携带不同耐药基因对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌适应性及毒力的影响

目的 探讨携带不同耐药基因对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的生长适应性及毒力作用的影响。方法 通过PCR方法扩增碳青霉烯类耐药基因（blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaOXA、blaIMP）及β-内酰胺类耐药基因（blaTEM、blaSHV、blaCTX、blaLAP）,测序确定基因型。扩增7个管家基因rpoB、gapA、mdh、pgi、phoE、infB和tonB,测序确定基因型并获得菌株ST类型。根据所携带的碳青霉烯类耐药基因不同,将菌株进行分组,在不同亚胺培南抗生素浓度（0、2、8 mg/mL）下培养细菌,绘制生长曲线,比较各组细菌的生长适应性变化;通过线虫侵染模型用CRKP感染线虫,绘制线虫生存曲线,比较各组细菌对线虫的毒力作用。结果 无抗生素压力下各组菌株生长适应性相似;在2 mg/mL亚胺培南培养基中,双抗性基因组中blaKPC+blaNDM组、blaIMP+blaOXA组生长适应性最强,单抗性基因组中blaIMP组生长适应性最低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。在8 mg/mL亚胺培南培养基中,双抗性基因组中blaKPC+blaNDM组和blaNDM+blaOXA组生长适应性最强,且分别强于单抗性基因组blaKPC组和blaOXA组;单抗性基因组中blaOXA组生长适应性最弱,blaKPC和blaNDM生长最快,差异具有统计学意义（P＜0.05）。在无抗生素压力下,各组菌株对线虫毒力作用有所不同,blaKPC组、blaKPC+blaNDM组和blaIMP+blaOXA组生存曲线右移,线虫中位生存时间延长,菌株毒力减弱;blaIMP+blaNDM组生存曲线左移,线虫中位生存时间缩短,菌株毒力增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 携带不同的耐药基因以及携带单个或多个耐药基因均会对菌株的生长适应性和毒力产生不同的影响     

临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征分析

目的 了解临床分离的非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征。方法 收集2014-2015年北京友谊医院4-10月肠道门诊分离到的非O1/O139群霍乱弧菌,采用微量肉汤稀释法检测霍乱弧菌对15种抗生素的耐药性;PCR检测霍乱弧菌的毒力相关基因。结果 35株非O1/O139群霍乱弧菌对复方新诺明的耐药率(40.0%)最高,其次是氯霉素(28.5%)和磺胺异恶唑(22.6%),对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢西丁、头孢吡肟及亚胺培南完全敏感。毒力基因检测显示所有菌株均携带hlyA和ompU,hapA(97.1%)、rtxA(91.4%)、Ⅵ型分泌系统T6SS(94.3%~97.1%)、Ⅲ型分泌系统T3SS(80.0%~85.7%)和nanH(62.9%)阳性率较高;主要的毒力基因型为hlyA-rtxA-hapA-ompU-nanH-vasA-vasK-vasH-vcsC-vcsV-vcsN-vspD(40.0%)。结论 临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因多样化,对抗菌药物耐药性较高,需加强腹泻病例中非O1/O139群霍乱弧菌的毒力及耐药监测。     

新生隐球菌荚膜毒力作用的研究进展

新生隐球菌是重要的机会致病真菌,其胞外包裹的荚膜被公认为隐球菌关键的毒力因子.近年来,研究初步证明荚膜有抗吞噬细胞吞噬作用.另外,荚膜在新生隐球菌感染扩散过程中以及诱导宿主细胞凋亡中均发挥了关键的作用.概述荚膜的抗吞噬作用及荚膜在感染扩散中的作用等,对这些机制的探讨将有助于理解新生隐球菌的致病机制,同时为治疗新生隐球菌病提供新的靶位点.

Abstract：

Cryptococcus neoformans is an important conditional pathogenic fungus and capsule is widely acknowledged to be a key virulence factor of it. It has been proved that capsule posseses antiphagocytosis acitivity, and plays an essential role in the dissemination of C. neoformans infection and induction of apoptosis in host cells. The review describes the roles of capsule in antiphagocytic process and dissemination of C. neoformans infection, which will help to better understand the pathogenic mechanism of cryptococcosis and to provide new therapeutic targets for cryptococcosis.     

