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31.
目的探讨131I标记血管活性肠肽(VIP)受体介导的C-myc mRNA反义寡核苷酸复合物(131I-VIP-ASON)对荷瘤裸鼠结肠腺癌的抑制效果.方法以TlCl3为氧化剂,将131I标记于互补于C-mycmRNA的ASON.VIP与131 I-ASON通过多聚赖氨酸偶联形成放射性反义复合物(131 I-VIP-ASON);通过荷瘤裸鼠体内分布实验观察其在肿瘤中的浓集情况;以131I-ASON和131I标记的正义寡核苷酸(SON)、无义寡核苷酸(MON)为对照,观察131 I-VIP-ASON对活体肿瘤的治疗效果.组织切片观察肿瘤组织形态学变化,Envision免疫组织染色法观察反义治疗对C-myc癌蛋白表达的影响.结果注射后2 h,131I-VIP-ASON在肿瘤部位浓聚显著高于131 I-ASON(t=7.79,P<0.01),肿瘤/肌肉放射性比值于4 h达到最高.7.4 MBq 131 I-VIP-ASON组能有效抑制肿瘤生长,肿瘤生长终点抑制时间为25.4 d,效果明显优于3.7 MBq组(q=42.61,P<0.01),未见明显副作用.组织形态学和免疫组织化学染色观察示,注射131 I-VIP-ASON后,肿瘤出现大片坏死区和脂肪变性.131 I-VIP-ASON组C-myc蛋白表达得分值明显低于其他组(q=5.51,P<0.01).结论131 I-VIP-ASON可明显抑制荷瘤裸鼠结肠腺癌肿瘤生长及癌蛋白表达,可望为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路. 相似文献
32.
目的 研究A型与B型CpG ODN对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖,细胞因子的释放和诱导人PBMC抗膀胱肿瘤细胞作用.方法 用A型、B型CpG ODN和NoCPG ODN刺激正常人外周血PBMC,MTT测定细胞的增殖,定量ELISA检测人干扰素-α含量,LDH法检测CpG ODN诱导后人PBMC对膀胱肿瘤细胞的杀伤作用.结果 A型与B型CpG ODN对人PBMC增殖的刺激作用明显高于对照组;CpGODN2216组IFN-α的浓度高于CPG ODN2006组;CpG寡核苷酸作用后,人PBMC对BIU-87膀胱肿瘤细胞的杀伤活性明显升高.结论 A型与B型CpG ODN对人PBMC具有免疫诱导作用,可刺激人PBMC增殖并释放IFN-α,诱导免疫细胞对膀胱肿瘤细胞杀伤,增强宿主抗膀胱肿瘤细胞作用. 相似文献
33.
血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制甲状腺癌血管生成的效应 总被引:6,自引:0,他引:6
目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制甲状腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达及内皮细胞生长的效应。方法设计合成靶向VEGF的ASODN转染人髓状甲状腺癌细胞系(TT)细胞,并制备相应条件培养基作用内皮细胞ECV304,设正义寡核苷酸(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,RT PCR、免疫细胞化学法检测TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达,四氮唑蓝法检测TT和ECV304细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测ECV304细胞凋亡状态。结果ASODN组TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达显著低于SODN和对照组(P<0.01),但IR差异无统计学意义(P>0.05);各转染组ECV304细胞IR差异亦无统计学意义(P>0.05);而经各ASODN组TT细胞条件培养基作用的ECV304细胞生长明显受抑,IR(分别为0.21±0.03、0.31±0.01、0.42±0.22)显著高于SODN组(0.05±0.03,P<0.01),并伴明显细胞凋亡,上述效应呈浓度依赖性。结论ASODN可通过特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成。 相似文献
34.
