造血干细胞横向扩增的研究进展

造血干细胞具有自我更新和多系分化的潜能，体外通过不同早期作用细胞因子混合物或基质细胞加入细胞因子支持培养的方法，使造血干细胞有效地进行横向扩增，其后代细胞仍有自我更新和分化潜能，具有造血干细胞长期重建能力。     

应用胶原凝胶构建组织工程化皮肤的研究

目的探讨以胶原凝胶为支架材料构建组织工程化皮肤的可行性。方法体外分离、培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞;利用自制的胶原蛋白制成胶原凝胶作为组织工程支架材料;在成功构建人工真皮的基础上种植表皮细胞,构建复合人工皮肤;采用HE染色与免疫组织化学的方法对复合人工皮肤进行组织学检测。结果HE染色可见,构建的复合人工皮肤具有表皮和真皮双层结构;免疫组织化学染色显示,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白阳性,在形态结构上与正常皮肤相似。结论培养的人表皮细胞和成纤维细胞种植于胶原凝胶支架上,气-液界面培养可构建出具有类似正常皮肤结构的组织工程化皮肤。     

长链核酸扩增技术评价病毒灭活效果的研究

目的:探讨用长链核酸扩增技术评价病毒灭活效果的可行性.方法:针对伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用半巢式PCR技术扩增经低pH法(4.0±0.1)、巴氏消毒法[(60±1.0)℃]和s/D法(有机溶剂/洗涤荆)处理后的PRV核酸,同时以细胞感染法做平行对照.结果:低pH对PRV核酸有破坏作用,处理时间越长,核酸损伤程度越明显,处理60 min时,6.62 lgTCID50的PRV完全被灭活.5条不同长度PCR扩增产物中,只有3.9 kb的长片段检出与细胞培养结果一致.7.25 lgTCID50的PRV经(60±1.0)℃处理20 min后即被完全灭活,7.13 lgTCID50的PRV经s/D法处理1 h后被完全灭活,但各长度核酸片段扩增均为阳性,与细胞感染试验结果不符.结论:低pH对PRV核酸的损伤程度随处理时间的延长而增加;用长链PCR(3.9 kb)技术来评价经低pH法灭活病毒的效果是可行的,而该法不适合评价巴氏消毒法和S/D法灭活病毒的效果.     

退变腰椎间盘髓核细胞立体培养与单层培养的生物活性比较

目的：比较体外单层培养和旋转微载体立体培养人退变腰椎间盘髓核细胞的生物学活性指标,探讨更加有效的椎间盘髓核细胞体外培养方法.方法：对获取的腰椎间盘突出症患者的24个椎间盘按年龄分为A组（20～25 岁）、B组（26～30 岁）、C组（36～45 岁）及D组（＞45岁）,分别利用酶消化法进行单层细胞培养和旋转微载体立体培养系统进行立体培养,观察细胞生长形态,检测细胞生长曲线及速度、细胞生长活性、细胞分裂指数及胶原含量.结果：单层培养的髓核细胞贴壁后为多角形或梭形,伸出伪足;立体培养的细胞在微载体上呈梭形或不规则形,呈立体状生长.立体培养的细胞生长速度较快,1周内两种培养方法各时间点及各组间比较均具有统计学意义（P＜0.05）.立体培养的髓核细胞活性提高,随年龄增加细胞活性下降;指数生长期细胞分裂指数与单层培养相比有统计学意义（P＜0.05）;Ⅰ、Ⅱ型胶原含量与单层培养相比有统计学意义（P＜0.05）,A组分别与B组、C组及D组比较均有统计学意义（P＜0.05）.结论：旋转立体培养人退变椎间盘髓核细胞的活性保持良好,较单层培养能够大量、优质收集种子细胞,可用于椎间盘组织工程中种子细胞的研究.     

机械牵张对缺血缺氧离体培养心肌细胞形态的影响

目的：在严重缺血缺氧时，细胞形态已受损的基础上，细胞接受力学刺激其形态变化如何?探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞形态学的影响。方法：建立离体培养的心肌细胞机械牵张模型，以缺氧加无糖培养模拟烧伤早期缺血缺氧损害，心肌细胞形态变化采用F-actin荧光染色，利用图像分析系统分析细胞面积、长度。结果：缺氧3h后微丝破坏，失去正常网络状结构；缺氧12h部分微丝断裂，细胞收缩变形，细胞失去正常铺展外观。牵张3h细胞形态完好，与周边界限清楚，细胞面积增加，微丝沿细胞受力方向排列，局部呈增强趋势；牵张12h可见微丝沿受力方向排列，核周明显增强，胞体宽大。缺氧牵张3h微丝破坏明显，细胞形态不规则，胞浆内见空泡；缺氧牵张12h细胞形态严重受损，微丝结构几乎完全破坏，细胞铺展面积变小，细胞完整性严重受损。牵张12h细胞面积增加达22.4％，长度增加19．59％，缺氧牵张12h后细胞面积则减少22．1％。结论：机械牵张加重了缺血缺氧对心肌细胞的破坏。     

生长因子FGF在颅缝细胞培养中作用的研究

目的:研究生长因子FGF在颅缝闭合中的调控作用.方法:以颅缝早闭动物模型(SD鼠)的颅缝为研究模型,采用细胞生物学技术、组织化学技术,研究颅缝闭合期间,生长因子bFGF作用下,细胞胶原及骨钙素分泌情况;观察生长因子bFGF,对分离培养的颅缝细胞增殖与代谢影响.结果:在大鼠颅缝分离培养细胞中,bFGF促进颅缝分离培养细胞分泌胶原、骨钙素,加快细胞增殖生长曲线平台期出现,并有效促进大鼠颅缝分离培养细胞S期增殖(p＜0.05).结论:在体外器官培养中,bFGF能促进大鼠分离培养颅缝细胞的活性(p＜0.05).     