斑驳病致病基因的研究进展

斑驳病是一种较少见的由黑素细胞发育不良引起的常染色体显性遗传病,典型临床特征是先天性额部中央呈三角形或菱形的白斑和白发.该病具有遗传异质性,大多数斑驳病由kit基因突变引起.遗传分析揭示,kit基因突变点与临床表型关系密切,少数报告表明,可能存在其他因素引起基因型与表型不一致,有学者对该病的常染色体显性遗传特点提出质疑.kit基因编码蛋白属Ⅲ型酪氨酸激酶受体,kit基因突变导致受体酪氨酸激酶功能下降或失活,信号传导功能受损,成黑素细胞在胚胎发育期的增殖和迁移发生障碍,从而导致斑驳病的发生.     

六年间血流感染的金黄色葡萄球菌的分子特征分析

目的 分析上海三级甲等医院2004-2010年血流感染的金黄色葡萄球菌克隆分型特点以及随时间的变化趋势,检测不同克隆株耐药和毒力基因携带情况.方法 收集上海华山医院2004-2010年从不同患者血液样本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌103株,通过苯唑西林MIC测定和SCCrnec基因分型等方法对MRSA进行检测;按照国际通用的多位点保守基因测序(MLST)以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析,采用PCR方法对103株细菌的耐药以及毒力基因携带情况进行分析.结果 103株金黄色葡萄球菌共检出MRSA66株(64.1%),其中SCCmecⅡ型35株,SCCmecⅢ型29株,SCCmecⅣ型2株,MSSA 37株(35.9%).66株MRSA的克隆分型以ST5(33株)和ST239(29株)为主,另外还包括2株ST59.1株ST641,1株ST6;其他克隆型均为MSSA.从2009年开始ST5和ST239克隆株在血流感染中的分离率明显下降(ST5从52.9%降至15.4%;ST239从61.1%降至15.4%),而其他类型以及新出现的MSSA克隆株分离率明显增加(如2009年ST7分离率为41.7%;2010年新出现ST188及ST15等),2010年血流感染的MSSA为84.6%.103株金黄色葡萄球菌mupA耐药基因阳性19株(18.4%),qacA/B耐药基因阳性41株(39.8%),70.6%的ST239杀菌剂耐药基因qacA/B阳性.在这103株血流感染的金黄色葡萄球菌中发现5株动物来源的克隆株,分别为4株ST398以及1株ST9.22个毒力基因除了sasX、lukSF以及arcA外,同一克隆株无论MRSA还是MSSA其毒力基因携带情况无明显差异,但是不同克隆株携带毒力基因有明显的差异.结论 以ST5和ST239为主的MRSA在血流感染中的分离率明显下降,新的MSSA克隆株分离率明显增加,不同的克隆株耐药以及毒力基因的携带情况存在明显差别.     

不同来源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力基因的研究

目的对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染状况进行分析,并通过对MRSA菌株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株毒力基因的检测,分析比较不同金黄色葡萄球菌(SA)的毒力基因分布。方法收集衢州市人民医院2009年1月至2011年6月临床标本分离的MRSA菌株60株,MSSA菌株54株。采用聚合酶链反应(PCR)检测不同标本分离的SA的杀白细胞素(pvl)、肠毒素C(sec)、肠毒素H(seh)、α-溶血素(hla)、β-溶血素(hlb)、黏附素凝聚因子(clfA、clfB)、纤连蛋白结合蛋白(fnbA、fnbB)毒力基因。结果60株MRSA菌株主要分布在神经外科、普外科、小儿科、骨科等病区,其中17株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),43株为医院获得性MRSA(HA-MRSA)。MRSA菌株中pvl的检出率明显高于MSSA菌株,而clfA、fnbA、sec、she的检出率明显低于MSSA。而pvl、fnbA在CA-MRSA中的检出率要高于HA-MRSA。结论临床分离的SA中,MSSA菌株毒力相对MRSA可能更高,而CA-MRSA相对HA-MRSA毒力也较强,他们之间携带毒力基因的差别可能与之侵袭的感染部位相关。     

