人鼻型NK/T细胞淋巴瘤的裸鼠移植与传代

鼻型NK／T细胞淋巴瘤是最常见的淋巴结外非B细胞淋巴瘤，在东南亚国家和地区发病率较高，具有特殊临床表现、免疫表型和生物学行为，肿瘤组织均存在不同程度的凝固性坏死和黏膜溃疡形成。实际工作中，局部活检组织多较小，除做常规病理诊断和免疫表型检测外所剩无几，致使对该肿瘤的研究工作难以深层次进行。为此，建立该肿     

广州地区HCMV低传代临床病毒株UL143基因的多态性研究

目的研究广州地区人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离株UL143基因的多态性。方法对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株进行HCMV UL143基因全序列扩增，扩增产物克隆到pMD18-T载体上测序，并将其序列与GenBank中公布的其它临床分离株UL143基因一起进行分析。结果D3株UL143基因因碱基缺失形成多处终止密码无法产生有功能的蛋白；Toledo株UL143基因开放读码框由279个核苷酸组成．编码蛋白由92个氨基酸残基组成：其它临床分离株UL143基因开放读码框均由252个核苷酸组成。DNA序列比较保守，变异均为碱基替换。编码蛋白由83个氨基酸残基组成，氨基酸序列也很保守，不同临床分离株氨基酸变异率为1．2％-2．4％：HCMV UL143蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株之外的所有分离株中均高度保守．没有缺失或新增；不同临床分离株UL143蛋白二级结构有所不同；除Toledo株外，其余分离株UL143蛋白的等电点均为8．75。结论临床低传代分离株HCMV UL143基因DNA及其编码产物的氨基酸序列极为保守。但仍存在一定多态性。     

人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

Vero细胞传代过程中致瘤性的检测

目的 为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据.方法 对Vero细胞进行传代与冻存,并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测,同时对不同代次Vero细胞的蛋白质表达进行差异性分析.结果 Vero细胞传代至270代并建立了14个细胞冻存库;不同代次Vero细胞体外与体内致瘤性检测结果均为阴性;200代以上的Vero细胞蛋白质表达水平有所变化.结论 Vero细胞传代过程中虽然体外与体内致瘤性检测结果为阴性,但蛋白质组学分析有差异性蛋白表达,这为Vero细胞传代过程中的遗传安全性评价提供了实验参考.

Abstract：

Objective To produce an experimental information for the safety assessment of Vero cells during subculture. Methods Passage and freeze on Vero cells, and Vero cells in different passages in vitro and in vivo tumorigenicity were tested. The protein expression of different Vero cell passages was analyzed. Results Vero cells passaged to p270 and 14 cell banks were developed and stored for future evaluation. In vitro and in vivo tumorigenicity Lest results of Vero cells in different passages were negative. Conclusion Although the tumorigenicity test results in vitro and in vivo process were negative, the protein expression of more than p200 Vero cells were changed, which produced the experimental reference for the safety evaluation of the process during the Vero cell passage.     

人胚肺细胞对人冠状病毒的敏感性

人冠状病毒72-62和73-50干燥毒种,用人胚器官和原代人胚肾细胞合管培养未能引起细胞病变,而将病毒液接种到人胚器官细胞或人胚肺传代细胞第一代就能引起明显的细胞病变。新传代病毒经电镜及中和试验鉴定确属人冠状病毒。实验结果证明人胚肺传代细胞比原代人胚肾细胞敏感,为进一步研究人冠状病毒提供了一株敏感的细胞。     

