雷公藤甲素微透析体外回收率的研究

目的测定雷公藤甲素微透析体外回收率及其影响因素。方法建立微透析样品中雷公藤甲素高效液相色谱法（HPLC）分析方法。利用增量法、减量法对比雷公藤甲素体外回收率,并考察流速、浓度对体外回收率的影响。结果所建立的高效液相色谱法,方法灵敏可靠,在所需浓度范围内线性良好;在同一浓度下,体外回收率随着流速的增大而减小;在同一流速下,浓度的改变对体外回收率的影响不大。结论本研究确定了影响微透析体外回收率因素,反透析法可作为微透析研究雷公藤甲素体外回收率的测定方法。     

雷公藤甲素抑制TGF—β1的促皮肤成纤维细胞增殖效应的实验研究

目的 观察雷公藤甲素抑制转化生长因子-β^1（TGF-β^1）促皮肤成纤维细胞增殖的作用并阐明其作用机制。方法用MTT法分别检测不同浓度外源性TGF—β^1及雷公藤甲素作用下皮肤成纤维细胞增殖的情况以及10^-7mol／L雷公藤甲素对25ng／mlTGF—β^1引起的皮肤成纤维细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测10^7mol／L的雷公藤甲素和25ng／ml的TGF—β^1、作用下皮肤成纤维细胞ERK1／2的磷酸化情况。结果TGF—β^1促进皮肤成纤维细胞的增殖呈浓度依赖性,而雷公藤甲素抑制皮肤成纤维细胞增殖也呈浓度依赖性;10^-8mol／L的雷公藤甲素即可抑制皮肤成纤维细胞增殖（P〈0．01）,10^-7mol／L的雷公藤甲素基本达到最大的效应（P〈0.01）。10^-7mol／L雷公藤甲素可以显著抑制25ng／ml的TGF-β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用及对ERK1／2促磷酸化作用。结论雷公藤甲素能够抑制TGF—β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用。     

雷公藤甲素对TM4细胞氧化应激及PI3K/AKT通路的影响

目的：探讨雷公藤甲素（triptolide ,TP）对TM4小鼠睾丸支持细胞氧化应激、凋亡的影响及相关分子信号调控机制。方法：不同浓度雷公藤甲素对TM4细胞染毒24 h;细胞增殖实验检测雷公藤甲素对TM4细胞增殖的抑制作用;通过2′,7′ 二氯荧光黄双乙酸盐（6-carboxy-2′,7′ dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）探针检测TM4细胞内活性氧水平的变化;Annexin V/PI双染检测雷公藤甲素诱导TM4细胞凋亡变化; Western blot免疫印迹法分别检测凋亡标志蛋白cleaved PARP和PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果：细胞增殖实验提示雷公藤甲素对TM4细胞有显著抑制作用,呈浓度梯度上升［10 nmol/L：（73.77±20.95）%, 100 nmol/L：（51.60±10.43）%, 500 nmol/L：（44.34±5.78）%］;雷公藤甲素处理使细胞内活性氧水平上调（P<0.01）,呈浓度依赖性;给药组TM4细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均上调［对照组：（3.84±1.50）%, 100 nmol/L：（13.04±2.03）%, 200 nmol/L：（16.24±1.34）%, 400 nmol/L：（18.76±3.45）%］,各给药组cleaved PARP表达上调（P<0.01）;给药组TM4细胞中Akt、p70S6K磷酸化水平上调（P<0.01）,mTOR磷酸化水平未见显著变化（P>0.05）。结论：在体外培养条件下,雷公藤甲素可抑制TM4睾丸支持细胞增殖,并诱导TM4细胞凋亡增加,呈浓度依赖性;雷公藤甲素同时可引起TM4细胞中氧化应激水平上调,这可能是其细胞毒性机制之一;雷公藤甲素可导致Akt和p70S6K的激活,磷酸化水平升高,提示PI3K/Akt信号通路可能参与雷公藤甲素诱导的TM4细胞氧化应激反应,激活PI3K/Akt信号通路可能是其分子调控机制之一。     

白鹤冲剂对TNF-α刺激的血管内皮细胞与嗜中性粒细胞黏附的影响

目的:观察白鹤冲剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人外周血嗜中性粒细胞黏附以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和CD18表达及核转录因子NF-κB(NF-κB)的影响,探讨白鹤冲剂治疗血管炎的作用机制。方法:将细胞分为正常对照组、TNF-α组、TNF-α+白鹤冲剂大剂量组、TNF-α+白鹤冲剂小剂量组和TNF-α+雷公藤内酯醇组,共五组。分别进行细胞黏附实验;以细胞ELISA法观察HVVEC的ICAM-1表达;以免疫细胞化学间接法检测CD18表达;间接免疫荧光法观察白鹤冲剂对HUVEC中NF-κB活化。结果:白鹤冲剂能抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的HUVEC中ICAM-1表达和人外周血嗜中性粒细胞CD18表达(P<0.05),同时呈剂量依赖性抑制人外周血嗜中性粒细胞与HUVEC的黏附。结论:通过影响HUVEC中NF-κB活化从而抑制ICAM-1表达和嗜中性粒细胞CD18的表达,最终抑制嗜中性粒细胞与HUVEC的黏附可能是白鹤冲剂治疗血管炎的作用机制。     