端锚聚合酶1反义寡核苷酸对人肺癌细胞增殖的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 探讨端锚聚合酶 1(tankyrase 1,TANK1)反义寡核苷酸对人肺癌细胞的影响 ,为肺癌治疗的靶向研究探索新途径。方法 合成TANK1正义寡核苷酸 (TANK1 SODN)、反义寡核苷酸(TANK1 ASODN) ,待人肺癌细胞株CALU在裸鼠蹊部皮下接种成瘤后 ,将成瘤裸鼠随机分成 3组 :对照组 4只 (每天上午于瘤体内多位点注射生理盐水 2 0 0 μl/只 ) ,正义组 (每天同法注射含TANK SODN10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )和反义组 (每天同法注射含TANK ASODN 10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )各 5只 ,观察肿瘤的生长情况及组织学改变。用链霉亲和素 生物素 酶复合物 (SABC)法检测肿瘤细胞Ki6 7及端粒酶反转录酶 (hTERT)的阳性表达率。结果 在裸鼠成瘤部位连续注射相应液体 16d后 ,反义组移植瘤体积为 (1 4 6± 0 70 )cm3 ,明显小于对照组的 (3 2 9± 0 4 7)cm3 及正义组的 (3 14±0 70 )cm3 ,差异有显著性 (P均 <0 0 1) ;肿瘤细胞Ki6 7标记指数及hTERT细胞阳性率均明显低于对照组及正义组 (P均 <0 0 1)。结论 人肺癌细胞株端粒酶呈高度表达 ,TANK1 ASODN可降低瘤细胞端粒酶活性 ,抑制肺癌细胞增殖 相似文献
35.
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)与反义寡脱氧核苷酸的联合应用对胰腺癌细胞生长的影响。方法用TNFα和硫代正磷酸修饰的反义寡脱氧核苷酸对本室自建的胰腺癌细胞系(PC-2)进行处理,并与单独用药和未用药组进行对比。用细胞计数和噻唑蓝(MTT)法分析细胞生长速度和增殖率,用RT-PCR-SouthernBlot检测药物对靶基因表达的影响,并对细胞的凋亡状况进行原位检测。结果联合用药组较单独用药组使细胞生长速度减慢的作用明显加强;针对Ki-ras和c-myc帽区的反义硫代正磷酸修饰的寡脱氧核苷酸(简称反义Ki-ras和反义c-myc)可以明显抑制内源性靶基因Ki-ras和c-myc的表达;TNFα与反义Ki-ras、反义c-myc联合应用凋亡细胞发生率为8.0%和8.4%,高于其分别单独应用的5.2%、4.8%和5.4%。结论TNFα与反义寡脱氧核苷酸的联合应用对细胞生长的影响大于单独作用。 相似文献
36.
目的观察血管局部联合转染c-myc反义寡核苷酸(AODN)和组织纤溶酶原激活物(tPA)基因对损伤后动脉内膜增生的影响。方法将同一只兔的左、右髂外动脉(各1·0cm)对换移植,移植血管分别用脂质体、c-myc-AODN和pBudCE4·1/tPA液浸泡,血管吻合口用上述3种液体浸泡过的缝线吻合。实验终点(术后3、7、14、28、56d)分为5个亚组,术后各实验终点取移植血管标本用于病理学检测、发色底物法检测tPA活性实验、3H-TdR掺入实验和免疫组织化学染色检测。结果术后各时间点联合转染组血管的内膜面积、管腔狭窄程度、3H-TdR掺入量和增值细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数均显著低于对照组(P<0·01),而且亦明显低于c-myc-AODN和tPA单独转染组(P(0·05)。结论血管局部联合转染c-myc-AODN和tPA基因能有效抑制内膜增生,防止损伤血管狭窄。 相似文献
37.
反义寡脱氧核苷酸对人肝癌裸鼠模型生长及转移的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 观察反义H-ras寡脱氧核苷酸(ODN)对高表达蛋白p21H- ras的人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20细胞生长、凋亡及转移潜能的影响。方法原代培养LCI-D20细胞,经10μmol/L浓度反义ODN处理后,以1.5×10细胞数分别接种于14只裸鼠皮下缝制皮囊内:6只接种反义H-rasODN处理细胞,4只接种H-ras非特异性反义ODN处理细胞,余4只接种未作处理的对照细胞。结果反义H-ras对LCI-D20细胞增殖具有显著抑制作用(t=31.529,P<0.01),反义ODN处理细胞,S期比率(36.0±1.4)显著低于对照组(58.5±0.9,t=13.519,P<0.01),而G1/G0期比率(56.7%±1.1%)高于对照组(37.4±0.7,t=14.802,P<0.01);反义H-rasODN处理细胞的凋亡发生率(34.0%±4.5%)显著高于对照组(2.5%±1.2%,t=13.434,P<0.01);反义H-ras处理对LCI-D20细胞在接种动物体内的生长具有显著延迟抑制作用(t=3.509,t=3.452,P<0.01);接种动物的肺转移率,反义H-rasODN处理组显著低于对照组。 相似文献
38.