冻存和传代后脂肪间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：脂肪间充质干细胞是一种成体多能干细胞,将成为一种重要的用于心肌组织工程和心脏病细胞治疗研究的种子细胞。 目的：观察脂肪间充质干细胞经液氮冻存和长期传代后向心肌样细胞分化的能力。 设计、时间和地点：对比观察,于2007-09/2008-06在解放军军事医学科学院卫生装备研究所组织工程实验室完成。 材料：大鼠脂肪间充质干细胞,来自2月龄Wistar大鼠附睾脂肪垫。 方法：第3代大鼠脂肪间充质干细胞液氮冻存6个月,复苏后用10 μmol/L 5-氮胞苷诱导,2周后检测细胞分化状况。另外,将间充质干细胞长期传代培养,用10 μmol/L 5-氮杂胞苷处理,2周后检测细胞分化状况。以未经5-氮杂胞苷处理的脂肪组织间充质干细胞为对照。 主要观察指标：免疫组织化学染色观察α-肌节型肌动蛋白、骨骼肌快肌肌浆球蛋白(骨骼肌细胞特有)和GATA-4的表达。 结果：液氮冻存后的脂肪间充质干细胞,经诱导后α-肌节型肌动蛋白和GATA-4免疫组织化学染色均为阳性,骨骼肌快肌肌浆球蛋白免疫组织化学染色为阴性;第6代脂肪间充质干细胞,经诱导后免疫组织化学染色结果与冻存后相同;第9代脂肪间充质干细胞,经诱导后α-肌节型肌动蛋白、骨骼肌快肌肌浆球蛋白和GATA-4免疫组织化学染色均为阳性。对照组均为阴性表达。 结论：脂肪间充质干细胞冻存后可向心肌样细胞分化;长期传代的脂肪间充质干细胞也能向心肌样细胞分化,但经5-氮杂胞苷诱导也可能同时向骨骼肌样细胞分化。     

不同培养代数大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞转分化能力的比较

为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导分化,随后运用免疫荧光法和免疫印迹法检测诱导细胞中的神经元样细胞。结果显示骨髓基质细胞体外培养1至3代时能够被诱导分化为神经元样细胞,培养至第7代时丧失转分化为神经元样细胞的潜能。上述结果提示:传代次数增多将引起BMSCs自发分化,使其向神经元样细胞转分化的能力下降,因而BMSCs培养至第3代时适宜进行诱导分化。     

对湖南省通道县侗族医药队伍的形成和传代形式之考证

通过作者长期的研究，查阅大量侗族医药古籍藏书，走访侗乡名老草医，核对考证了湖南省通道县侗族医药队伍的形成和传代形式，揭示了鲜为人知的侗乡医药的端倪。     

新生大鼠海马神经干细胞的培养与传代

目的：探讨新生大鼠海马神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）体外分离培养的条件和传代的新方法。方法：从新生大鼠海马中分离神经干细胞,采用无血清培养技术,在表皮生长因子（epidermalgrowthfactor,EGF）、碱性成纤维生长因子（basic fibroblastgrowth factor,bFGF）和B27联合作用下使其不断增殖克隆,采用神经小球分离试剂盒进行传代,利用免疫荧光染色的方法对培养的细胞进行鉴定。结果：从新生大鼠海马分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球,并能稳定传代,呈nestin阳性表达,且具有多向分化能力。采用神经小球分离试剂盒传代的细胞球生长快,数量多,体积大,折光性好。结论：利用无血清技术和特定生长因子,可以使来源于新生大鼠海马的NSCs在体外扩增,利用大鼠神经小球分离试剂盒可以有效地进行传代,稳定高效地培养出NSCs。     

人脑膜瘤细胞的原代培养

目的 建立一种人脑膜瘤细胞原代培养简单有效的方法.方法 新鲜脑膜瘤组织取自福建协和医院神经外科25例连续治疗的脑膜瘤手术病人,以胰蛋白酶消化法分离细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行培养并传代,显微镜下观察脑膜瘤细胞生长状况.上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)对脑膜瘤细胞进行免疫组化鉴定.结果 用胰酶消化法培养脑膜瘤细胞,方法简单,细胞形态典型;EMA、Vimentin表达阳性,鉴定为脑膜瘤细胞.结论 单一的胰蛋白酶消化法是一种简单有效的脑膜瘤细胞原代培养的方法.