抗角蛋白自身抗体对培养角朊细胞产生白细胞介素8的影响

为探讨抗角蛋白自身抗体（AKantoAb）对角朊细胞免疫功能的影响，实验以IL-1β刺激无血清培养角朊细胞及AKautoAb作用后的角朊细胞，用夹心ELISA法检测培养上清中IL－8的产量。结果表明IL-1β可刺激角朊细胞产生IL－8，并对IL－1β有浓度依赖性，AKautoAb对角朊细胞产生IL－8有明显抑制作用。提示AKautoAb在炎性皮损角朊细胞中的沉着，可能存在有益的调节作用。     

PCR-DNA直接测序检测1例单纯型大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型(WC-EBS)患者角蛋白K5基因点突变

单纯型大疱性表皮松解症（ＥＢＳ）是一组常染色体显性的遗传性疾病，研究表明本病存在角蛋白Ｋ５／Ｋ１４基因点突变。ＥＢＳ的各个亚型突变发生部位有一定差异，其中Ｗｅｂｅｒ－Ｃｏｃｋａｙｎｅ亚型（ＷＣ－ＥＢＳ）突变多位于Ｋ５／Ｋ１４的连接区Ｌ１－２。本研究设计了扩增Ｋ５基因Ｌ１－２区ＤＮＡ片段的引物，应用ＰＣＲ对－ＷＣ－ＥＢＳ家系的患者及未发病成员进行扩增。ＰＣＲ产物测序发现患者Ｋ５第３４６密码子发生了Ａ→Ｃ的碱基替换，导致色氨酸（ＴＡＴ）变成丝氨酸（ＴＣＴ），而未发病成员则未见有碱基突变。结果表明，通过ＰＣＲ结合ＤＮＡ直接测序不失为快速、准确检测基因突变的方法。此外，连接区在角蛋白结构中不如螺旋区重要，因而此区基因突变对角蛋白二聚体形成的影响不大，这与临床上ＷＣ－ＥＢＳ病情相对较轻是一致的。     

Cloning and characterization of antikeratin human antibodies using a semisynthetic phage antibody library

Antikeratin autoantibodies (AK auto Abs) are very important elements of the human immune system. To improve the outcome of studies on AK auto Abs, it is necessary to generate antikeratin human monoclonal antibodies. The purpose of present study was to isolate antikeratin human monoclonal antibodies by panning a phage antibody library. A semisynthetic phage antibody library with capacity of 4.0×10⁸ members was previously constructed. Panning of the library was performed against human epidermal keratin extracted from psoriatic scales. At the last round of the panning, individual colonies were grown in culture for expression of phage antibodies. Their binding activities and specificities to keratin were determined by ELISA, and positive clones were analyzed by DNA fingerprinting. The selected clones were induced with IPTG to express soluble Fab fragments, which were further characterized by ELISA, immunohistochemistry and Western blotting. Finally, DNA sequencing of the variable regions was performed. A human antibody clone which was able to express soluble Fab fragments and recognize Mr 46,000 keratin (K17) was isolated. DNA sequencing demonstrated that the VH and VL of the antibody came from the human VH1 and V2 families, respectively. We conclude that phage antibody library technology is a powerful way to generate human monoclonal antibodies. The antikeratin antibody we isolated in the present study would be useful in the research on AK auto Abs.     

正常口腔粘膜上皮的细胞角蛋白的表达

目的：探讨CK10、CK13、CK18、CK19在正常口腔粘膜中的表达。方法 ：正常颊粘膜、舌腹口底粘膜、附着眼粘膜、舌背粘膜标本各8例，10％中性福尔马林液固定，石蜡包埋，5μm连续切片，用LSAB法进行CK10、CK13、CK18、CK19的免疫组化染色。结果：正常颊粘膜和舌腹口底粘膜基底细胞层散在表达CK19，基底上层表达CK13；正常附着龈粘膜基底上层表达CK10；正常舌背粘膜基底细胞层可散在表达CK19，基底上层表达CK10和／或CK13。结论：不同部位的正常口腔粘膜表达的CK种类和形式不同。     

细胞角蛋白与肿瘤的关系

细胞角蛋白(CK)具有维持正常细胞形态和功能的重要作用.临床上,细胞角蛋白被作为肿瘤标记物用于多种肿瘤的诊断.近年来许多研究发现细胞角蛋白的异常表达、磷酸位点的基因突变以及过度磷酸化与肿瘤的发生机制相关,研究两者之间的关系,对于肿瘤的诊断、治疗、预后有重要的作用.     

The promoter of the HaCaT keratinocyte differentiation-related gene keratin 4 contains a functional AP-2 binding site

. Received: 4 March 1997     

人角蛋白17的序列分析及辅助性T细胞表位预测

目的：本文对角蛋白17的序列和辅助性T细胞抗原表位进行了分析预测，为一定遗传背景下T细胞介导的自身免疫紊乱引发银屑病这一观点提供了研究基础。方法：以氨基酸组成、疏水性和亲水性分析以及氨基酸替换和二级结构分析的结果为参考，以mADR限制性预测方法为主，进行K17的辅助性T细胞表位综合预测。结果：与HLADR7相关的T细胞辅助性表位可能在5～15肽段、150～190肽段、270～300肽段和315～355肽段；与HLA DR4相关的T细胞辅助性表位可能在1～10肽段、50～70肽段、110～170肽段、270～350肽段和400～420肽段。结论：本研究为下一步人工合成多肽或表达相应肽段筛选银屑病反应性辅助性T细胞表位打下了一定的理论基础。     

肺癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白19mRNA表达水平与肿瘤分期、近期疗效及预后的关系

目的探讨肺癌患者治疗前后外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）mRNA的表达水平及其与肿瘤分期、近期疗效、预后的关系。方法应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测78例肺癌患者（鳞癌28例、腺癌40例、小细胞肺癌9例、大细胞肺癌1例）治疗前后、30例肺部良性疾病患者及30名健康对照者外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）mRNA的水平；同时采用酶联免疫吸附法测定肺癌患者治疗前血清CEA和细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）水平。患者随访2年。结果肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA阳性率分别为69．2％（54／78）、62．8％（49／78），显著高于肺部良性疾病患者及健康对照者，三者差异有统计学意义（χ^2值分别为37．65、41．54；27．41、30．84，P均〈0．01）。鳞癌组CK19mRNA阳性率最高，腺癌组CEAmRNA阳性率最高。不同分期肿瘤患者间CEA、CK19mRNA阳性率差异无统计学意义（χ^2值分别为3．63、3．81，P〉0．05）。肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA的阳性率显著高于CEA、CYFRA21-1蛋白水平；手术后CEA、CK19mRNA阳性率显著下降；化疗后阳性率下降不明显。化疗前CEAmRNA阳性患者的中位生存期明显低于阴性患者（分别为8．5、11．7个月），化疗前CK19mRNA阳性患者的中位生存期明显低于阴性患者（分别为8．9、12．3个月）；术前CEAmRNA阳性患者肿瘤复发或转移率（29．4％）高于术前阴性患者（7．7％），术前CK19mRNA阳性患者肿瘤复发或转移率（18．8％）高于术前阴性患者（7．1％）。结论检测肿瘤患者外周血CEA、CK19mRNA水平对于预测肿瘤细胞微转移有一定的临床意义，有助于评估手术疗效及预测预后。CEA、CK19mRNA表达水平与肿瘤分期无关。CEA、CK19基因检测的敏感性优于蛋白水平的检测，有助于肺癌的辅助诊断。