构建多功能医学实验平台并用于293细胞、PK15细胞受温度效应影响的试验.结果 该多功能医学实验平台可对温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度进行调节和控制,温度调控范围-20～ 60 ℃, 二氧化碳浓度调控范围0%～20%,氧气浓度调控范围0%～100%;湿度调控范围室温湿度至98%.采用该实验平台观察不同温度对293细胞、PK15细胞影响时发现,在10 ℃和20 ℃时,细胞出现胞体皱缩、突起变长等特征,细胞停止增殖.结论 该多功能医学实验平台可调节温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度,可用于细胞低温保存等移植相关实验.     

肝脏低温保存肝血窦变化的实验观察

目的：探讨低温保存肝血窦超微结构的变化及其在肝微循环障碍中的作用，方法：将63只大鼠肝脏分别在低温UW液中保存0（对照组）、2、8、16、24、32和48h，然后对肝血窦进行电镜观察，结果：肝血窦内皮细胞在保存2、8h后，筛板小孔扩大，融合成许多大洞隙，16、24h细胞胞明显回缩，呈树根状，32，48h似索网状，部分内皮细胞突起，脱落，肝细胞微绒毛在保存8h后出现肿胀并形成膜浆泡从扩大的内皮小孔突入血窦；随着保存时间延长，膜浆泡增多，变大并脱落或破裂，结论：肝血窦内皮细胞的低温保存损伤和膨入血窦内的膜浆泡可引起肝微循环紊乱，导致肝血流和肝功能障碍。     

深低温保存兔角膜神经形态的观察

采用氯化金染色、乙醛酸诱发荧光（ＧＩＦ）和乙酰胆碱酯酶染色（ＡＣｈＥＳ）技术分别对兔深低温保存角膜中总体神经、肾上腺能和乙酰胆碱能神经形态进行系统观察。结果表明，深低温保存角膜的氯化金染色和ＡＣｈＥＳ神经形态与正常角膜神经相一致，但ＧＩＦ却为阴性。提示在光镜下，深低温保存角膜过程对角膜神经不造成形态损害。     

自体原位移植肾缺血再灌注损伤模型的建立与环孢素A对移植肾的保护作用

目的建立一种新的移植肾缺血再灌注损伤(IRI)动物实验模型并寻找一种新的移植肾保护方法。方法40只兔随机分为A组(生理盐水对照组)、B组(单纯灌注液组)、C组[环孢素A(CsA)+灌注液组,CsA浓度为0.01‰,W/V]、D组(CsA+灌注液组,CsA浓度为0.03‰,W/V)。用套管针穿刺左肾动、静脉,灌注肾脏。原位低温保存2h后,切除右肾并开放左肾血流使左肾复灌。于术后6、24h分别取血标本,24h后取左肾标本,测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr),TUNEL法检测分析左肾小管上皮细胞凋亡率,免疫组织化学法测定左肾组织HSP70的表达。结果D组6、24hBUN为(8.60±0.25)mmol/L、(7.99±0.14)mmol/L;Cr为(79.90±1.37)μmol/L、(78.98±1.66)μmol/L,细胞凋亡指数为0.075±0.035,明显低于其他各组;HSP70表达为(0.211±0.025)μm2,明显高于其他各组。结论本模型能客观反映移植肾缺血再灌注损伤状态,0.03‰CsA复合肾灌注液能明显降低移植肾缺血再灌注损伤。     

断肢（指）保存的研究进展

外伤所致肢（指）体离断是临床工作中常见的急诊创伤。在急诊创伤中,手外伤占15．0％-28．6％,顾兴初报道肢体离断伤占全部手外伤的19．3％,     

同种带瓣主动脉和带瓣肺动脉补片在儿童复杂先心病的应用

１９８９年１１月至１９９２年７月期间，应用低温保存同种带瓣大动脉纠治儿童复杂性先心病１２例。病人年龄２～１６岁（７．２±３．７岁），体重８～３１．５ｋｇ（１８．９±６．６ｋｇ）。诊断为法乐氏四联症（ＴＯＦ）８例，其中伴肺动脉瓣闭锁３例；冠状动脉畸形１例；严重肺动脉发育不良２例；左肺动脉缺如２例。大动脉错位伴室间隔缺损和肺动脉狭窄２例；永存动脉干畸形（Ⅱ型）２例。８例应用同种带瓣管道作右室流出道与肺动脉连接，４例应用同种带瓣肺动脉片作跨瓣环右室流出道扩大术。本组死亡１例，最长随访时间３年。文中对同种带瓣管道的取材方法，保存技术及应用方法作了讨论。     

钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用的研究

目的：研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下（0-4℃）的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机制。方法：胶原酶消化法制备分离的成人肝细胞,钙离子荧光探针Flou-3标记,流式细胞仪检测。结果：低温保存下,细胞内游离钙迅速升高,逐渐达到稳态水平,随细胞内钙离子的升高,细胞的存活率也逐渐下降,但在含0.5mmol/L CaCl2的保存液组,保存效果明显好于其它两组;在含1.5mmol/L CaCl2的保存液组,继发的钙离子超载峰值出现早,而且要高于原发的钙超载峰。结论：低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源,继发超载是缺血再灌注损伤的主要原因。     

不同冷冻载体对小鼠MⅡ期卵母细胞玻璃化冻、融技术影响

目的比较不同冷冻方法对小鼠成熟卵母细胞的冻存率和冻后发育潜能的影响,试图建立玻璃化冷冻技术平台,为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供理论与技术参考。方法以昆明品系小鼠为实验材料、以玻璃化冷冻技术为基本方法冻存小鼠成熟卵母细胞。实验分为新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又再分为开放式拉长麦管(OPS)组、自制麦管组和冷冻叶片(cryoleaf)组,比较其存活率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组之间受精率差异无显著性,卵裂率差异亦无显著性(P>0.05),但是囊胚形成率之间差异有显著性(P<0.05);OPS组与自制麦管组之间存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);OPS组与cryoleaf组比较存活率之间差异有显著性(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);自制麦管组与cryoleaf组之间存活率之间差异有显著性(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异无显著性(P>0.05)。结论OPS法和cryoleaf法均可以用于冷冻昆明小鼠卵母细胞,但cryoleaf法更安全可靠。     

改良后的家兔动脉深低温保存实验研究

目的：为探讨家兔动脉在改良的深低温保存后，其作为血管材料替代物的优越性。方法：无菌条件下取新鲜兔动脉，分别给予改良后的营养液经慢速深低温冷冻和快速深低温冷冻处理，6个月后异体和自体移植，12周后，取移植的血管组织，观测其组织活性，组织形态、血管通畅率。结果：改良的营养液保护的血管经慢冻法处理后与自体血管活性相近，经改良的营养液保护的血管，移植前后血管内膜的连续性，血管的组织结构良好；慢冻法处理的血管通畅率比速冻法处理的高，与自体移植组相当。结论：复方氨基酸可以替代传统冷冻保护液中的小牛血清用于血管的深低温保存，降低了该保存技术的成本；快速深低温冷冻保存的动脉血管活力移植效果不如慢速冷冻处理的异体动脉好。