表皮葡萄球菌纤维蛋白原结合基因(fde基因)的致病性

目的研究表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)的致病性。方法采用同源基因重组技术构建表葡菌fbe基因缺失突变菌株,得到除fbe基因以外遗传背景相同的fbe基因阳性菌株和阴性菌株。然后建立表葡菌致大鼠导管相关性感染模型,比较fbe基因阳性菌株HB与其fbe基因缺失突变菌株HB-ermB体内致病性的差异,同时采用ELISA测定并比较fbe基因阳性和fbe基因阴性两组表葡菌体外与纤维蛋白原的结合力。结果构建获得表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株HB-ermB,并建立大鼠导管相关性感染模型。fbe基因阳性菌株与纤维蛋白原的体外结合力显著高于fbe基因阴性菌株(P＜0．01)。fbe基因阳性表葡菌HB致大鼠导管相关性感染的发生率为100％(15/15),而fbe基因缺陷株HB-ermB仅导致20％(3/15)的大鼠发生感染,经Fisher精确检验法分析HB组感染率明显高于HB-ermB组,差异有统计学意义(P＜0．01)。HB组导管表面、血液及组织中检测到的细菌数明显高于HB-ermB组,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论fbe基因缺陷株致病力较其亲本株明显降低,提示fbe基因为表葡菌的重要致病因子之一。     

Inpatient Proton Pump Inhibitor Administration and Hospital-Acquired Clostridium difficile Infection: Evidence and Possible Mechanism

The incidence of Clostridium difficile infection continues to increase globally. Particularly concerning are hospital-acquired cases that attribute significant morbidity, mortality, and expenditures to the health care system. Proton pump inhibitors, which are widely prescribed and generally considered to have minimal adverse effects, have recently come under scrutiny for positive associations with C. difficile infection development. This article will specifically review the current state of evidence demonstrating a positive association between nosocomial proton pump inhibitor administration and the incidence of hospital-acquired C. difficile infection. In addition, the article delivers state-of-the-art knowledge relative to mechanisms by which proton pump inhibitor exposure may propagate the manifestation of C. difficile infection.     

A Mg-dependent ecto-ATPase is increased in the infective stages of<Emphasis Type="Italic"> Trypanosoma cruzi</Emphasis>

In this work, we describe the ability of living epimastigotes of Trypanosoma cruzi to hydrolyze extracellular ATP. In these intact parasites, there was a low level of ATP hydrolysis in the absence of any divalent metal (2.42±0.31 nmol Pi/h×10⁸ cells). ATP hydrolysis was stimulated by MgCl₂, and the Mg-dependent ecto-ATPase activity was 27.15±2.91 nmol Pi/h×10⁸ cells. The addition of MgCl₂ to the extracellular medium increased the ecto-ATPase activity in a dose-dependent manner. This stimulatory activity was also observed when MgCl₂ was replaced by MnCl₂, but not by CaCl₂ or SrCl₂. The apparent K_m for Mg-ATP^2– was 0.61 mM, and free Mg²⁺ did not increase the ecto-ATPase activity. This ecto-ATPase activity was insensitive to the inhibitors of other ATPase and phosphatase activities. To confirm that this Mg-dependent ATPase was an ecto-ATPase, we used an impermeant inhibitor, DIDS (4, 4.diisothiocyanostylbene 2-2-disulfonic acid) as well as suramin, an antagonist of P₂ purinoreceptors and inhibitor of some ecto-ATPases. These two reagents inhibited the Mg²⁺-dependent ATPase activity in a dose-dependent manner. A comparison among the Mg²⁺-ecto-ATPase activities of the three forms of T. cruzi showed that the noninfective epimastigotes were less efficient at hydrolyzing ATP than the infective trypomastigote and amastigote stages.