VIP-131I-ASON抑制HT29细胞的生长及癌蛋白的表达

将互补于C-m yc mRNA的反义寡核苷酸(A SON)进行放射性碘(131I,125I)标记,通过多聚赖氨酸与血管活性肠肽(V IP)偶联形成放射性反义复合物(V IP1-31I-A SON,V IP1-25I-A SON)。以正义(SON)和无义链(M ON)作为对照,比较HT 29结肠癌细胞对125I-A SON和V IP1-25I-A SON的摄取率;利用M TT法和流式细胞计数仪检测C-m yc癌蛋白方法,研究131I-A SON和V IP1-31I-A SON对HT 29结肠癌细胞的作用。实验结果表明,与V IP结合后,125I-A SON在结肠腺癌HT 29细胞中的摄取率大大提高,与未结合125I-A SON摄取率相比差异显著(P<0.05)。V IP1-31I-A SON对HT 29细胞生长抑制作用呈剂量依赖型,且抑制作用显著强于其它各对照组(P<0.05)。流式细胞计数表明,与V IP1-31I-A SON组和131I-A SON组荧光强度明显低于其它各组(P<0.05),而V IP1-31I-A SON组的荧光强度又比131I-A SON组低(P<0.01),表明V IP作为载体,能有效将A SON导入结肠癌细胞,明显抑制HT 29结肠癌细胞的生长和C-m yc癌蛋白的表达。     

反义c-myc寡核苷酸诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的： 研究反义c-myc寡核苷酸诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法： 设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞，通过MTT法、流式细胞仪、HE染色及透射电镜方法，观察和分析其对人骨肉瘤MG-63细胞作用的效果。结果： MTT法示反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖，10.0 μmol/L、作用48 h效果最明显；流式细胞仪检测证实反义c-myc寡核苷酸（终浓度10.0 μmol/L）诱导瘤细胞的凋亡率达37.92%，出现明显的凋亡峰，并可抑制c-myc基因蛋白的表达；细胞呈典型凋亡特征。结论： 反义c-myc寡核苷酸能有效诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。     

MIF反义寡核苷酸对巨噬细胞表达MIF的影响

目的：研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）反义寡核苷酸对体外巨噬细胞表达MIF的影响。 方法： 设计特异性MIF寡核苷酸，其序列为:反义: 5’-TACGGATACAAGTAGCAC-3’; 正义: 5’－ATGCCTATGTTCATCGTG-3’;错义: 5’－CTCTCAGACTCGATCTGT-3’。通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞，观察MIF反义寡核苷酸对脂多糖（LPS）刺激巨噬细胞表达MIF的影响。 结果： LPS刺激后6 h，巨噬细胞表达MIF mRNA和合成分泌的MIF量增加，9-12 h达高峰。MIF反义寡核苷酸转染巨噬细胞后，可见LPS刺激的MIF mRNA和MIF的表达均明显少于LPS刺激组、LPS刺激＋转染正义寡核苷酸组和 LPS刺激＋转染错义寡核苷酸组（P<0.05），与非LPS刺激组无显著差异。 结论： LPS可刺激小鼠巨噬细胞合成和表达MIF。MIF反义寡核苷酸可显著抑制巨噬细胞MIF的过度表达。     

端粒酶RNA反义核酸降低鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平

目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P＜0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。     

bcl-2反义肽核酸诱导HL-60 K562细胞凋亡

目的　探讨不同结构的反义药物对HL 60、K562细胞系生物学活性的影响。方法　应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL 60、K562生物学活性的影响。结果　 1 0 μmol/L靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL 60、K562细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 1 0 μmol/L针对bcl 2mRNA同样靶点的反义肽核酸和寡核苷酸作用HL 60和K562细胞 72h ,反义肽核酸仍表现出较强的促细胞凋亡的作用 ,而反义寡核苷酸诱导细胞凋亡的作用则有所下降。结论　反义bcl 2肽核酸能诱导HL 60、K562细胞的凋亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。     

hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Raji细胞凋亡的影响

目的利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制Raji细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对Raji细胞凋亡的影响.方法采用苔盼蓝拒染法观察hTERT ASODN与顺铂联合作用对Raji细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪分析细胞凋亡.结果hTERT ASODN作用于Raji细胞24 h再加入顺铂,对细胞抑制明显增强(P＜0.05).加入顺铂作用后48 h,细胞出现典型的凋亡形态学改变,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带.凋亡细胞百分率(25.24±1.58)%,与正义寡核苷酸与顺铂联合作用组、单用顺铂作用组比较有显著性差异(P＜0.01).结论hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导Raji细胞凋亡.     

