生物法测定重组葡激酶在股动脉血栓形成模型兔中的药动学参数

目的:研究重组葡激酶(r-SAK)在股动脉球囊损伤后血栓形成模型兔中的药动学。方法:采用自制大块玻璃平板和琼脂井式扩散生物法测定分别静脉不同方式给予r-SAK不同剂量后的兔的血药浓度。结果:r-SAK的药动学特征符合二室模型,血浆检测浓度在20~2500IU/ml范围内与溶圈直径线性关系良好(r=0·9960),平均回收率为(96·05±9·20)%。低、中、高3个剂量静脉滴注组峰浓度分别为(2·28±1·06)、(3·54±0·32)、(6·12±1·61)μg/ml,单次静脉推注组峰浓度为(5·16±1·02)μg/ml。结论:生物法检测r-SAK血药浓度简便、可靠。     

重组葡激酶群体药动学研究

目的:应用非线性混合效应模型(NONMEM)法研究重组葡激酶(r-SAK)的群体药动学.方法:建立双抗体酶联免疫吸附法(ELiSA)测定r-SAK的血浆药物浓度,应用NONMEM法进行模型优化,确定r.SAK的药动学模型和统计学模型,估算群体药动学参数和个体间、个体内变异,并进行统计分析.结果:建立了r-SAK的特异性浓度测定方法.r-SAK符合二房室一级消除模型,体重(WET)和肌酐对k21有显著性影响,方程为k21=θ(3)×WETθ(5),最终估算结果:k=0.19h-1,k12=1.93h-1,k21=1.87×10-4×WET11.8h-1,V=13.2L.计算所有参数的SE(Standard error)和95%CI(Confidence interva1)评价参数估算方法的优劣.结论:应用NONMEM法估算出的群体药动学参数结果可全面给出药物的药动学参数和变异,为r-SAK的安全性和有效性研究提供了丰富的依据.     

人血浆中重组葡激酶的生物法含量测定及药动学

目的 :建立测定血浆中重组葡激酶 (r SAK)含量的方法 ,并进行药动学研究。方法 :采用自制大块玻璃平板和琼脂井式扩散生物法测定血浆中r SAK的含量。入选急性心肌梗死 (AMI)患者 5例 ,给予r SAK 15mg静脉溶栓联合肝素静脉抗凝治疗。结果 :r SAK血浆浓度在 2 0～ 2 0 0 0U·mL-1范围内与溶圈直径线性关系良好 ,r=0 .995 8;回收率 (96 .0 4± 8.82 ) % ,RSD9.18%。低、中、高 3种血浆浓度的日内RSD分别是 4 .0 4 % ,9.31% ,7.73% ,日间RSD分别为 7.38% ,9.2 7% ,10 .6 2 %。AMI患者体内r SAK的主要药动学参数 :T1/2α=14 .76min ,T1/2 β=77.93min ,Vc =4 .84L ,CL =5 4 .10mL·min-1,K2 1=0 .0 37min-1。结论 :用生物法测AMI患者血浆r SAK浓度简便、易行 ,且可以进行药动学研究     

重组葡激酶在健康受试者的耐受性

目的 评价健康受试者对重组葡激酶（血栓溶解药）的安全性和耐受性.方法 27例健康受试者静脉滴注重组葡激酶（2.5,5,10,15 mg）.结果 用药前后,所有受试者用药前后血压、心率及呼吸无异常变化,与溶栓有关的血液学参数、血尿常规、肝肾功能及血糖均无显著性变化.有10例（37.0%）发生轻微过敏反应;9例（33.3%）发生轻微出血;6例仅有牙龈少量渗血;1例发现尿中红细胞;1例出现静脉穿刺部位小瘀斑;在15 mg剂量组中,1例同时具有上述3种出血表现.结论 在2.5～15 mg内,健康受试者均能较好地耐受重组葡萄酶,但有少数出现轻度药物不良反应.     

Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响及其作用机制

目的: 观察Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响并探讨其作用机制。方法: 30只Wistar大鼠制备高脂大鼠模型,随机分为药物组、高脂组及正常对照组。药物组大鼠尾静脉注射Sak衍生体进行干预,剂量为0.5 mg?kg-1,隔天注射,共15次;其他两组大鼠注射生理盐水作为对照,在给药前和最后一次给药24 h后采血,检测各组大鼠的血小板黏附率和二磷酸腺苷二钠(ADP)诱导的血小板聚集率;采用放免法检测血小板中钙调蛋白(CaM)含量以及ADP诱导的血小板聚集时血栓素(TXA2)的释放量。结果:与高脂组大鼠比较,药物组高脂大鼠血小板黏附功能及ADP诱导的血小板聚集率明显降低（分别是63.5%±6.71%与44.7%±8.13%,P<0.05;91.56%±9.01%与81.22%±3.45%,P<0.05）,血小板中CaM含量与TXA2的释放量明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论:Sak衍生体通过对引起血小板活化途径的干预,抑制血小板的黏附及聚集。     