雷公藤内酯醇对匹罗卡品致痫大鼠海马神经元的保护性研究

目的研究雷公藤内酯醇对颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法随机将70只生后21 d的雄性Wistar大鼠分为空白对照组10只,癫痫组及雷公藤内酯醇干预组各30只。采用Nissl、FJB染色法观察海马神经元的损伤变化;采用免疫组化法检测海马组织中星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞标志物钙离子结合适配器分子1(IBa-1)的表达状况。结果与空白对照组相比,癫痫组和药物干预组海马神经元损伤明显,GFAP、IBa-1呈高表达;与癫痫组相比,药物干预组海马神经元的损伤较小,GFAP及IBa-1表达较低。结论雷公藤内酯醇对癫痫持续状态后海马神经元的损伤有保护性作用,其作用机制可能与雷公藤内酯醇抑制胶质细胞活化抵抗脑内炎症反应有关。     

MTT法检测雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖的影晌

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法:取第4代对数生长期的牛晶状体上皮细胞培养24h后,加入重组人表皮生长因子(终浓度50μg/L)和不同浓度的雷公藤内酯醇(40,20,10μg/L),分别作用6,12,24,48,72h后,采用MTT法观察雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的影响。结果:不同浓度的雷公藤内酯醇,于不同时间作用在处于增殖状态的LECs,其增殖抑制率升高呈现明显的时间及剂量依赖性。结论:雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用在防止后囊混浊方面有广阔的前景。     

雷公藤内脂醇对SW480细胞的生长抑制作用

目的观察雷公藤内酯醇(Tritolide,TL)对体外培养的SW480细胞(人结直肠癌细胞)的诱导分化机制,为人结直肠癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测SW480细胞周期进程及凋亡率,相差显微镜观察不同浓度的TL对SW480细胞形态学改变,电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果不同浓度的TL对SW480细胞增殖均有抑制作用,具有明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,细胞数减少,细胞圆缩,电子显微镜下细胞高度空化,线粒体肿胀,可见凋亡小体。结论TL对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,阻止SW480细胞G1期向S期的转化进程并诱导SW480细胞凋亡及超微结构改变。     

雷公藤甲素对大鼠肺切除加野百合碱诱导肺动脉高压的影响

目的 观察雷公藤甲素(TL)对大鼠左肺切除加野百合碱所致肺动脉高压和右心室肥厚的影响作用. 方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、TL连续治疗组、安慰剂1组、TL延迟治疗组和安慰剂2组.采用光镜、图像分析和免疫组织化学方法,观察各组大鼠肺动脉平均压,右心室/(左心室 室间隔)质量比,肺小动脉管壁百分比,肺小动脉无肌性动脉肌化程度,新生内膜所致血管阻塞计分的变化.结果 ①模型组各指标均高于正常组(P＜0.01).②两治疗组各指标均小于相应两安慰剂组和模型组(P＜0.05).③两治疗组之间除肺小动脉无肌性动脉肌化程度外其余各指标比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 雷公藤甲素对肺切除加野百合碱所致肺动脉高压和右心室肥大有逆转作用,且对肺动脉高压形成前和形成后均有作用.     

雷公藤药材存贮期间成分变化的研究

目的研究雷公藤药材中活性成分之一雷公藤甲素的稳定性。方法以甲醇-水为流动相,采用HPLC梯度洗脱法,测定了雷公藤药材的根、枝、叶中雷公藤甲素在不同存贮期的含量。结果雷公藤甲素在雷公藤药材中的含量随着存贮时间的增长而下降。结论雷公藤甲素在雷公藤药材中有不稳定现象存在。      

雷公藤甲素对血管内皮细胞迁移活性的作用

目的观察雷公藤甲素对血管内皮细胞迁移活性及尿激酶型纤溶酶原激活物(u—PA)表达的影响,探讨雷公藤甲素抑制血管生成的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,传至第三代。接种于琼脂凝胶立体细胞培养系统后,加入不同质量浓度的雷公藤甲素(0,5,10,20,30μg／L),培养48h,观察内皮细胞的迁移活性;荧光定量RT—PCR检测u—PAmRNA的表达;免疫组织化学染色检测内皮细胞u—PA蛋白表达量。结果雷公藤甲素可明显抑制内皮细胞的迁移活性,使细胞游走距离缩短;可减少内皮细胞u—PAmRNA和蛋白的表达。结论雷公藤甲素可能通过基因水平干扰内皮细胞u—PAmRNA的表达,抑制u—PA蛋白的表达,从而有效地抑制血管内皮细胞迁移,这可能是雷公藤甲素抑制血管生成的主要机制之一。