术前输注供者CD80~(low)/CD86~(low)树突状细胞,延长小鼠同种异体移植心脏存活

目的 :应用B7- 1和B7- 2反义寡核苷酸 (ASB7- 1/ASB7- 2oligo)抑制CD80 (B7- 1)、CD86 (B7- 2 )在供体小鼠骨髓树突状细胞 (DC)上的表达 ,观察这类DC对同种异体小鼠心脏移植存活时间的影响并探讨其机理。方法 :小鼠B7- 1和B7- 2反义寡核苷酸在lipofectamine协助下分别转染供体鼠C5 7BL/10J(B10 )小鼠骨髓DC ,流式细胞仪检测其CD80 /CD86的表达 ,证实为CD80 low/CD86 low。将各组DC经尾静脉输注到受体小鼠C3H/HeJ(C3H)体内 ,1周后进行心脏移植术 ,观察存活时间 ;体外实验观察各组DC对同种异体T细胞的激活作用 ,包括混合淋巴细胞反应、细胞毒性效应、及IL - 2的产生。结果 :ASB7- 1和ASB7- 2分别显著抑制DC表达CD80 /CD86 ;转输这些CD80 low/CD86 lowDC可使小鼠心脏移植物存活时间显著延长 ,分别为 (18.6± 0 .89)d和 (2 3.6 7± 10 .73)d ,与转输成熟骨髓DC(IL - 4DC)组和生理盐水注射组(6 .2 2± 0 .97)d、(11.17± 1.72 )d比较 ,均有显著差异 (P <0 0 1) ;CD80 low或CD86 lowDC对异体T细胞激活作用较弱 ,表现为T细胞增殖能力、IL - 2产生及细胞毒杀伤均明显低。结论 :应用反义寡聚核苷酸转染供者DC ,降低其CD80或CD86的表达 ,可以抑制供者特异性的免疫应答 ,延长移植物存活时间。     

源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病效应的研究

目的： 研究源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病细胞的作用。方法: 用血细胞分离机从健康人外周血分离并诱导出单核-巨噬细胞，流式细胞仪检测细胞表面CD14分子和CD16分子表达状况。设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)和不含CpG基序的寡核苷酸（nonCpG-ODN）分别作用于单核/巨噬细胞, MTT法检测经寡核苷酸作用后,单核/巨噬细胞抗白血病K562细胞的效应, 用ELISA法检测其分泌细胞因子IL-12、TNF-α的表达。结果: 从健康人外周血分离并成功诱导出单核/巨噬细胞，证实CpG-ODN作用于单核/巨噬细胞,可显著增强单核/巨噬细胞体外抗白血病细胞的作用，同时能促进单核/巨噬细胞分泌细胞因子IL-12、TNF-α。结论: 源于细菌CpG-ODN可增强单核/巨噬细胞介导的抗白血病细胞作用，此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

反义bcl-2 DNA促进裸鼠荷人鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡

目的：在裸鼠活体水平上观察ｂｃｌ－２反义寡聚核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮ）对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２－ｂａｘα凋亡的影响。方法;ＤＮＡ合成仪合成２２ｎｔ ＡＳＯＮ片段,ＲＴ－ＰＣＲ检测ｂｃｌ－２表达,电镜观察细胞凋亡。结果;反义ｂｃｌ－２ ＤＮＡ片段局部注射ＣＮＥ２－ｂａｘα致瘤组织,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤组织中ｂｃｌ－２表达被封闭,电镜观察视野下可见     

抗PML-RARα反义核酸对NB4细胞形态、PML-RARαmRNA及蛋白质表达的影响

目的探讨抗ＰＭＬＲＡＲα反义核酸（ＦＵＡＳ）对ＮＢ４细胞的分化、ＰＭＬＲＡＲαｍＲＮＡ表达及ＰＭＬ／ＰＭＬＲＡＲα蛋白细胞内定位的影响。方法以ＮＢ４细胞为研究对象,细胞形态观察采用Ｗｒｉｇｈｔ染色法;ＰＭＬＲＡＲαｍＲＮＡ表达采用ＲＴＰＣＲ法;ＰＭＬ／ＰＭＬＲＡＲα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果ＦＵＡＳ处理后第５天,细胞出现部分分化。处理后２４,７２,１２０小时,ＰＭＬＲＡＲαｍＲＮＡ表达分别下降５２．０％、６８．７％、２３．４％。抗ＰＭＬ抗体免疫荧光检测,ＦＵＡＳ处理２４小时后,细胞内微小颗粒消失,残存颗粒变大,１２０小时细胞内颗粒几乎消失。结论ＦＵＡＳ特异性阻断ＰＭＬＲＡＲαｍＲＮＡ表达,使ＰＭＬＲＡＲα融合蛋白合成减少甚至消失,进而促进细胞分化