重组葡激酶动脉内溶栓治疗犬急性脑梗死的量效研究

目的 比较动脉内注射不同剂量重组葡激酶(r-Sak)溶栓治疗犬急性脑梗死的疗效和并发症,以探讨其相对合理的治疗剂量.方法 成年比格犬24条,用介入技术建立犬脑栓塞动物模型,随机分为对照组(生理盐水10 ml)、小剂量组(r-Sak 5 000 u/kg)、中剂量组(r-Sak 10 000u/kg)和大剂量组(r-Sak20000 u/kg).栓塞后5 h行脑血管造影观察所栓塞血管的通畅情况,插管至左颈内动脉分别在30 min内注入药物行溶栓治疗,在溶栓后0.5、1及2 h复查DSA,观察栓塞血管的再通情况,并分别在溶栓前0.5 h、溶栓后0.5 h、1 h及2 h抽取犬静脉血检测PT、APTT和D-二聚体.24 h后处死动物行病理检查.结果 溶栓后2 h内造影显示对照组、r-Sak小剂量、中剂量和大剂量组的有效率分别为10.0%(1/10)、40.0%(4/10)、90.9%(10/11)和100%(9/9),各组间比较有显著性差异(P＜0.001);完全通畅的比率分别为0、10%(1/10)、36.4%(4/11)、66.7%(6/9),也有统计学差异(P=0.005).溶栓后PT、APTT在r-Sak各剂量组均显著延长(P＜0.001);各组的D-二聚体在溶栓前后没有明显变化(各组P＞0.05).溶栓后r-Sak大剂量组有1例死亡,病理检查在其顶叶脑实质见出血灶,其余动物均存活.结论 ①在犬脑梗死的超急性期,r-Sak动脉内溶栓治疗有效、可行,r-Sak对含少量血小板的白色血栓有显著溶栓作用,剂量大或等于10000 u/kg时血管再通率高,剂量再增加出血风险加大;②r-Sak在有效剂量范围内不激活犬的系统纤溶,但对犬的凝血系统影响较大.     

新型低抗原性葡激酶的构建、表达及功能分析

目的:降低野生型葡激酶(wild-type staphylokinase,wt-SAK)的抗原性,获得新型溶栓剂.方法:利用生物信息学分析野生型SAK抗原表位,将其分子内主要的抗原决定簇编码序列定点突变为丙氨酸密码子,将其N端抗原性较强的前10位氨基酸缺失.经过筛选从系列突变体中得到突变体NSAKV.结果:生物信息学分析突变后分子抗原性,结果表明其主要抗原表位消失.该突变体(NSAKV)与原核表达载体pET17b重组后,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导获得高效表达,NSAKV占全菌总蛋白的40%～50%,以可溶性形式存在.经进一步纯化,纯度达98%以上,分子量与理论值相符.比活性2.616×104 AU/mg.经ELISA法和溶圈法测定,NSAKV与wt-SAK制备的免抗wt-SAK抗血清的免疫反应性显著降低,经抗血清温育后wt-SAK活性下降程度远高于NSAKV.结论:突变体(NSAKV)保持了野生型SAK的活性,同时抗原性下降.     

重症急性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶和益活清胰汤的干预作用

目的：研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌NF-κB的活化及葡激酶的干预作用。方法：63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、对照组（n=27）、葡激酶合用益活清胰汤治疗组（n=27）,SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量,RT-PCR检测心肌NF-κBmRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,HE染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果：术后6h大鼠心肌NF-κBmRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,治疗组用药后心肌NF-κBmRNA及蛋白表达下调,与对照组相比（P〈0.05）,血TNF-α、IL-6明显下降,与对照组相比（P〈0.05）,治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。结论：SAP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关,益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

Synergetic Effect of Yihuo Qingyi Decoction (益活凊胰汤) and Recombinant Staphylokinase in Treatment of Severe Acute Pancreatitis of Rats

Objective: To investigate the effect of recombinant staphylokinase (r-Sak) and the Chinese medicine Yihuo Qingyi Decoction (益活凊胰汤 Herbal decoction for severe acute pancreatitis) in the treatment of the severe acute pancreatitis (SAP) in rats, and to observe the synergistic effect of the two. Methods: One hundred and sixty-two adult male SD rats with the body mass of 250–280 g were randomly divided into the following 5 groups: sham operation group (n=18), control group (n=36), Yihuo Qingyi Decoction treatmen...     

Thrombolytic efficacy of native recombinant staphylokinase on femoral artery thrombus of rabbits

AIM: To investigate the thrombolytic efficacy, ideal dosage and administration of native recombinant staphylokinase (r-SAK). METHODS: Forty New Zealand rabbits were randomly assigned into the control, r-SAK low-dose, medial-dose, high dose, single bolus, allied therapy, recombinant streptokinase (r-SK) and urokinase (UK) groups. The right femoral artery thrombosis models were made by balloon injury, and 120 min after the injury, the thrombolytic agents were infused through the rabbits' parallel-ear vein. RESULTS: (1) 2 h after balloon injury, the pulse pressures of the right femoral arteries reduced to 0 or less than 10% of that of left femoral arteries in all groups; (2) after thrombolytic therapy, the pulse pressures in some of the femoral arteries markedly enhanced to more than 50% of that of left femoral arteries; (3) the reopening rates in the r-SAK medial and high dose groups were significantly higher than that of the control. The reopening rate of the same dose native r-SAK was significant higher than that of UK and r-SK; (4) the patency score of the right femoral arteries tended to be better in the r-SAK medial and high-dose groups than that of the low-dose group, and the time to reopening in the allied therapy group tended to be shorter. CONCLUSION: (1) r-SAK has a definite thrombolytic effect on the femoral artery thrombus of rabbits; (2) single bolus is an effective manner of r-SAK therapy, and r-SAK allied therapy with heparin may shorten the time to recanalization; (3) the efficacy of the same dose native r-SAK was superior to that of r-SK and UK.