子宫内膜癌细胞雌激素受体亚型的调控和功能的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的初步建立子宫内膜癌雌激素受体(ER)亚型α或β弱表达的细胞模型,研究雌激素及他莫昔芬(TAM)与ER亚型的关系。方法分别设计针对ERα和ERβ的反义寡脱氧核苷酸(ODN)、正义ODN、错义ODN,并转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,将Ishikawa细胞分为4组,即未转染组、反义ODN组、正义ODN组及错义ODN组。蛋白印迹法测定转染后细胞ERα和ERβ蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染ODN后,17β雌二醇和TAM对Ishikawa细胞生长的影响。结果(1)分别针对ERα及ERβ的反义ODN可以选择性下调转染的Ishikawa细胞中ERα及ERβ蛋白的表达(分别下调45%和54%)。(2)17β雌二醇及TAM可以促进未转染组Ishikawa细胞的生长。转染ERα反义ODN后,可抑制17β雌二醇及TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后的24、48及72h为著,反义ODN组各时间点分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。(3)转染ERβ反义ODN后,17β雌二醇对Ishikawa细胞的促生长作用的改变不明显。转染ERβ反义ODN可抑制TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后72h为著,反义ODN组分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论(1)反义核酸技术能够特异性地有效下调Ishikawa细胞中ERα和ERβ蛋白的表达,其可作为子宫内膜癌细胞中ER调控的一种有效的实验手段。(2)17β雌二醇促进子宫内膜癌细胞生长的作用主要通过ERβ介导;ERβ和ERβ均参与TAM促进子宫内膜癌细胞生长的作用。 相似文献
39.
目的: 研究儿童急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓细胞中miR-125b的表达及miR-125b为靶标的反义寡核苷酸对人白血病细胞的作用。方法: 采用基因芯片和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测儿童AML治疗前后骨髓细胞中miR-125b的表达。采用电转法将与miR-125b序列互补的反义寡核苷酸转染HL-60细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测转染后24 h、48 h、72 h、96 h细胞增殖情况。结果: 芯片结果显示miR-125b在儿童AML中表达明显增高,约为正常的12倍,qRT-PCR结果进一步证实了miR-125b在儿童AML中异常高表达,同时还发现miR-125b在儿童AML部分缓解的患者骨髓细胞中表达下降,在完全缓解患者骨髓细胞中降至正常水平。CCK-8结果显示,针对miR-125b的反义寡核苷酸能有效抑制白血病细胞的增殖,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论: miR-125b在儿童AML中可能起"癌基因"作用,以miR-125b为靶标的反义寡核苷酸可能为儿童AML治疗提供新的方法。 相似文献
40.
目的 通过研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人胰腺癌细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)表达及细胞增殖与侵袭力的影响,深入探讨CTGF在胰腺癌发生、发展中的作用机制,为CTGF ASODN在胰腺癌基因治疗中的运用奠定理论基础.方法 经脂质体介导将CTGF ASODN转染人胰腺癌细胞株SW1990,荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞CTGF、MMP-9与VEGF mRNA与蛋白表达;噻唑盐(MTT)比色法检测转染细胞的增殖活性;采用Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 (1)荧光显微镜及流式细胞仪检测显示CTGF ASODN可成功转染SW1990细胞.(2)反义组、无义组和单加脂质体组细胞CTGF mRNA表达量分别为0.24±0.09、0.67±0.21、0.63±0.18,反义组较其他组的mRNA表达明显减少(P<0.01);相应的CTGF蛋白表达量分别为0.19±0.07、0.75±0.26、0.71±0.23;相应的MMP-9 mRNA表达量分别为0.21±0.12、0.78±0.35、0.81±0.37;相应的VEGF mRNA表达量分别为0.16±0.06、0.42±0.22、0.43±0.28;相应的MMP-9蛋白表达量分别为0.68±0.22、1.97±0.46、1.92±0.39;相应的VEGF蛋白表达量分别为0.27±0.07、0.52±0.19、0.55±0.18,反义组CTGF、MMP-9和VEGF的表达较其他组显著降低(P<0.01).(3)反义组、无义组、单加脂质体组细胞增殖活性分别为1.67±0.14、2.34±0.17、2.29±0.21,反义组较其他组细胞增殖被显著抑制(P<0.01).(4)反义组、无义组、单加脂质体组微孔滤膜外侧细胞数分别为24.88±6.17、52.37±8.62、55.49±8.83,反义组较其他组微孔滤膜外侧细胞数显著减少(P<0.01).结论 CTGF ASODN转染可有效抑制SW1990细胞CTGF的表达,并降低其MMP-9、VEGF的表达及细胞增殖活性与细胞侵袭力. 相似文献