STAT5诱骗寡核苷酸下调K562细胞周期相关基因的研究

目的采用基因芯片技术筛选信号转导和转录活化因子5（STAT5）诱骗寡核苷酸作用下K562细胞差异表达的周期相关分子，探讨其对K562细胞周期的影响。方法合成STAT5诱骗寡核苷酸，在脂质体介导下转染K562细胞，采用人14K基因表达谱cDNA芯片检测差异表达基因，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片筛选到的部分基因的表达情况。结果两张cDNA芯片检测重复性良好（r-0．9799）。在13824个标记的基因中检出多个下调基因，其中包括cyclin D1、cyc-linD2、S100钙结合蛋白P和E2F-5等在内的周期相关基因；RT-PCR实验证实STAT5诱骗寡核苷酸引起cyclinD2和E2F-5mRNA表达下调。进一步分析发现，这些基因的启动子区域均含有STAT5结合的一致性序列。结论STAT5诱骗寡核苷酸抑制K562细胞G-／s转换而影响细胞周期进程的作用机制，可能与cyclin D2和E2F-5等基因的表达下调相关。     

锝-99m标记survivin反义寡核苷酸肝细胞癌显像的实验研究

目的研究放射性核素锝99m(99mTc)标记survivin反义寡核苷酸(ASON)显像诊断肝细胞癌的价值。方法用DNA合成仪合成18碱基单链survivinASON,在5′末端经氨基修饰后,以S乙酰基N羟基琥珀酰亚胺巯基乙酰基三甘氨酸(SacetylNHSMAG3)作为螯合剂对survivinASON进行99mTc标记,并对99mTcsurvivinASON在荷瘤(SMMC7721)裸鼠模型体内的生物学分布、肿瘤反义基因显像、肿瘤反义基因抑制显像进行了分析。结果肿瘤组织显像时间早,0.5h即已开始显影。99mTcsurvivinASON在肿瘤组织内的聚集程度随时间延长而逐渐增加,于4h时达到最大,肿瘤/对侧肢体肌肉比值分别为2.48±0.44(体外显像)和3.35±0.57(生物学分布)。正义寡核苷酸(SON)在肿瘤组织内的聚集各时间点均明显低于ASON,差异有统计学意义(P<0.01)。用未标记的survivinASON进行抑制后,99mTcsurvivinASON在肿瘤组织中的聚集明显减少,4h时的肿瘤/对侧肢体肌肉比值降为0.93±0.23,与抑制前的2.48±0.44相比有明显减低(P<0.01)。结论99mTcsurvivinASON可在荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中特异性聚集,为肝细胞癌的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株凋亡和侵袭、迁移的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和侵袭、迁移的影响,探讨其作用的分子机制和临床价值。方法:用脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的改变,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数及survivin、Smac、VEGF蛋白表达改变,逆转录酶链反应(RT-PCR)检测survivin、Smac/DIABLO、VEGF基因表达改变。结果:脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,FCM及共聚焦显微镜(SLM510)检测结果显示转染率>95%。用600 nmol/L ASODN转染48 h后,细胞迁移和侵袭能力下降(t=3.47,P<0.05;t=5.72,P<0.01)。细胞凋亡指数(AI)明显增加(t=6.37,P<0.05)。Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.50,P<0.05;t=7.81,P<0.01),Smac mRNA和蛋白表达上调(t=-2.80,P<0.05;t=11.39,P<0.01),VEGF mRNA和蛋白表达明显下调(t=2.54,P<0.05;t=33.84,P<0.01)。结论:ASODN可诱导卵巢癌细胞凋亡,降低卵巢癌细胞侵袭和迁移能力。这些作用是通过下调survivin、VEGF基因,上调Smac基因表达来共同完成的,他们之间的相互作用可能是卵巢癌发生、发展和转移的重要分子机制,survivin可能在其中起关键性作用。针对survivin的基因治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段,有重要的临床价值。