过氧化物酶体增殖物激活受体对小鼠肝细胞生长周期的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物对小鼠原代肝细胞生长周期的影响和配体过氧化物酶体增殖物激活受体（proxisome proliferators—activated receptor，PPAR）alpha在肝癌形成过程中的变化。方法 在小鼠原代肝细胞中加入PPAR配体Wy-14，643，经不同培养时间后，应用流式细胞仪、逆转录-聚合酶链反应及Western blot等方法检测细胞增殖和凋亡，细胞周期蛋白p21WAFI、cyclinD1的mRNA及蛋白的变化情况。结果 在小鼠原代肝细胞中加入Wy-14，643培养2、4、6d，S＋G2／M期细胞比例分别为（42．3±1．2）％，（50．3±2．1）％，（52．1±2．3）％，细胞凋亡率分别（9．0±0．2）％，（7．9±2．O）％，（7．4±1．3）％，与未加药组相比，细胞增殖明显增高（P〈0．05），凋亡明显减少（P〈0．05）；各加药组cylinD1 mRNA和蛋白的表达也比对照组明显增高（P〈0．05）；各加药组p21^WAF1 mRNA与对照组相比表达无显著变化（P〉0．05），第4天开始出现p21^WAF1。蛋白的表达显著增加（P〈0．05）。结论 过氧化物酶体增殖物通过其配体PPARα引起细胞周期蛋白的改变，导致正常细胞周期信号的传导紊乱，引起细胞异常的增殖和凋亡，从而有可能诱发肿瘤。     

子宫内膜体外构建及其应用研究进展

体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义。只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫。     

人髓核软骨样细胞的生物学特性观察

目的:探讨人髓核软骨样细胞的生物学特性,为组织工程椎间盘种子细胞的选取提供依据.方法:髓核组织取材于3例脊柱侧凸行前路矫形手术者(年龄11～13岁),依次用0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶分离髓核细胞,用含10%胎牛血清(FBS)的F12培养液培养细胞,取传1～7代次细胞进行光镜、电镜检查,观察细胞形态学改变,对细胞计数、二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)摄取进行比较,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞的聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅰ型和Ⅱ型胶原蛋白信使RNA(mRNA)的表达情况.结果:体外培养条件下,传3代之前的细胞形态正常,胞浆丰富;传4代起.部分细胞的形态逐渐向长梭形演化.与传1代细胞相比,传2、3代细胞数量增殖无明显减缓(P>0.05),传4代细胞第4天开始生长减慢(P<0.05),传5Ⅰ7代细胞第2天即较转1代细胞数量明显减少(P<0.05).传1Ⅰ3代细胞的MTT摄取吸光度值差异无统计学意义(P>0.05),和传1代相比,传4代具有统计学差异(P<0.05),传5Ⅰ7代的差异更显著(P<0.01).聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原在传3代之前各代次的mRNA表达量间无统计学差异(P>0.05),和传1代相比,Ⅱ型胶原从第4代起表达量显著下降(P<0.05),聚集蛋白聚糖从第5代起表达量显著下降(P<0.05),而从传5代起髓核软骨样细胞开始表达Ⅰ型胶原:结论:髓核细胞传代后前3代细胞形态良好,增殖能力强,聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA表达良好,适合作为组织工程椎间盘的种子细胞.     

新城疫病毒对人肺腺癌A549细胞系的作用

目的 观察新城疫病毒对人肺腺癌A549细胞的作用.方法 应用新城疫病毒(NDV)强毒株D90对体内、体外培养人肺腺癌A549细胞进行抗癌实验,通过体外培养A549细胞观察D90对肿瘤细胞的杀伤作用,进而建立14例A549肿瘤细胞裸鼠模型,对实验后裸鼠肿瘤组织进行病理学检查,通过光镜、电镜等方法观察肿瘤细胞形态学改变从而探讨新城疫病毒D90对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用,为临床应用奠定基础.结果 NDV强毒株D90可在体外培养条件下溶解、杀伤A549细胞.实验组与对照组比较肿瘤组织体积明显缩小(t'=4.753,P<0.01),光镜和电镜下可见肿瘤组织内血管分布减少,肿瘤细胞坏死与凋亡.结论 新城疫病毒强毒株D90能够抑制体外培养的人肺腺癌A549细胞的增殖并溶解、杀伤肿瘤细胞,能够抑制裸鼠体内肿瘤组织的生长和转移,对正常组织无影响.